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人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库
1
作者
田增遂
琦祖和
薛越强
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2002年第2期86-90,共5页
目的 以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成 ,要用于探查这一突变基因致病的分子机制 ,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常 ,是重要的环节之一。cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段 ...
目的 以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成 ,要用于探查这一突变基因致病的分子机制 ,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常 ,是重要的环节之一。cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段 ,而cDNA文库更是获取全长基因所必须。方法 自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA ,再分离mRNA ,逆转录制备cDNA后 ,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分 ,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因 ,克隆入pGEM T载体后 ,制备削减文库。未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体 ,制备基因表达文库。结果和结论 自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约 4 0 0个削减克隆 ,测定了部分克隆的序列 ,并进行同源性比较。λgt11 cDNA文库滴度 1 7× 10 7pfu ml,随机测定的克隆其插入片段长约 5 0 0bp以上。
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关键词
人载脂蛋白E7
转基因小鼠
肾脏
cDNA削减文库
CDNA文库
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职称材料
题名
人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库
1
作者
田增遂
琦祖和
薛越强
机构
中国医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学室
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2002年第2期86-90,共5页
基金
攀登计划项目
文摘
目的 以人apoE7基因制备的高脂血症转基因小鼠模型已建成 ,要用于探查这一突变基因致病的分子机制 ,首先揭示人apoE7在小鼠体内诱发了那些基因的表达异常 ,是重要的环节之一。cDNA削减文库是寻找异常高表达的已知和未知基因有效的手段 ,而cDNA文库更是获取全长基因所必须。方法 自正常小鼠与转基因小鼠肾脏同时提取总RNA ,再分离mRNA ,逆转录制备cDNA后 ,用两次分子杂交削除转基因鼠cDNA中与正常小鼠相同的部分 ,再用PCR与择需PCR法扩增转基因鼠特异的基因 ,克隆入pGEM T载体后 ,制备削减文库。未经削减的转基因小鼠cDNA克隆入λgt11载体 ,制备基因表达文库。结果和结论 自高脂血症转基因小鼠肾脏构建的削减文库得到约 4 0 0个削减克隆 ,测定了部分克隆的序列 ,并进行同源性比较。λgt11 cDNA文库滴度 1 7× 10 7pfu ml,随机测定的克隆其插入片段长约 5 0 0bp以上。
关键词
人载脂蛋白E7
转基因小鼠
肾脏
cDNA削减文库
CDNA文库
Keywords
Hybridization
Polymerage chain reaction
library
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
R－332 [医药卫生]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人载脂蛋白E7转基因小鼠肾脏cDNA削减文库与cDNA文库
田增遂
琦祖和
薛越强
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2002
0
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