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人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定
被引量:
1
1
作者
柯昌兴
王剑松
+5 位作者
胡明宇
毕城伟
陈慧诚
刘龙丁
颜汝平
詹辉
《中国全科医学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第15期1656-1659,共4页
目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘...
目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘肽(GST)标签琼脂糖4B亲和柱层析、纯化蛋白,CellTiter96AQueous细胞增殖检测法(MTS)检测K5对ECV304增殖影响。结果 PCR扩增得到282bp片段,并成功插入pGEX-5X-1质粒,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下工程菌表达了特异性融合蛋白,经凝血酶酶切后得到分子量约为12kD的K5蛋白;K5蛋白能特异性抑制ECV304增殖,抑制率最高蛋白浓度为5ng/L。结论含重组质粒pGEX-5X-1/K5大肠杆菌表达产物量多且易纯化,为包括肿瘤在内的病理性血管增生疾病抗血管生成药物开发做了积极的尝试。
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关键词
纤溶酶原
Kringle5基因
融合蛋白
基因
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题名
人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定
被引量:
1
1
作者
柯昌兴
王剑松
胡明宇
毕城伟
陈慧诚
刘龙丁
颜汝平
詹辉
机构
昆明
医学
院第二附属医院泌尿外科
云南省泌尿外科
研究所
中国医学科学院医学生物学研究所病毒免疫室
出处
《中国全科医学》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第15期1656-1659,共4页
基金
云南省卫生科技计划项目(2009NS068)
昆明医学院博士创新基金资助(KM2008D04)
文摘
目的构建能够表达分泌性人纤溶酶原krinle5(K5)的大肠杆菌工程菌,优化表达并鉴定其抗人血管内皮细胞(ECV)304的生物活性。方法从人膀胱癌组织中提取总RNA,RT-PCR扩增K5基因,构建原核表达载体pGEX-5X-1/K5,运用工程菌表达蛋白。带谷胱甘肽(GST)标签琼脂糖4B亲和柱层析、纯化蛋白,CellTiter96AQueous细胞增殖检测法(MTS)检测K5对ECV304增殖影响。结果 PCR扩增得到282bp片段,并成功插入pGEX-5X-1质粒,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下工程菌表达了特异性融合蛋白,经凝血酶酶切后得到分子量约为12kD的K5蛋白;K5蛋白能特异性抑制ECV304增殖,抑制率最高蛋白浓度为5ng/L。结论含重组质粒pGEX-5X-1/K5大肠杆菌表达产物量多且易纯化,为包括肿瘤在内的病理性血管增生疾病抗血管生成药物开发做了积极的尝试。
关键词
纤溶酶原
Kringle5基因
融合蛋白
基因
Keywords
Plasminogen
Kringle5
Fusion protein
Genes
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
R737.14 [医药卫生—肿瘤]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人膀胱癌组织Kringle 5基因的克隆、优化表达、纯化及活性鉴定
柯昌兴
王剑松
胡明宇
毕城伟
陈慧诚
刘龙丁
颜汝平
詹辉
《中国全科医学》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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