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荧光素酶在蛋白质相互作用研究中的应用
被引量:
4
1
作者
宋晓菡
王楠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期27-34,共8页
蛋白质相互作用参与细胞的多项生理活动,是生命科学研究的一个重要领域。化学发光,特别是基于生物酶的化学发光即生物发光,提供了极灵敏的检测信号,因而在实际应用中具有诸多优势。荧光素酶如萤火虫荧光素酶、细菌荧光素酶、海肾荧光素...
蛋白质相互作用参与细胞的多项生理活动,是生命科学研究的一个重要领域。化学发光,特别是基于生物酶的化学发光即生物发光,提供了极灵敏的检测信号,因而在实际应用中具有诸多优势。荧光素酶如萤火虫荧光素酶、细菌荧光素酶、海肾荧光素酶,以及近年来出现的几种低分子量荧光素酶,具有不同的酶催化特性及理化特征。它们应用于蛋白质片段互补与共振能量转移技术等各种生化检测方法,为观察蛋白质相互作用提供了更安全便捷的手段,拓宽了蛋白质相互作用检测技术的适用范围。本文综述了常用荧光素酶的特征和它们在各种蛋白质相互作用检测方法中使用的原理、策略及其适用性。
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关键词
生物发光
荧光素酶
蛋白质相互作用
片段互补
生物发光共振能量转移
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职称材料
睡眠障碍与阿尔采末病相关性研究进展
被引量:
3
2
作者
董静文
史源
张建军
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1189-1193,共5页
睡眠障碍系指睡眠-觉醒过程中表现出来的各种功能障碍,包括各种原因导致的失眠、过度嗜睡、睡眠呼吸障碍以及睡眠行为异常。睡眠障碍影响脑内β淀粉样蛋白(amyloid beta protein,Aβ)的正常代谢,加速Aβ沉积。阿尔采末病(Alzheimer'...
睡眠障碍系指睡眠-觉醒过程中表现出来的各种功能障碍,包括各种原因导致的失眠、过度嗜睡、睡眠呼吸障碍以及睡眠行为异常。睡眠障碍影响脑内β淀粉样蛋白(amyloid beta protein,Aβ)的正常代谢,加速Aβ沉积。阿尔采末病(Alzheimer's disease,AD)患者常伴有睡眠障碍,AD患者的睡眠障碍会随着AD病情的发展而加重,对认知损伤、功能衰退都有一定影响。睡眠障碍与AD相互作用,形成正反馈环,严重危害机体健康。该文结合近来研究结果,对目前睡眠障碍与AD的相关研究及AD睡眠障碍药物治疗现状进行综述。
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关键词
睡眠障碍
阿尔采末病
淀粉样蛋白
昼夜节律
药物治疗
药物作用
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职称材料
食欲刺激素对乙酸致大鼠胃损伤的保护作用及机制
被引量:
1
3
作者
袁月
姜剑伟
+2 位作者
唐波
王贵彬
张建军
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2022年第3期177-184,共8页
目的 探究食欲刺激素(ghrelin)对乙酸诱导大鼠的保护作用及机制。方法 Wistar大鼠胃浆膜下微量注射30μL乙酸制备慢性胃损伤模型,假手术组仅打开腹腔后缝合。模型+食欲刺激素组大鼠ip给予食欲刺激素30μg·kg^(-1),每日2次。分别在...
目的 探究食欲刺激素(ghrelin)对乙酸诱导大鼠的保护作用及机制。方法 Wistar大鼠胃浆膜下微量注射30μL乙酸制备慢性胃损伤模型,假手术组仅打开腹腔后缝合。模型+食欲刺激素组大鼠ip给予食欲刺激素30μg·kg^(-1),每日2次。分别在连续给药第3,6和9天(D3,D6和D9)后,每组4只取胃测量溃疡面积;免疫组化法检测大鼠胃溃疡周围胃组织中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞比例,ELISA测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)以及溃疡周围胃组织中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量,NO合酶(NOS)试剂盒检测血清中诱导型NO合酶(iNOS)活性,Western印迹法测定胃溃疡周围胃组织中iNOS和内皮型NO合酶(eNOS)表达水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠D3胃展开可见穿孔样溃疡,D6胃溃疡创口面积未见明显缩小,D9溃疡创口面积开始缩小;与模型组相比,模型+食欲刺激素组D3大鼠胃溃疡处即形成新生基底组织,D6和D9胃溃疡创口面积显著缩小(P<0.05,P<0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠D3溃疡周围胃组织中无PCNA阳性细胞,D6和D9呈增加趋势;与模型组相比,模型+食欲刺激素组大鼠D3胃溃疡周围组织中PCNA阳性细胞比例较高,D6和D9进一步增加。与假手术组相比,模型组大鼠血浆中IL-1β的含量显著增加(D3和D6,P<0.01),iNOS活性显著增加(D3,D6和D9,P<0.01),溃疡周围胃组织中IL-1β含量(D3和D6,P<0.01)和TNF-α含量(D3,P<0.01;D6,P<0.05)显著增加,iNOS蛋白表达显著增加(D3,D6和D9,P<0.01),VEGF含量显著降低(D3,D6和D9,P<0.01),而eNOS蛋白表达先降低(D3,P<0.05)后增加(D9,P<0.01);与模型组相比,模型+食欲刺激素组大鼠血浆中IL-1β含量显著降低(D3和D6,P<0.01),iNOS活性显著降低(D6和D9,P<0.01),溃疡周围胃组织中IL-1β和TNF-α含量均显著降低(D3和D6,P<0.01),iNOS蛋白表达显著降低(D3,P<0.01;D6,P<0.05;D9,P<0.01),VEGF含量显著增加(D3,D6和D9,P<0.01)eNOS蛋白表达先增加(D3,P<0.01),后降低(D9,P<0.01)。结论 食欲刺激素对乙酸致大鼠胃损伤有显著修复作用,其作用机制可能与抑制IL-1β/iNOS炎性通路有关,还可能通过VEGF/eNOS通路,从胃溃疡早期开始加速胃溃疡周围组织中血管和组织新生,从而共同促进胃损伤的修复。
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关键词
食欲刺激素
胃溃疡
白细胞介素1Β
肿瘤坏死因子Α
NO合酶
血管内皮生长因子
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职称材料
ThiS可能作为一个原核翻译后修饰分子通过二硫键结合细胞蛋白(英文)
4
作者
许建
刘力力
+1 位作者
闫征
王楠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期685-690,共6页
泛素及其相关蛋白是真核细胞中广泛存在的结构高度保守的一类小分子蛋白,参与蛋白翻译后修饰.尽管在少数原核种属含有Pupylation这样的翻译后修饰,在原核细胞中尚未发现通用的泛素样修饰系统.ThiS是原核细胞广泛存在的泛素样小蛋白分子...
泛素及其相关蛋白是真核细胞中广泛存在的结构高度保守的一类小分子蛋白,参与蛋白翻译后修饰.尽管在少数原核种属含有Pupylation这样的翻译后修饰,在原核细胞中尚未发现通用的泛素样修饰系统.ThiS是原核细胞广泛存在的泛素样小蛋白分子,它作为硫转运蛋白参与辅助因子的合成.当与靶蛋白融合重组表达时,ThiS可降低靶蛋白在大肠杆菌中的稳定性.本研究旨在探讨ThiS是否可能在原核细胞中参与翻译后修饰.ThiS在大肠杆菌中重组表达时,它可与细胞蛋白游离巯基发生共价结合,但与真核细胞泛素修饰不同,ThiS是通过12位半胱氨酸的游离巯基与蛋白形成二硫键,而不是通过C端活化的硫代羧基的转化过程发生共价结合.在细胞内,氧化应激可诱导ThiS与蛋白的共价结合.结果提示,ThiS在大肠杆菌中与细胞蛋白的结合,可能与真核细胞泛素化修饰在功能上存在进化联系;原核细胞中这种ThiS的结合形式可能代表一种古老的原核泛素样修饰方式.
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关键词
原核生物
硫转运蛋白
翻译后修饰
二硫键
氧化应激
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职称材料
黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选体系的建立
被引量:
9
5
作者
闫祯昕
尹非
+3 位作者
李雪晨
姜楠
田金英
叶菲
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1471-1477,共7页
目的建立黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制剂筛选体系。方法应用理化法,测定体外XOD活性、血尿酸、血清XOD活性、组织XOD活性及肝肾功能有关血液指标;病理分析肝脏肾脏的损伤情况。结果选择牛奶来源XOD3U·L^-1,黄嘌呤(Xanth...
目的建立黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制剂筛选体系。方法应用理化法,测定体外XOD活性、血尿酸、血清XOD活性、组织XOD活性及肝肾功能有关血液指标;病理分析肝脏肾脏的损伤情况。结果选择牛奶来源XOD3U·L^-1,黄嘌呤(Xanthine,XA)50μmol·L^-1,37℃,pH7.4,20min为XOD抑制剂体外高通量筛选的最适条件。单次灌胃次黄嘌呤联合皮下注射氧嗪酸钾诱导ICR小鼠,血尿酸水平一过性升高;以血尿酸变化曲线和血尿酸-时间曲线下面积评价急性高尿酸血症小鼠模型。ICR小鼠连续皮下注射氧嗪酸钾血尿酸平稳升高,成模率约70%;以血尿酸水平评价慢性高尿酸血症小鼠模型。上述2种模型动物的血清和组织XOD活性均未见明显变化,肝脏肾脏均未见明显损伤。结论XOD抑制剂体外筛选方法与急性高尿酸血症小鼠模型、慢性高尿酸血症小鼠模型等体内实验方法相互验证,形成基于分子靶点XOD的抗高尿酸血症药物研发的实验体系。
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关键词
黄嘌呤氧化酶
高尿酸血症
抑制剂
高通量筛选
急性高尿酸血症小鼠模型
慢性高尿酸血症小鼠模型
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职称材料
题名
荧光素酶在蛋白质相互作用研究中的应用
被引量:
4
1
作者
宋晓菡
王楠
机构
中国医学科学院
&
北京协和医学院
药物
研究所
新药
作用
机制
研究与
药效
评价
北京市
重点
实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第1期27-34,共8页
基金
北京市自然科学基金项目(No.7162134)资助~~
文摘
蛋白质相互作用参与细胞的多项生理活动,是生命科学研究的一个重要领域。化学发光,特别是基于生物酶的化学发光即生物发光,提供了极灵敏的检测信号,因而在实际应用中具有诸多优势。荧光素酶如萤火虫荧光素酶、细菌荧光素酶、海肾荧光素酶,以及近年来出现的几种低分子量荧光素酶,具有不同的酶催化特性及理化特征。它们应用于蛋白质片段互补与共振能量转移技术等各种生化检测方法,为观察蛋白质相互作用提供了更安全便捷的手段,拓宽了蛋白质相互作用检测技术的适用范围。本文综述了常用荧光素酶的特征和它们在各种蛋白质相互作用检测方法中使用的原理、策略及其适用性。
关键词
生物发光
荧光素酶
蛋白质相互作用
片段互补
生物发光共振能量转移
Keywords
bioluminescence
luciferase
protein-protein interactions
fragment complementation
bioluminescence resonance energy transfer
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
睡眠障碍与阿尔采末病相关性研究进展
被引量:
3
2
作者
董静文
史源
张建军
机构
中国医学科学院
·
北京协和医学院
药物
研究所
新药
作用
机制
研究与
药效
评价
北京市
重点
实验室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期1189-1193,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No 81173529)
文摘
睡眠障碍系指睡眠-觉醒过程中表现出来的各种功能障碍,包括各种原因导致的失眠、过度嗜睡、睡眠呼吸障碍以及睡眠行为异常。睡眠障碍影响脑内β淀粉样蛋白(amyloid beta protein,Aβ)的正常代谢,加速Aβ沉积。阿尔采末病(Alzheimer's disease,AD)患者常伴有睡眠障碍,AD患者的睡眠障碍会随着AD病情的发展而加重,对认知损伤、功能衰退都有一定影响。睡眠障碍与AD相互作用,形成正反馈环,严重危害机体健康。该文结合近来研究结果,对目前睡眠障碍与AD的相关研究及AD睡眠障碍药物治疗现状进行综述。
关键词
睡眠障碍
阿尔采末病
淀粉样蛋白
昼夜节律
药物治疗
药物作用
Keywords
sleep disorders Alzheimer's disease amyloid cir-cadian rhythm drug therapy drug effects
分类号
R-05 [医药卫生]
R338.63 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
食欲刺激素对乙酸致大鼠胃损伤的保护作用及机制
被引量:
1
3
作者
袁月
姜剑伟
唐波
王贵彬
张建军
机构
中国医学科学院
北京协和医学院
药物
研究所
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2022年第3期177-184,共8页
基金
国家自然科学基金(81773715)
国家自然科学基金(81630094)
国家科技重大专项(2018ZX097110010-001-012)。
文摘
目的 探究食欲刺激素(ghrelin)对乙酸诱导大鼠的保护作用及机制。方法 Wistar大鼠胃浆膜下微量注射30μL乙酸制备慢性胃损伤模型,假手术组仅打开腹腔后缝合。模型+食欲刺激素组大鼠ip给予食欲刺激素30μg·kg^(-1),每日2次。分别在连续给药第3,6和9天(D3,D6和D9)后,每组4只取胃测量溃疡面积;免疫组化法检测大鼠胃溃疡周围胃组织中增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞比例,ELISA测定血清中白细胞介素1β(IL-1β)以及溃疡周围胃组织中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的含量,NO合酶(NOS)试剂盒检测血清中诱导型NO合酶(iNOS)活性,Western印迹法测定胃溃疡周围胃组织中iNOS和内皮型NO合酶(eNOS)表达水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠D3胃展开可见穿孔样溃疡,D6胃溃疡创口面积未见明显缩小,D9溃疡创口面积开始缩小;与模型组相比,模型+食欲刺激素组D3大鼠胃溃疡处即形成新生基底组织,D6和D9胃溃疡创口面积显著缩小(P<0.05,P<0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠D3溃疡周围胃组织中无PCNA阳性细胞,D6和D9呈增加趋势;与模型组相比,模型+食欲刺激素组大鼠D3胃溃疡周围组织中PCNA阳性细胞比例较高,D6和D9进一步增加。与假手术组相比,模型组大鼠血浆中IL-1β的含量显著增加(D3和D6,P<0.01),iNOS活性显著增加(D3,D6和D9,P<0.01),溃疡周围胃组织中IL-1β含量(D3和D6,P<0.01)和TNF-α含量(D3,P<0.01;D6,P<0.05)显著增加,iNOS蛋白表达显著增加(D3,D6和D9,P<0.01),VEGF含量显著降低(D3,D6和D9,P<0.01),而eNOS蛋白表达先降低(D3,P<0.05)后增加(D9,P<0.01);与模型组相比,模型+食欲刺激素组大鼠血浆中IL-1β含量显著降低(D3和D6,P<0.01),iNOS活性显著降低(D6和D9,P<0.01),溃疡周围胃组织中IL-1β和TNF-α含量均显著降低(D3和D6,P<0.01),iNOS蛋白表达显著降低(D3,P<0.01;D6,P<0.05;D9,P<0.01),VEGF含量显著增加(D3,D6和D9,P<0.01)eNOS蛋白表达先增加(D3,P<0.01),后降低(D9,P<0.01)。结论 食欲刺激素对乙酸致大鼠胃损伤有显著修复作用,其作用机制可能与抑制IL-1β/iNOS炎性通路有关,还可能通过VEGF/eNOS通路,从胃溃疡早期开始加速胃溃疡周围组织中血管和组织新生,从而共同促进胃损伤的修复。
关键词
食欲刺激素
胃溃疡
白细胞介素1Β
肿瘤坏死因子Α
NO合酶
血管内皮生长因子
Keywords
ghrelin
gastric ulcer
interleukin-1β
tumor necrosis factor-α
nitric oxide synthase
vascular endothelial growth factor
分类号
R975 [医药卫生—药品]
R963 [医药卫生—微生物与生化药学]
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职称材料
题名
ThiS可能作为一个原核翻译后修饰分子通过二硫键结合细胞蛋白(英文)
4
作者
许建
刘力力
闫征
王楠
机构
中国医学科学院
北京协和医学院
药物
研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期685-690,共6页
基金
Supported by National Science&Technology Major Project“New Drug Innovation and Production Program”of China(General platform construction,No:2012ZX09301002-001-002 and 2012ZX09301002-002-006)~~
文摘
泛素及其相关蛋白是真核细胞中广泛存在的结构高度保守的一类小分子蛋白,参与蛋白翻译后修饰.尽管在少数原核种属含有Pupylation这样的翻译后修饰,在原核细胞中尚未发现通用的泛素样修饰系统.ThiS是原核细胞广泛存在的泛素样小蛋白分子,它作为硫转运蛋白参与辅助因子的合成.当与靶蛋白融合重组表达时,ThiS可降低靶蛋白在大肠杆菌中的稳定性.本研究旨在探讨ThiS是否可能在原核细胞中参与翻译后修饰.ThiS在大肠杆菌中重组表达时,它可与细胞蛋白游离巯基发生共价结合,但与真核细胞泛素修饰不同,ThiS是通过12位半胱氨酸的游离巯基与蛋白形成二硫键,而不是通过C端活化的硫代羧基的转化过程发生共价结合.在细胞内,氧化应激可诱导ThiS与蛋白的共价结合.结果提示,ThiS在大肠杆菌中与细胞蛋白的结合,可能与真核细胞泛素化修饰在功能上存在进化联系;原核细胞中这种ThiS的结合形式可能代表一种古老的原核泛素样修饰方式.
关键词
原核生物
硫转运蛋白
翻译后修饰
二硫键
氧化应激
Keywords
stressprokaryote
sulfur-carrier protein
post-translational modification
disulfide
oxidative
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选体系的建立
被引量:
9
5
作者
闫祯昕
尹非
李雪晨
姜楠
田金英
叶菲
机构
中国医学科学院北京协和医学院药物研究所新药作用机制研究与药效评价北京市重点实验室
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1471-1477,共7页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(No 81600546)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程团队项目(No CIFMS-2016-I2M-3-012)
国家“重大新药创制”科技重大专项(No 2018ZX09711001-003-005)
文摘
目的建立黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制剂筛选体系。方法应用理化法,测定体外XOD活性、血尿酸、血清XOD活性、组织XOD活性及肝肾功能有关血液指标;病理分析肝脏肾脏的损伤情况。结果选择牛奶来源XOD3U·L^-1,黄嘌呤(Xanthine,XA)50μmol·L^-1,37℃,pH7.4,20min为XOD抑制剂体外高通量筛选的最适条件。单次灌胃次黄嘌呤联合皮下注射氧嗪酸钾诱导ICR小鼠,血尿酸水平一过性升高;以血尿酸变化曲线和血尿酸-时间曲线下面积评价急性高尿酸血症小鼠模型。ICR小鼠连续皮下注射氧嗪酸钾血尿酸平稳升高,成模率约70%;以血尿酸水平评价慢性高尿酸血症小鼠模型。上述2种模型动物的血清和组织XOD活性均未见明显变化,肝脏肾脏均未见明显损伤。结论XOD抑制剂体外筛选方法与急性高尿酸血症小鼠模型、慢性高尿酸血症小鼠模型等体内实验方法相互验证,形成基于分子靶点XOD的抗高尿酸血症药物研发的实验体系。
关键词
黄嘌呤氧化酶
高尿酸血症
抑制剂
高通量筛选
急性高尿酸血症小鼠模型
慢性高尿酸血症小鼠模型
Keywords
xanthine oxidase
hyperuricemia
inhibitor
high throughput screening
acute hyperuricemia mouse model
chronic hyperuricemia mouse model
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.47 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
荧光素酶在蛋白质相互作用研究中的应用
宋晓菡
王楠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
4
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职称材料
2
睡眠障碍与阿尔采末病相关性研究进展
董静文
史源
张建军
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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职称材料
3
食欲刺激素对乙酸致大鼠胃损伤的保护作用及机制
袁月
姜剑伟
唐波
王贵彬
张建军
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
北大核心
2022
1
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职称材料
4
ThiS可能作为一个原核翻译后修饰分子通过二硫键结合细胞蛋白(英文)
许建
刘力力
闫征
王楠
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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职称材料
5
黄嘌呤氧化酶抑制剂筛选体系的建立
闫祯昕
尹非
李雪晨
姜楠
田金英
叶菲
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
9
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