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抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究
1
作者
孙力超
冉宇靓
+4 位作者
遇珑
胡海
钟星
孙立新
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期321-325,共5页
目的：研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子。方法：以人肝窦内皮细胞（human liver sinusoidal endothelial cell,HLSEC）免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选...
目的：研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子。方法：以人肝窦内皮细胞（human liver sinusoidal endothelial cell,HLSEC）免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库。采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体。提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白。结果：HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗（黏附抑制率为51%）命名为12B6,该单抗在5～200μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46000。结论：建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础。
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关键词
结肠癌
肝窦内皮细胞
黏附
功能性单克隆抗体
抗原
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职称材料
microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响
被引量：
12
2
作者
彭亮
潘健
+4 位作者
胡海
孙力超
周转
冉宇靓
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第5期417-421,共5页
目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823...
目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a(25、50、100、150nmol/L)转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果:化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a(100nmol/L)的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为(88.34±0.61)%和(56.02±3.13)%。结论:转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。
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关键词
胃癌细胞
微小RNA-10a
迁移
侵袭
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职称材料
靶向HER2的抑制胃癌细胞功能性单抗的制备和鉴定
被引量：
1
3
作者
孙立新
冉宇靓
+4 位作者
胡海
遇珑
周转
赵西路
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第1期14-19,共6页
目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆。方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/c小鼠,免...
目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆。方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Westernblotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况。结果:细胞融合产生1442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1κ类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位。细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80μg/ml时抑制率可达34.8%。免疫组化显示15C15能识别部分石蜡包埋的HER2抗原,Westernblotting显示15C15不能结合电泳条件下变性为线形结构的HER2抗原。结论:建立了高通量制备、筛选和鉴定靶向HER2抑制胃癌细胞生长的功能性单抗技术,获得1株可特异识别HER2抗原的明显抑制胃癌细胞增殖的IgG1类单抗15C15,具有人源化改造后用于治疗的应用潜力。
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关键词
胃癌
NCI
N87细胞系
人表皮生长因子受体-2
单克隆抗体
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职称材料
题名
抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究
1
作者
孙力超
冉宇靓
遇珑
胡海
钟星
孙立新
杨治华
机构
中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所细胞及分子生物学研究室
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第4期321-325,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.30570818)
国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(No.2002CB513106)~~
文摘
目的：研制抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性单抗,鉴定该单抗识别的抗原分子。方法：以人肝窦内皮细胞（human liver sinusoidal endothelial cell,HLSEC）免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,采用甲基纤维素选择培养液培养,制备抗HLSEC的单克隆抗体库。采用免疫荧光染色、黏附实验等方法筛选、鉴定能抑制结肠癌Ls174T细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性单克隆抗体。提取肝窦内皮细胞膜蛋白,采用Western blotting方法鉴定单抗识别的功能性抗原蛋白。结果：HLSEC免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合后产生1440个杂交瘤株,获得119株产生抗HLSEC抗体的阳性克隆,其中20株能显著抑制具有肝转移能力的结肠癌Ls174T细胞与HLSEC的黏附;其中15株为IgM型,3株为IgG型,2株测不到重链;其中1株抗黏附能力最强的单抗（黏附抑制率为51%）命名为12B6,该单抗在5～200μg/ml范围内显著阻断HLSEC与Ls174T的黏附,且呈剂量依赖性;单抗12B6所识别的HLSEC抗原蛋白的相对分子质量为46000。结论：建立了抗HLSEC单克隆抗体库,获得了20株具有抑制结肠癌细胞与肝窦血管内皮细胞黏附的功能性抗体,初步鉴定了一种可能参与结肠癌肝转移的黏附分子,为结肠癌的组织器官特异转移机制及靶向治疗的研究奠定了一定的基础。
关键词
结肠癌
肝窦内皮细胞
黏附
功能性单克隆抗体
抗原
Keywords
colon cancer
liver sinusoidal endothelial cell
adhesion
functional monoclonal antibody
antigen
分类号
R735.3 [医药卫生—肿瘤]
R730.54 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响
被引量：
12
2
作者
彭亮
潘健
胡海
孙力超
周转
冉宇靓
杨治华
机构
中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所细胞及分子生物学研究室
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第5期417-421,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30570818)
国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(No.2009CB521804)~~
文摘
目的:研究人微小RNA-10a(microRNA-10a,miR-10a)对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Transwell小室对胃癌细胞系BGC823进行侵袭筛选,获得高侵袭能力的BGC823-P3亚系;通过miRNA芯片差异分析发现miR-10a在高侵袭能力BGC823-P3细胞的表达显著高于BGC823细胞。通过化学方法合成成熟型的人miR-10a,以脂质体包裹合成的miR-10a(25、50、100、150nmol/L)转染BGC823细胞,并设空白转染、无关序列转染对照组;Real-timePCR分别检测以上各组细胞miR-10a的表达。采用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测miR-10a对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-10a对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-10a对细胞的迁移和侵袭能力的影响。结果:化学合成的成熟型miR-10a转染后,BGC823细胞miR-10a表达的提高以100nmol/LmiR-10a转染组最佳,较无关序列转染组提高了2.06倍。miR-10a(100nmol/L)的转染对胃癌细胞系BGC823的增殖和凋亡无明显影响,但对BGC823的迁移和侵袭能力有明显的促进作用,促进率分别为(88.34±0.61)%和(56.02±3.13)%。结论:转染成熟型人miR-10a能使胃癌细胞系BGC823中miR-10a的表达提高,并能显著促进胃癌细胞系BGC823的迁移和侵袭。
关键词
胃癌细胞
微小RNA-10a
迁移
侵袭
Keywords
gastric cancer cell
microRNA-10a
migration
invasion
分类号
R735.33 [医药卫生—肿瘤]
R730.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
靶向HER2的抑制胃癌细胞功能性单抗的制备和鉴定
被引量：
1
3
作者
孙立新
冉宇靓
胡海
遇珑
周转
赵西路
杨治华
机构
中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所细胞及分子生物学研究室
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008年第1期14-19,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No30570818)
国家高技术研究发展计划(863)项目(No20060102Z4124)
国家重点基础研究发展规划(973)资助项目(No2002CB513106)~~
文摘
目的:制备可特异识别人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)膜抗原的单克隆抗体,筛选出亲和力较高并对胃癌细胞有明显抑制作用的克隆。方法:以高表达HER2膜抗原的人胃癌细胞系NCI-N87免疫BABL/c小鼠,免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选出HER2反应阳性克隆株,活细胞免疫荧光法检测获得膜阳性克隆株,使用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定抗体亚型,MTT法检测抗体对NCI-N87细胞增殖的抑制,采用与群司珠单抗的夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定单抗结合HER2抗原的表位,免疫组化、Westernblotting进一步检测抗HER2抗体在不同条件下与HER2抗原反应情况。结果:细胞融合产生1442个单个集落的杂交瘤,重组HER2抗原ELISA筛选出HER2反应阳性克隆79株,活细胞免疫荧光检测获得较强膜阳性克隆7株,并测定其亚型,其中命名为15C15的1株属IgG1κ类单抗,免疫竞争及结合实验显示15C15与群司珠人源化抗体识别不同的表位。细胞增殖筛选显示15C15能显著抑制人胃癌NCI-N87细胞的增殖,在80μg/ml时抑制率可达34.8%。免疫组化显示15C15能识别部分石蜡包埋的HER2抗原,Westernblotting显示15C15不能结合电泳条件下变性为线形结构的HER2抗原。结论:建立了高通量制备、筛选和鉴定靶向HER2抑制胃癌细胞生长的功能性单抗技术,获得1株可特异识别HER2抗原的明显抑制胃癌细胞增殖的IgG1类单抗15C15,具有人源化改造后用于治疗的应用潜力。
关键词
胃癌
NCI
N87细胞系
人表皮生长因子受体-2
单克隆抗体
Keywords
gastric carcinoma
NCI-N87 cell line
human epidermal growth factor receptor-2
monoelonal antibody
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
R735 [医药卫生—肿瘤]
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1
抑制结肠癌细胞与肝窦内皮细胞黏附的功能性抗体的初步研究
孙力超
冉宇靓
遇珑
胡海
钟星
孙立新
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008
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2
microRNA-10a对胃癌细胞系BGC823迁移和侵袭能力的影响
彭亮
潘健
胡海
孙力超
周转
冉宇靓
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008
12
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3
靶向HER2的抑制胃癌细胞功能性单抗的制备和鉴定
孙立新
冉宇靓
胡海
遇珑
周转
赵西路
杨治华
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2008
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