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肿瘤细胞CAR表达水平与5型腺病毒转导效率的关系 被引量:2
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作者 王海娟 李云峰 +5 位作者 钱海利 张雪燕 付明 梁萧 詹启敏 林晨 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第6期429-434,共6页
目的:通过体外、体内实验探讨肿瘤细胞柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)表达水平与腺病毒转导效率的关系,为腺病毒相关的生物制剂在临床个体化应用提供实验依据。方法:将载有绿色荧光蛋白的Ad5型腺病毒(Ad.... 目的:通过体外、体内实验探讨肿瘤细胞柯萨奇腺病毒受体(coxsackie adenovirus receptor,CAR)表达水平与腺病毒转导效率的关系,为腺病毒相关的生物制剂在临床个体化应用提供实验依据。方法:将载有绿色荧光蛋白的Ad5型腺病毒(Ad.GFP)以100MOI、200MOI分别感染人食管癌细胞系KYSE510、KYSE150、EC9706、人宫颈癌细胞系HeLa、人卵巢癌细胞系SKOV3、人肝癌细胞系HepG2和人肺癌细胞系A549,感染后48h通过流式细胞术检测Ad—GFP对不同细胞系的转导效率。采用Western blotting方法检测这些细胞中CAR的表达水平。将HeLa、A549、SKOV3、EC9706细胞分别接种于裸鼠腋下,接种细胞数分别为3×10^6、3×10^6、3×10^6、2×10^6,建立裸鼠移植瘤模型。待肿瘤长径达5~7mm时,在裸鼠移植瘤内注射Ad—GFP,每次1×10^9PFU,间隔48h注射第2次。第2次注射后48h处死裸鼠,剖取瘤组织,荧光显微镜观察冰冻切片中GFP的表达情况以判定腺病毒在瘤体内的转导效率,同时用免疫组化法检测瘤组织内的CAR表达水平。结果:200MOIAd—GFP感染A549、HeLa、HepG2、KYSE150细胞48h后分别有92.67%、89.31%、84.98%、74.59%的细胞表达GFP;而SKOV3、KYSE510、EC9706细胞中腺病毒的转导效率明显降低,GFP阳性率分别为30.06%、27.40%、18.93%;各种细胞的CAR蛋白表达水平与腺病毒的转导效率呈正相关。注射Ad—GFP的裸鼠移植瘤组织中可见HeLa、A549瘤组织内有明显的点状绿色荧光,而SKOV3、EC9706瘤组织内表达GFP的细胞数明显少于前两种瘤组织;HeLa、A549裸鼠移植瘤组织内大多数瘤细胞高表达CAR(卅),SKOV3、EC9706移植瘤组织内CAR表达水平较低(+或-),表明瘤体内CAR表达水平与Ad.GFP的转导效率也呈正相关。结论:体内外实验均显示肿瘤细胞的CAR表达水平与5型腺病毒转导效率密切相关。肿瘤患者治疗前检测组织中CAR表达水平有助于规范腺病毒载体的基因治疗药物的个体化使用。 展开更多
关键词 肿瘤 腺病毒 柯萨奇腺病毒受体 基因治疗
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复杂疾病基因定位策略与肿瘤易感基因鉴定 被引量:6
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作者 孙玉琳 赵晓航 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第9期803-810,共8页
对于不存在某单一基因位点经典的孟德尔显性或隐性遗传模式的疾病,称为复杂疾病,肿瘤是最常见的类型之一.目前,以连锁和相关分析为基础的功能克隆、功能候选克隆、定位克隆、定位候选克隆、系统生物学等复杂疾病易感基因定位策略逐渐发... 对于不存在某单一基因位点经典的孟德尔显性或隐性遗传模式的疾病,称为复杂疾病,肿瘤是最常见的类型之一.目前,以连锁和相关分析为基础的功能克隆、功能候选克隆、定位克隆、定位候选克隆、系统生物学等复杂疾病易感基因定位策略逐渐发展起来.其中,系统生物学策略由于整合了从DNA到蛋白质的各个层面的信息,对复杂疾病基因调控网络做出了良好诠释,使其成为最有潜力的方法之一.目前,虽然已有近100种肿瘤/遗传性癌综合症的易感基因被鉴定出来,但未来的复杂疾病易感基因定位工作仍充满了挑战. 展开更多
关键词 复杂疾病 基因定位 肿瘤易感基因
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血浆蛋白质组——人类蛋白质组计划的“探路者” 被引量:11
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作者 王英 赵晓航 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期673-678,共6页
概述了血浆蛋白的研究现状、难点和策略 .血浆是血液中无形的液体成分 ,是一种十分复杂和多样化的基质 ,包含数百万种蛋白质和小分子多肽、盐、类脂、氨基酸和糖等 .血浆蛋白参与机体免疫、凝血 抗凝血、物质运输、营养和对生长信号调... 概述了血浆蛋白的研究现状、难点和策略 .血浆是血液中无形的液体成分 ,是一种十分复杂和多样化的基质 ,包含数百万种蛋白质和小分子多肽、盐、类脂、氨基酸和糖等 .血浆蛋白参与机体免疫、凝血 抗凝血、物质运输、营养和对生长信号调节等多种重要的生理功能 .人体器官的病理变化可导致血浆蛋白在结构和数量上的改变 ,这种特征性的变化对疾病诊断和疗效监测具有十分重要的意义 .然而 ,迄今为止人类对血浆蛋白的了解还十分有限 ,只有很少一部分血浆蛋白被用于常规的临床诊断 .全面而系统地认识健康和疾病状态下血液循环中血浆蛋白的性质 ,会极大地加速对具有疾病诊断和治疗监测作用的血浆标志蛋白的研发 .国际人类蛋白质组组织于 2 0 0 2年首先选择了血浆蛋白质组作为人类蛋白质组首期执行计划之一 ,其初期目标是 :a 比较各种蛋白质组分析技术平台的优点和局限性 ;b 用这些技术平台分析人类血浆和血清的参考样本 ;c 展开更多
关键词 血浆 蛋白质组 人类 血浆蛋白 生物标志 质谱
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一种改进的重复多色荧光原位杂交技术 被引量:1
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作者 杨壹羚 徐昕 +9 位作者 陈虹 李锋 韩亚玲 罗曼莉 吴玉鹏 蔡岩 张钰 詹启敏 吴旻 王明荣 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第5期561-565,共5页
多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法———重... 多色荧光原位杂交技术是在常规荧光原位杂交技术基础上建立的一种染色体分析手段,已广泛应用于肿瘤遗传学的研究,尤其是用于染色体隐匿性重排及复杂核型分析。本研究旨在利用现有实验条件,建立一种可靠的人类全染色体分析方法———重复多色荧光原位杂交技术(repetitive multicolour fluorescence in situ hybridization,RM-FISH)。采用特异的全染色体涂染探针,分别用Cy3、Cy5、FITC3种荧光素直接标记,组合制备4组六色的探针池,对同一染色体片先后进行4次杂交,通过装备了4组滤镜的荧光显微镜捕获信号。RM-FISH技术结合反相DAPI显带对1例原发性食管鳞癌进行核型分析,获得了全部染色体的特异信号。本研究建立的RM-FISH简便、易行,是光谱核型分析的一种较理想的替代技术。 展开更多
关键词 荧光原位杂交 核型 染色体
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