初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋和CD4^＋CD25^-Foxp3^＋T细胞 被引量：1

1

作者 张飚 张烜 +2 位作者 唐福林 朱立平 刘音 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期831-836,共6页

目的:研究初发系统性红斑狼疮患者(Systemic lupus erythematosus,SLE)外周血CD4+T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义。方法:根据SLE疾病活动积分(SLEDAI)将初发SLE患者分为活动组(10例)和不活动组(11例),流式细胞仪检测治疗... 目的:研究初发系统性红斑狼疮患者(Systemic lupus erythematosus,SLE)外周血CD4+T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义。方法:根据SLE疾病活动积分(SLEDAI)将初发SLE患者分为活动组(10例)和不活动组(11例),流式细胞仪检测治疗前后外周血CD4+T细胞中CD25、Foxp3和CD127表达百分率,并对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和anti-ds-DNA相关性进行研究。结果:初发活动组和不活动组SLE患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达百分率分别为(1.91%~6.75%)和(2.74%~7.01%),与正常对照(2.11%~9.90%)相比没有统计学差异(P=0.524,P=0.794);且初发SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞在体外增殖反应和增殖抑制功能与正常对照相比无明显差别(P=0.174,P=0.689);外周血CD4+CD25-Foxp3+T细胞百分率在初发活动组(3.71%~10.94%)和不活动组(2.97%~7.69%)SLE患者均比正常对照(1.01%~3.62%)显著增高(P<0.01和P<0.01);而CD4+CD25+Foxp3-T百分率在初发活动组SLE患者(1.19%~9.23%)显著低于正常对照(2.67%~11.26%)和初发不活动组SLE患者(3.73~8.27%)(P=0.039,P=0.048);与CD4+CD25+Foxp3+T细胞类似,90%左右的CD4+CD25-Foxp3+T细胞不表达或低表达CD127,其百分率与anti-ds-DNA浓度呈正相关,且尽管未达到统计学意义,但激素和免疫抑制治疗后其水平下降。结论:初发未经治疗的SLE患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞数量和功能无明显异常,而CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量增多,与SLE疾病活动相关,可能具有调节功能。 展开更多

关键词 红斑狼疮系统性 CIM CD25 FOXP3 CD127

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免疫重建SCID小鼠B淋巴母细胞瘤模型的建立 被引量：4

2

作者 陈冬青 白连钧 +3 位作者 刘庆丰 崔莲仙 何维 巴德年 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期294-296,T004,共4页

目的在免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficient,SCID)小鼠体内建立人的B淋巴母细胞瘤模型。方法将SCID小鼠随机分为4组,每组7只,分别为:(1)实验组:在每只SCID小鼠的腹腔内接种人外周血单个核细胞(peripheral-bloodmo... 目的在免疫重建的严重联合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficient,SCID)小鼠体内建立人的B淋巴母细胞瘤模型。方法将SCID小鼠随机分为4组,每组7只,分别为:(1)实验组:在每只SCID小鼠的腹腔内接种人外周血单个核细胞(peripheral-bloodmononuclearcells,PBMC)1周后,腹腔接种EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)悬液;(2)不经任何处理的SCID小鼠对照组;(3)腹腔接种人PBMC的SCID小鼠对照组;(4)腹腔接种EBV悬液的SCID小鼠对照组。每日观察小鼠的健康情况,于免疫重建的第5周解剖各组小鼠,观察腹腔各脏器的肿瘤形成情况,并用HE染色、组织化学以及PCR方法鉴定所长肿瘤的特性。结果4周后,在接种EBV的免疫重建SCID小鼠的腹腔中可形成(35±12.5)mm3大小的肿瘤,多位于肝脏,而对照组均未见有肿瘤生长;HE染色表明,所长的肿瘤均为高分化的B淋巴母细胞瘤;组织化学实验表明,肿瘤细胞均可表达CD19、CD20、CD45RA分子和EB病毒编码的蛋白;PCR检测显示,肿瘤组织的DNA在269bp处出现特异的EBV扩增条带。结论成功建立了免疫重建SCID小鼠的人B淋巴母细胞瘤模型,为研究人类肿瘤免疫提供了一个理想的动物模型。 展开更多

关键词 EB病毒 免疫重建 SCID小鼠 人B淋巴母细胞瘤

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免疫复合物对U937细胞和中性粒细胞表面Fc受体表达的调节

3

作者 郭丽华 张伟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期510-514,共5页

目的探讨免疫复合物(ICs)对U937细胞和中性粒细胞表面Fc受体表达的调节。方法将U937细胞或中性粒细胞与各种免疫复合物共同孵育1h后,用流式细胞仪分析细胞表面各种Fc受体的表达情况。结果IgG1ICs和IgG3ICs能上调U937细胞表面FcγRⅡ和Fc... 目的探讨免疫复合物(ICs)对U937细胞和中性粒细胞表面Fc受体表达的调节。方法将U937细胞或中性粒细胞与各种免疫复合物共同孵育1h后,用流式细胞仪分析细胞表面各种Fc受体的表达情况。结果IgG1ICs和IgG3ICs能上调U937细胞表面FcγRⅡ和FcγRⅢ以及中性粒细胞表面的FcγRⅠ和FcαRⅠ的表达。与各类免疫复合物孵育后中性粒细胞表面FcγRⅡ的表达呈降低趋势。结论免疫复合物能调节中性粒细胞和U937细胞Fc受体的表达,其中以IgG1ICs和IgG3ICs最为明显。 展开更多

关键词 免疫复合物 中性粒细胞 U937细胞 FC受体

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6A8α-甘露糖苷酶表达减弱和表达正常鼻咽癌细胞间的差异基因表达 被引量：8

4

作者 陈双玲 时岩 +3 位作者 靳玉兰 刘音 赵方萄 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期305-310,共6页

目的发现因转导反义6A8cDNA致恶性生物学行为减弱的人鼻咽癌细胞CNE-2L2(AS)和野生型细胞(W)间的差异表达基因。方法用DNA微列阵方法比较AS细胞和W细胞基因表达的差异。用Northern印迹和RT-PCR验证所得结果的可靠性。结果与W细胞相比,A... 目的发现因转导反义6A8cDNA致恶性生物学行为减弱的人鼻咽癌细胞CNE-2L2(AS)和野生型细胞(W)间的差异表达基因。方法用DNA微列阵方法比较AS细胞和W细胞基因表达的差异。用Northern印迹和RT-PCR验证所得结果的可靠性。结果与W细胞相比,AS细胞有34个基因的表达上调,有42个基因的表达下调。其表达增强可能对肿瘤恶性行为有抑制作用的基因有P130mRNAfor130Kprotein、TGF-betaIIRalpha、GABBR1、TGFBR1、TNFAIP1、STANIN、E-CADHERIN、CTNNA1、CTNNA2、RFX2及TMPO等,其表达减弱可能对肿瘤恶性行为有抑制作用的基因有CD44、NDRG1、TGFB1、RPS5、LEGUMAI、CBS、CD59及SNRPA1等。Northern印迹和RT-PCR验证了DNA微列阵方法检测的结果。结论与W细胞相比,AS细胞有34个基因表达上调,有42个基因表达下调,某些基因表达的改变可能与AS细胞恶性生物学行为的减弱相关。 展开更多

关键词 DNA微列阵 基因表达 肿瘤 6A8 α-甘露糖苷酶

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CD44表达减弱致人鼻咽癌细胞CNE-2L2体外生长的抑制 被引量：3

5

作者 时岩 田云 +3 位作者 周异群 鞠吉雨 刘音 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期67-72,共6页

目的探讨CD44表达抑制对人鼻咽癌细胞株CNE-2L2生长的影响。方法采用RNA干扰技术抑制细胞CD44表达,基因组PCR检测siRNA整合,Western blot检测CD44表达,CellTiter96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay kit检测细胞生长,PI... 目的探讨CD44表达抑制对人鼻咽癌细胞株CNE-2L2生长的影响。方法采用RNA干扰技术抑制细胞CD44表达,基因组PCR检测siRNA整合,Western blot检测CD44表达,CellTiter96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay kit检测细胞生长,PI染色流式细胞仪检测细胞DNA含量。结果藉逆转录病毒转导入CNE-2L2细胞的siRNA均整合入了细胞基因组DNA。与整合了siegfp的对照细胞相比,整合了siCD44的细胞CD44表达均明显抑制,以整合了siCD44-1或siCD44-2的细胞中抑制最强。整合了siCD44-1或siCD44-2的细胞在培养中的生长明显受抑。细胞DNA含量分析显示野生型细胞、整合了siegfp的细胞、整合了siCD44-1的细胞及整合了siCD44-2的细胞处于G0/G1期的比例分别为44.4%、45.5%、53.9%及53.3%,处于S期的比例分别为39.3%、40.0%、27.1%及28.2%,处于G2/M期的比例分别为16.3%、14.5%、19.0%及18.5%。结论CD44表达减弱抑制了CNE-2L2细胞在培养中的生长,抑制细胞从G0/G1期进入S期,但略促进细胞从S期进入G2/M期。 展开更多

关键词 siRNA CD44 鼻咽癌细胞 生长 DNA含量

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6A8α-甘露糖苷酶表达低下致人鼻咽癌细胞CNE-2L2生长抑制 被引量：3

6

作者 岳玮 史耕先 +1 位作者 白增亮 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期418-422,共5页

目的研究6A8α-甘露糖苷酶与CNE-2L2肿瘤细胞生长的关系。方法用腺相关病毒载体将反义6A8cDNA导入鼻咽癌细胞CNE-2L2。细胞中6A8α-甘露糖苷酶表达情况用单抗6A8a免疫荧光染色、α-甘露糖苷酶活性及ConA结合试验检测。以野生型细胞、转... 目的研究6A8α-甘露糖苷酶与CNE-2L2肿瘤细胞生长的关系。方法用腺相关病毒载体将反义6A8cDNA导入鼻咽癌细胞CNE-2L2。细胞中6A8α-甘露糖苷酶表达情况用单抗6A8a免疫荧光染色、α-甘露糖苷酶活性及ConA结合试验检测。以野生型细胞、转导了空载体或正义6A8的细胞作对照,以MTT、集落形成及裸鼠实验检测肿瘤细胞生长。结果转导反义6A8能抑制CNE-2L2细胞6A8α-甘露糖苷酶表达,6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的CNE-2L2细胞的MTT值、形成集落数及接种裸鼠皮下后所长肿瘤的重量均较对照显著降低或减小P<0.001。结论6A8α-甘露糖苷酶表达低下致人鼻咽癌细胞CNE-2L2生长抑制。 展开更多

关键词 6A8 α-甘露糖苷酶 CNE-2L2细胞 肿瘤生长 鼻咽癌

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喉癌患者树突状细胞的体外培养与鉴定 被引量：1

7

作者 冯云 谭会兵 +3 位作者 苏华 张宝泉 李若凡 何维 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期616-619,I001,共5页

目的体外分离培养喉癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),为DC接种治疗喉恶性肿瘤提供一定理论依据。方法从喉癌患者外周血分离贴壁的单个核细胞,加入GM-CSF和IL-4进行体外培养,以细胞免疫组化的方法鉴定DC的纯度,并行电镜观察;同时以混... 目的体外分离培养喉癌患者外周血来源的树突状细胞(DC),为DC接种治疗喉恶性肿瘤提供一定理论依据。方法从喉癌患者外周血分离贴壁的单个核细胞,加入GM-CSF和IL-4进行体外培养,以细胞免疫组化的方法鉴定DC的纯度,并行电镜观察;同时以混合淋巴细胞增殖反应判定DC的功能。结果体外培养1周后可得到大量悬浮、表面有毛刺的细胞,细胞免疫化学显示抗DC单克隆抗体阳性细胞占30%～60%。以喉癌组织粗制抗原负载DC,可激发自身混合淋巴细胞增殖反应。结论喉癌患者外周血经体外分离培养可得到纯度较高、功能正常的DC。 展开更多

关键词 喉癌 树突状细胞 体外培养 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素-4 喉鳞状细胞癌

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6A8α-甘露糖苷酶表达抑制致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少 被引量：1

8

作者 岳玮 赵方萄 +2 位作者 史耕先 刘音 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期316-319,共4页

目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2细胞与层粘连蛋白的粘附及细胞表面片状伪足的影响。方法Western印迹检测6A8α-甘露糖苷酶的表达。置细胞于层粘连蛋白(laminin)包被的培养板孔中,37℃孵育1h后,用结晶紫染色细胞,用0.1mol/L... 目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对CNE-2L2细胞与层粘连蛋白的粘附及细胞表面片状伪足的影响。方法Western印迹检测6A8α-甘露糖苷酶的表达。置细胞于层粘连蛋白(laminin)包被的培养板孔中,37℃孵育1h后,用结晶紫染色细胞,用0.1mol/L枸橼酸钠/50%乙醇溶解结合到细胞中的染料。测定540nm处的吸光度值(AT),按R=AT/A100×100%计算粘附率(A100为100%粘附值)。扫描电镜观察细胞表面的片状伪足。结果6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的2个克隆细胞株(AS1和AS2)对层粘连蛋白的相对粘附率分别为0.447±0.096与0.533±0.065,而6A8α-甘露糖苷酶表达正常的对照细胞(W、M和S)的相对粘附率分别为0.78±0.035、0.7±0.05和0.80±0.04。两者的差别有生物学意义(P<0.01)。6A8α-甘露糖苷酶表达正常的细胞表面片状伪足丰富,6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞表面的片状伪足基本上消失。结论6A8α-甘露糖苷酶表达抑制可导致人鼻咽癌细胞CNE-2L2与层粘连蛋白粘附减弱及片状伪足减少。 展开更多

关键词 6A8 α-甘露糖苷酶 粘附性 片状伪足

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8B7血影蛋白—血影蛋白家族的一个新成员

9

作者 刘荣 田云 +4 位作者 鞠吉雨 汪燚 周异群 刘音 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期695-699,I0004,共6页

目的分析8B7cDNA编码的蛋白质的性质及其在细胞中的定位。方法用Blastn、Blastp及TMpred分析8B7cDNA编码的蛋白质的性质。采用Northern印迹分析8B7mRNA在细胞和组织中的表达。构建重组定位表达载体,转染COS-7细胞,激光扫描共聚焦显微镜... 目的分析8B7cDNA编码的蛋白质的性质及其在细胞中的定位。方法用Blastn、Blastp及TMpred分析8B7cDNA编码的蛋白质的性质。采用Northern印迹分析8B7mRNA在细胞和组织中的表达。构建重组定位表达载体,转染COS-7细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中EGFP-8B7融合蛋白的表达。结果8B7cDNA编码的蛋白质长363个氨基酸,分子中有血影蛋白重复序列,它与Enaptin蛋白、Nasprin-1蛋白、Myne1蛋白及Syne-1蛋白的C末端363个氨基酸序列100%同源,是血影蛋白家族的一个新成员,故称8B7血影蛋白。Northern印迹分析,可见人脾脏和小肠组织有1.8kb的8B7mRNA表达。定位实验见COS-7细胞的核膜有荧光,胞浆中也见网状的荧光。转染pEGFP-△SR8B7的COS-7细胞中发射荧光的部位与转染pEGFP-8B7cDNA的细胞相似。结论8B7cDNA编码的蛋白质是血影蛋白家族的一个新成员,用COS-7细胞所做的定位实验证实其定位于细胞的核膜和胞浆中的网状结构,是8B7血影蛋白C端的KASH结构域决定了其在COS-7细胞中的定位。 展开更多

关键词 887cDNA 血影蛋白 核膜 定位

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6A8α-甘露糖苷酶表达减弱抑制鼻咽癌细胞CNE-2L2转移的分子机制

10

作者 岳玮 詹少兵 +4 位作者 高阳 史耕先 刘音 赵方萄 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期655-658,共4页

目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对鼻咽癌细胞CNE-2L2间粘附性、细胞表达E-cadherin及对细胞接种裸鼠皮下所生长肿瘤肺转移的影响。方法软琼脂培养观察非锚定状态下细胞间的粘附;间接免疫荧光染色、免疫组化染色及RT-PCR检测E-cadheri... 目的探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对鼻咽癌细胞CNE-2L2间粘附性、细胞表达E-cadherin及对细胞接种裸鼠皮下所生长肿瘤肺转移的影响。方法软琼脂培养观察非锚定状态下细胞间的粘附;间接免疫荧光染色、免疫组化染色及RT-PCR检测E-cadherin的表达;CNE-2L2细胞接种裸鼠皮下,8周后病理切片检测所长肿瘤肺转移程度。结果6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的CNE-2L2细胞(AS)在非锚定状态下发生粘附,此粘附对Ca2+有依赖性。野生型CNE-2L2细胞弱表达E-cadherin,但AS细胞的E-cadherin表达明显增强。E-cadherin表达增强既见于蛋白质水平,也见于mRNA水平。AS细胞接种裸鼠皮下所长肿瘤的肺转移明显受抑。结论6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使CNE-2L2细胞间的粘附性增强,细胞表面E-cadherin表达增强,细胞接种裸鼠皮下所长肿瘤的肺转移明显受抑。 展开更多

关键词 鼻咽癌 6A8 α-甘露糖苷酶 E-CADHERIN 肿瘤转移

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ER α-甘露糖苷酶表达降低引起大鼠肝脏上皮细胞微绒毛减少变短

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作者 赵方萄 李瞡 +2 位作者 史耕先 刘音 朱立平 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期52-55,共4页

目的观察蛋白质糖基化改变对大鼠肝脏上皮细胞WB-F344表面微绒毛及在培养中生长的影响。方法构建含正义或反义6A8DNA的重组pAGX(+)质粒,用脂质体法将重组质粒或空载质粒转染WB-F344细胞,作G418筛选,以有限稀释法作细胞克隆,进行PCR检测... 目的观察蛋白质糖基化改变对大鼠肝脏上皮细胞WB-F344表面微绒毛及在培养中生长的影响。方法构建含正义或反义6A8DNA的重组pAGX(+)质粒,用脂质体法将重组质粒或空载质粒转染WB-F344细胞,作G418筛选,以有限稀释法作细胞克隆,进行PCR检测新霉素抗性(neoR)基因以确定转染DNA在细胞基因组中的整合;用P-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside作底物检测细胞匀浆上清中ERα-甘露糖苷酶的活性;采用扫描电镜观察细胞表面的微绒毛,并做生长曲线检测。结果转染反义6A8的各WB-F344克隆细胞株的匀浆上清中,ERα-甘露糖苷酶活性有不同程度降低,其中以克隆AS1与AS2的降低最明显。克隆AS1与ConA结合增强,表面微绒毛减少、变短,细胞增殖减慢。结论大鼠肝脏ERα-甘露糖苷酶表达抑制所致的蛋白质糖基化改变,可导致大鼠肝脏上皮细胞WB-F344微绒毛减少、变短,细胞生长速度减慢。 展开更多

关键词 糖基化 微绒毛α-甘露糖苷酶

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