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题名异柠檬酸裂解酶的制备及其抑制剂筛选模型的建立
被引量：1
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作者
王旸
郝雪秦
高鹏
杨延辉
肖春玲
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机构
中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室
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出处
《中国抗生素杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期467-470,511,共5页
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基金
国家自然科学基金(30472108)
国家传染病防治重大科技专项(20082×10003-06)
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文摘
目的制备结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)并建立ICL抑制剂筛选模型。方法通过四步层析法或金属螯合层析法纯化大肠埃希菌BL21(DE3)表达的ICL,并以异柠檬酸为底物,用纯化的ICL裂解异柠檬酸,生成乙醛酸可与苯肼反应生成苯腙,苯腙在324nm波长下产生光吸收峰,测定酶促反应体系在324nm波长下光吸收检测异柠檬酸裂解酶的活性,根据待测样品对酶活性的抑制程度,筛选异柠檬酸裂解酶抑制剂。结果用金属螯和层析法得到纯度为90%、比活力为2.8U/mg的ICL,建立并优化ICL抑制剂筛选模型,模型的信噪比(S/N)远大于3,变异系数(CV)远小于10%。结论通过金属螯合层析法获得了特异性高、稳定性好的ICL抑制剂筛选模型,该模型可有效的应用于异柠檬酸裂解酶抑制剂的高通量筛选。
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关键词
柠檬酸裂解酶
筛选模型
异柠檬酸裂解酶抑制剂
高通量筛选
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Keywords
Isocitrate lyase
Drug screening model
Isocitrate lyase inhibitor
High throughput screening
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分类号
R978.3
[医药卫生—药品]
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