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人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立
被引量：
6
1
作者
刘晓辉
洪斌
+3 位作者
王丽非
杨媛
司书毅
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期354-358,共5页
目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告...
目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂。结果 建立了CLA-1表达上调剂筛选模型,pGL3-CLAP与阴性对照pGL3-Basic组间差异显著(P<0.001),变异系数(CV)不超过10％。对124个化合物和800个微生物次级代谢产物进行初筛和复筛,1个化合物和3个菌株发酵液为阳性。结论 该系统可有效地应用于人高密度脂蛋白受体表达上调剂的高通量筛选。
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关键词
高密度脂蛋白受体
药物筛选模型
报告基因
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职称材料
人可溶性白细胞介素- 6受体基因在昆虫细胞内的克隆与表达
被引量：
1
2
作者
常炳圣
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期36-39,共4页
在昆虫细胞中表达人可溶性白细胞介素- 6受体（ sIL- 6R）基因。方法将人 sIL- 6R cDNA克隆至杆状病毒转移载体 pAcGP67B中，再将重组转移载体质粒与野生病毒 AcNPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9；经同源重组后，以终点稀释和斑点杂交法筛选...
在昆虫细胞中表达人可溶性白细胞介素- 6受体（ sIL- 6R）基因。方法将人 sIL- 6R cDNA克隆至杆状病毒转移载体 pAcGP67B中，再将重组转移载体质粒与野生病毒 AcNPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9；经同源重组后，以终点稀释和斑点杂交法筛选重组杆状病毒；采用空斑分析法纯化重组的病毒，然后以纯化的重组病毒感染昆虫细胞 Sf9。结果斑点杂交实验证实，纯化得到的重组病毒含有人 sIL- 6R基因； SDS- PAGE结果显示，表达产物 sIL- 6R相对分子质量为 47 000左右； Western blot和受体配基结合实验表明，表达产物具有与其配基特异性地结合的能力。结论杆状病毒－昆虫细胞系统能分泌表达 sIL- 6R，表达产物具有免疫活性和生物活性。
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关键词
可溶性白细胞介素-6受体
克隆
分泌表达
杆状病毒
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职称材料
CTLA-4在大肠杆菌中的克隆和表达
3
作者
王朝健
Li Yuan
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期154-157,共4页
目的 在原核表达系统大肠杆菌中表达具有生物活性的人毒性 T淋巴细胞相关蛋白-4可溶性部分 (human soluble CTLA-4)。方法 PCR扩增获得 CTLA-4编码基因，利用表达载体 pGEX-2T构建重组质粒 2TC，在 BL21(DE3)宿主菌中表达。观察不同 IPT...
目的 在原核表达系统大肠杆菌中表达具有生物活性的人毒性 T淋巴细胞相关蛋白-4可溶性部分 (human soluble CTLA-4)。方法 PCR扩增获得 CTLA-4编码基因，利用表达载体 pGEX-2T构建重组质粒 2TC，在 BL21(DE3)宿主菌中表达。观察不同 IPTG浓度及诱导时间对蛋白表达的影响并测定其免疫活性。结果 PCR扩增所获 DNA片段与文献报道 CTLA-4序列一致。在重组大肠杆菌中 0.10 mmol/L IPTG诱导 4 h可大量生成相对分子质量 40 000的 GST-CTLA4融合蛋白。 Western blot分析表明原核表达产物 CTLA-4具抗原抗体结合活性。结论 hsCTLA-4可在原核表达系统中表达并具有免疫活性。
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关键词
CTLA-4
基因克隆
原核表达
大肠杆菌
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职称材料
题名
人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立
被引量：
6
1
作者
刘晓辉
洪斌
王丽非
杨媛
司书毅
李元
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所生物工程室
中国医学科学院
国
协和医科大学
医药
生物技术
研究所
生物工程
室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期354-358,共5页
基金
国家自然科学基金重点项目(39930190)
国家"863"高科技计划(2001AA234021)资助~~
文摘
目的 建立靶向人高密度脂蛋白受体基因(CLA-1)调控序列的药物筛选模型,为筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂奠定基础。方法 PCR扩增CLA-1上游调控序列,构建重组报告基因质粒pGL3-CLAP,瞬时转染人肝癌细胞BEL-7402,通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人高密度脂蛋白受体表达上调剂。结果 建立了CLA-1表达上调剂筛选模型,pGL3-CLAP与阴性对照pGL3-Basic组间差异显著(P<0.001),变异系数(CV)不超过10％。对124个化合物和800个微生物次级代谢产物进行初筛和复筛,1个化合物和3个菌株发酵液为阳性。结论 该系统可有效地应用于人高密度脂蛋白受体表达上调剂的高通量筛选。
关键词
高密度脂蛋白受体
药物筛选模型
报告基因
Keywords
high density lipoprotein receptor
drug screening model
reporter gene
分类号
R965.1 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
人可溶性白细胞介素- 6受体基因在昆虫细胞内的克隆与表达
被引量：
1
2
作者
常炳圣
李元
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所生物工程室
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第1期36-39,共4页
基金
中国医学科学院基金!( 971008)资助&&
文摘
在昆虫细胞中表达人可溶性白细胞介素- 6受体（ sIL- 6R）基因。方法将人 sIL- 6R cDNA克隆至杆状病毒转移载体 pAcGP67B中，再将重组转移载体质粒与野生病毒 AcNPV DNA共转染昆虫细胞 Sf9；经同源重组后，以终点稀释和斑点杂交法筛选重组杆状病毒；采用空斑分析法纯化重组的病毒，然后以纯化的重组病毒感染昆虫细胞 Sf9。结果斑点杂交实验证实，纯化得到的重组病毒含有人 sIL- 6R基因； SDS- PAGE结果显示，表达产物 sIL- 6R相对分子质量为 47 000左右； Western blot和受体配基结合实验表明，表达产物具有与其配基特异性地结合的能力。结论杆状病毒－昆虫细胞系统能分泌表达 sIL- 6R，表达产物具有免疫活性和生物活性。
关键词
可溶性白细胞介素-6受体
克隆
分泌表达
杆状病毒
Keywords
soluble human interleukin- 6 receptor
gene cloning and expression
baculovirus
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
CTLA-4在大肠杆菌中的克隆和表达
3
作者
王朝健
Li Yuan
李元
机构
中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所生物工程室
Department of Bioengineering
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期154-157,共4页
文摘
目的 在原核表达系统大肠杆菌中表达具有生物活性的人毒性 T淋巴细胞相关蛋白-4可溶性部分 (human soluble CTLA-4)。方法 PCR扩增获得 CTLA-4编码基因，利用表达载体 pGEX-2T构建重组质粒 2TC，在 BL21(DE3)宿主菌中表达。观察不同 IPTG浓度及诱导时间对蛋白表达的影响并测定其免疫活性。结果 PCR扩增所获 DNA片段与文献报道 CTLA-4序列一致。在重组大肠杆菌中 0.10 mmol/L IPTG诱导 4 h可大量生成相对分子质量 40 000的 GST-CTLA4融合蛋白。 Western blot分析表明原核表达产物 CTLA-4具抗原抗体结合活性。结论 hsCTLA-4可在原核表达系统中表达并具有免疫活性。
关键词
CTLA-4
基因克隆
原核表达
大肠杆菌
Keywords
CTLA-4； gene cloning
prokaryotic expression
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人高密度脂蛋白受体表达上调剂筛选模型的建立
刘晓辉
洪斌
王丽非
杨媛
司书毅
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
6
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职称材料
2
人可溶性白细胞介素- 6受体基因在昆虫细胞内的克隆与表达
常炳圣
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
1
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职称材料
3
CTLA-4在大肠杆菌中的克隆和表达
王朝健
Li Yuan
李元
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
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