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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：2: 1; 作者刘广阔邹敏 +5 位作者吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚《动物医学进展》北大核心 2024年第1期1-6,共6页; 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 展开更多; 关键词牛轮状病毒 VP6蛋白原核表达间接酶联免疫吸附试验; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于gE蛋白的羊伪狂犬病病毒间接ELISA的建立与应用: 2; 作者刘广阔吴发兴 +4 位作者于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚《动物医学进展》北大核心 2024年第3期28-33,共6页; 为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为... 展开更多; 关键词羊伪狂犬病伪狂犬病病毒 gE蛋白间接ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：12: 3; 作者李晨露吴发兴 +2 位作者徐海玲许信刚张琪《动物医学进展》北大核心 2022年第5期1-5,共5页; 为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测。结果显示,重组N蛋白大小... 展开更多; 关键词牛冠状病毒 N蛋白酶联免疫吸附试验; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛传染性鼻气管炎病毒gB基因原核表达与鉴定: 4; 作者郭良帅吴发兴 +2 位作者焦海宏康京丽王志亮《中国动物检疫》 CAS 2023年第6期96-101,共6页; 为给后续牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)单克隆抗体制备、酶联免疫吸附试验等研究提供基础,采用PCR技术扩增IBRV gB基因主要抗原区序列(312~529 aa位置),构建原核重组表达质粒pET-32a-gB,将其转化... 展开更多; 关键词牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白原核表达蛋白纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：2: 1; 作者刘广阔邹敏吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚; 机构西北农林科技大学动物医学院青岛易邦生物工程有限公司/科技部动物基因工程疫苗国家重点实验室中国动物卫生与流行病学中心/国家动物血清库; 出处《动物医学进展》北大核心 2024年第1期1-6,共6页; 基金陕西省重点研发计划重点项目(2022NY-098)。; 文摘为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。; 关键词牛轮状病毒 VP6蛋白原核表达间接酶联免疫吸附试验; Keywords Bovine rotavirus VP6 protein prokaryotic expression indirect enzyme-linked immunosorbent assay(indirect-ELISA); 分类号 S853.74 [农业科学—临床兽医学] S852.42 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于gE蛋白的羊伪狂犬病病毒间接ELISA的建立与应用: 2; 作者刘广阔吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚; 机构西北农林科技大学动物医学院中国动物卫生与流行病学中心国家动物血清库; 出处《动物医学进展》北大核心 2024年第3期28-33,共6页; 基金陕西省重点研发计划重点项目(2022NY-098) 国家重点研发计划(2021YFD1600704) 省级农业专项资金项目(XNDY2210)。; 文摘为建立羊源伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)抗体的检测方法,从PRV中对gE基因进行克隆,并构建重组载体对gE蛋白进行原核表达,以重组gE蛋白为包被抗原,建立PRV抗体间接ELISA检测方法,并进行临床样本检测。结果显示,重组gE蛋白大小为42 ku,以包涵体形式表达;Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应原性;重组蛋白作为包被抗原的最佳工作浓度为1μg/mL,待检血清100倍稀释,以HRP标记的兔抗山羊IgG 10000倍稀释作为二抗;检测临床样本时判定阴阳性的临界值为0.284;灵敏性试验结果显示,羊PRV阳性血清稀释2048倍时检测结果仍为阳性;批内变异系数(2.45%~5.00%)与批间变异系数(2.55%~7.41%)均小于10%;采用建立的方法检测其他常见羊源病毒阳性血清结果均为阴性;对收集的376份临床羊血清进行检测,PRV阳性率为10.6%。建立的间接ELISA检测方法可用于羊源样本中伪狂犬病病毒抗体的检测,该方法的建立为羊场PRV抗体检测提供了技术支持。; 关键词羊伪狂犬病伪狂犬病病毒 gE蛋白间接ELISA; Keywords Goat pseudorabies Pseudorabies virus gE protein ELISA; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：12: 3; 作者李晨露吴发兴徐海玲许信刚张琪; 机构西北农林科技大学动物医学院中国动物卫生与流行病学中心国家动物血清库; 出处《动物医学进展》北大核心 2022年第5期1-5,共5页; 基金陕西省重点研发计划重点项目(2018ZDXM-NY-039)。; 文摘为建立牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)抗体间接ELISA检测方法,对BCoV的N基因进行克隆,利用原核表达制备重组N蛋白,以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,并对随机收集的奶牛血清样本进行检测。结果显示,重组N蛋白大小为50 ku,经Western blot鉴定重组N蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为1.5μg/mL,血清以1∶50稀释,酶标二抗以1∶10000稀释,临界值为0.256。用该方法检测牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、口蹄疫病毒阳性血清均无交叉反应;当BCoV标准阳性血清1∶2560稀释时检测结果仍为阳性,灵敏性较好;批内和批间变异系数分别为1.83%~5.80%和2.34%~7.45%。对陕西省部分牛场收集的296份牛血清进行检测,BCoV抗体阳性率为18.24%。建立了一种快速检测BCoV抗体的间接ELISA方法,为BCoV的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。; 关键词牛冠状病毒 N蛋白酶联免疫吸附试验; Keywords Bovine coronavirus N protein ELISA; 分类号 S852.653 [农业科学—基础兽医学] S858.23 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛传染性鼻气管炎病毒gB基因原核表达与鉴定: 4; 作者郭良帅吴发兴焦海宏康京丽王志亮; 机构塔里木大学动物科学学院中国动物卫生与流行病学中心国家动物血清库; 出处《中国动物检疫》 CAS 2023年第6期96-101,共6页; 基金农业农村部动物疫情监测与防治项目(16210184)。; 文摘为给后续牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)单克隆抗体制备、酶联免疫吸附试验等研究提供基础,采用PCR技术扩增IBRV gB基因主要抗原区序列(312~529 aa位置),构建原核重组表达质粒pET-32a-gB,将其转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过对蛋白表达形式确认并对诱导剂(IPTG)浓度、诱导表达时间及诱导温度优化,表达并纯化获得gB重组蛋白,并对重组蛋白进行反应原性鉴定。结果显示:gB重组蛋白主要以包涵体形式表达,IPTG最佳诱导浓度为1 mmol/L,最佳诱导表达时间为6 h,最佳诱导温度为37℃;重组蛋白相对分子质量约60 ku,纯化后蛋白质量浓度为1.02 mg/mL;Western-blot鉴定发现,gB重组蛋白能被IBRV阳性血清特异性识别。结果表明,成功对IBRV gB基因进行体外原核表达与鉴定,为后期开展相应单克隆抗体制备等研究奠定了基础。; 关键词牛传染性鼻气管炎病毒 gB蛋白原核表达蛋白纯化; Keywords IBRV gB protein prokaryotic expression protein purification; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用	刘广阔邹敏吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚	《动物医学进展》北大核心	2024	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	基于gE蛋白的羊伪狂犬病病毒间接ELISA的建立与应用	刘广阔吴发兴于皓同王凯茸张锐铮张琪许信刚	《动物医学进展》北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	基于N蛋白的牛冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用	李晨露吴发兴徐海玲许信刚张琪	《动物医学进展》北大核心	2022	12	在线阅读下载PDF 职称材料
4	牛传染性鼻气管炎病毒gB基因原核表达与鉴定	郭良帅吴发兴焦海宏康京丽王志亮	《中国动物检疫》 CAS	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料