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棉花抗逆相关基因GhDr1的克隆及生物信息学分析被引量：3: 1; 作者丁忠涛张锐郭三堆《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期99-106,共8页; 通过TAIL-PCR的方法从棉花中克隆到未知功能的新基因GhDr1,生物信息学分析结果表明,GhDr1的预测蛋白含有酪氨酸激酶和蛋白酶C磷酸化位点、潜在的锌指类功能模块、MAPK磷酸化位点及MAPK相互作用识别位点;与GhDr1同源基因位于同一基因簇... 展开更多; 关键词生物信息学棉花 GhDr1基因 TAIL-PCR 抗逆; 在线阅读下载PDF 职称材料

优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因被引量：9: 2; 作者梁成真张锐 +4 位作者孙国清孟志刚周焘丁忠涛郭三堆《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页; ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明... 展开更多; 关键词棉花 ABF/AREB/ABI5/DPBF 转录因子 TAIL-PCR 抗逆相关基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

染色体步移技术研究进展被引量：16: 3; 作者梁成真张锐郭三堆《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期75-82,87,共9页; 染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,... 展开更多; 关键词染色体步移侧翼序列 BAC克隆反向PCR 外源接头介导PCR 半随机引物PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立被引量：5: 4; 作者闫喜中张锐 +3 位作者孟志刚孙国清周涛郭三堆《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11376-11377,共2页; [目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因... 展开更多; 关键词晚基因实时荧光定量PCR 标准曲线; 在线阅读下载PDF 职称材料

转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达被引量：1: 5; 作者闫喜中张锐 +3 位作者孟志刚孙国清周涛郭三堆《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期161-163,共3页; 采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。B... 展开更多; 关键词 BT基因 nptⅡ基因遗传表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

拟南芥尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)基因启动子的分离及表达特性分析被引量：6: 6; 作者朱永兴王磊 +2 位作者张兰张伟范云六《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期554-559,共6页; 尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介... 展开更多; 关键词拟南芥维生素E 生育酚尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT) 启动子; 在线阅读下载PDF 职称材料

陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建被引量：2: 7; 作者周焘郭红媛 +3 位作者张锐梁成真石雅丽郭三堆《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期252-254,共3页; 18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插... 展开更多; 关键词棉花 18R 雄性不育恢复系细菌人工染色体文库; 在线阅读下载PDF 职称材料

玉米转录因子ABP9瞬时表达体系的建立被引量：1: 8; 作者陈晓晶潘振赵军《安徽农业科学》 CAS 2014年第9期2554-2558,共5页; [目的]研究玉米抗逆相关转录因子ABP9在玉米抗逆应答中的功能及其表达调控机理。[方法]以2叶期玉米叶片为材料分离原生质体,通过PEG介导的转化方法,建立玉米叶肉原生质体瞬时表达ABP9的系统。利用该系统,通过反转录PCR和Western blot分... 展开更多; 关键词玉米(Zea mays L ) 转录因子 ABP9(ABRE BINDING PROTEIN 9) 原生质体瞬时表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名棉花抗逆相关基因GhDr1的克隆及生物信息学分析被引量：3: 1; 作者丁忠涛张锐郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期99-106,共8页; 基金农业部国家转基因重大专项(2008ZX005-004); 文摘通过TAIL-PCR的方法从棉花中克隆到未知功能的新基因GhDr1,生物信息学分析结果表明,GhDr1的预测蛋白含有酪氨酸激酶和蛋白酶C磷酸化位点、潜在的锌指类功能模块、MAPK磷酸化位点及MAPK相互作用识别位点;与GhDr1同源基因位于同一基因簇的基因多为参与逆境信号转导的蛋白。推测GhDr1基因可能在逆境信号转导途径的磷酸化级联反应中被调节,参与棉花逆境应答的生理过程。; 关键词生物信息学棉花 GhDr1基因 TAIL-PCR 抗逆; Keywords Bioinformatics Cotton GhDr1 gene TAIL-PCR Resistance to abiotic stresses; 分类号 Q943 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因被引量：9: 2; 作者梁成真张锐孙国清孟志刚周焘丁忠涛郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页; 基金农业部国家转基因重大专项:"转基因抗旱耐盐碱棉花新品种培育" 2008ZX005-004; 文摘 ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明两步PCR成功获得基因完整的ORF、3′UTR以及部分5′UTR序列。本研究所获基因为棉花抗逆基因工程提供了候选基因源,优化后的TAIL-PCR技术为克隆棉花中目的基因提供了一种简便高效的方法。; 关键词棉花 ABF/AREB/ABI5/DPBF 转录因子 TAIL-PCR 抗逆相关基因; Keywords cotton ABF/AREB/ABI5/DPBF transcription factor TAIL-PCR stress-related genes; 分类号 S562 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名染色体步移技术研究进展被引量：16: 3; 作者梁成真张锐郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期75-82,87,共9页; 基金农业部国家转基因重大专项"转基因抗旱耐盐碱棉花新品种培育"(2008ZX005-004); 文摘染色体步移技术是一种常用的克隆已知片段旁侧序列的技术。综述了近年来染色体步移技术的发展情况,介绍了结合基因组文库的染色体步移技术和基于PCR的染色体步移技术。同时总结了物理剪切法和限制性内切酶法构建亚克隆文库的优化步骤,以及连接成环PCR法、外源接头介导PCR法和半随机引物PCR法的原理,并且比较分析了他们之间的优缺点,以期对实际操作起到借鉴作用。; 关键词染色体步移侧翼序列 BAC克隆反向PCR 外源接头介导PCR 半随机引物PCR; Keywords Chromosome walking Flanking sequence BAC clone I-PCR Adapter-mediated PCR Semi-random primer PCR; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立被引量：5: 4; 作者闫喜中张锐孟志刚孙国清周涛郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11376-11377,共2页; 基金国家"863"计划项目(2003AA2110); 文摘 [目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X+43.783 512,相关系数R2为0.997 867。[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点。; 关键词晚基因实时荧光定量PCR 标准曲线; Keywords Bt gene Real-time quantitative PCR Standard curve; 分类号 S562 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达被引量：1: 5; 作者闫喜中张锐孟志刚孙国清周涛郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所山西农业大学农学院; 出处《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期161-163,共3页; 基金国家“863”计划项目资助(2003AA211050); 文摘采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。; 关键词 BT基因 nptⅡ基因遗传表达; Keywords Bt gene npt Ⅱ gene Inheritance Expression; 分类号 S562 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名拟南芥尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)基因启动子的分离及表达特性分析被引量：6: 6; 作者朱永兴王磊张兰张伟范云六; 机构中国农业科学院生物技术研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期554-559,共6页; 基金国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2004CB7200); 文摘尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,取正常生长条件下的拟南芥转基因植株进行GUS组织化学染色,结果表明,在HPT启动子的驱动下,GUS基因主要在转基因拟南芥的根中高表达,在成熟叶片、花丝、雌蕊中也有一些表达,而在茎、根尖、花药、种荚及发育的种子中则未表达,可见该启动子为根优势表达启动子。; 关键词拟南芥维生素E 生育酚尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT) 启动子; Keywords Arabidopsis thaliana Vitamin E Tocopherol Homogentisate Phytyltransferase （HPT） Promoter; 分类号 Q943.2 [生物学—植物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建被引量：2: 7; 作者周焘郭红媛张锐梁成真石雅丽郭三堆; 机构中国农业科学院生物技术研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期252-254,共3页; 基金国家自然科学基金(30771371); 文摘 18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插入片段为50～200 kb,91%的克隆插入片段为80～150 kb,平均102 kb,空载率<2%,覆盖6.3倍基因组。; 关键词棉花 18R 雄性不育恢复系细菌人工染色体文库; Keywords cotton 18R fertility restorer line bacterial artificial chromosome （BAC） library; 分类号 S562 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名玉米转录因子ABP9瞬时表达体系的建立被引量：1: 8; 作者陈晓晶潘振赵军; 机构西南科技大学生命科学与工程学院中国农业科学院生物技术研究所国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程; 出处《安徽农业科学》 CAS 2014年第9期2554-2558,共5页; 基金国家转基因生物新品种培育重大专项(编号:2013ZX08003004); 文摘 [目的]研究玉米抗逆相关转录因子ABP9在玉米抗逆应答中的功能及其表达调控机理。[方法]以2叶期玉米叶片为材料分离原生质体,通过PEG介导的转化方法,建立玉米叶肉原生质体瞬时表达ABP9的系统。利用该系统,通过反转录PCR和Western blot分别检测ABP9genomic∷FLAG融合基因在原生质体中的转录和翻译;并通过转化ABP9∷GFP融合表达载体和GFP荧光检测,对ABP9进行亚细胞定位。[结果]玉米原生质体瞬时表达ABP9系统中,ABP9genomic∷FLAG融合基因能够正确转录出mRNA并翻译出蛋白质;利用该系统进行亚细胞定位结果显示ABP9定位于细胞核中。[结论]玉米原生质体瞬时表达ABP9体系的建立,为进一步探究玉米中ABP9的表达和调控提供了良好的实验系统。; 关键词玉米(Zea mays L ) 转录因子 ABP9(ABRE BINDING PROTEIN 9) 原生质体瞬时表达; Keywords Maize Transcription factor ABP9 Protoplast transient expression; 分类号 S513 [农业科学—作物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	棉花抗逆相关基因GhDr1的克隆及生物信息学分析	丁忠涛张锐郭三堆	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2011	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因	梁成真张锐孙国清孟志刚周焘丁忠涛郭三堆	《棉花学报》 CSCD 北大核心	2010	9	在线阅读下载PDF 职称材料
3	染色体步移技术研究进展	梁成真张锐郭三堆	《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心	2009	16	在线阅读下载PDF 职称材料
4	实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立	闫喜中张锐孟志刚孙国清周涛郭三堆	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2008	5	在线阅读下载PDF 职称材料
5	转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达	闫喜中张锐孟志刚孙国清周涛郭三堆	《华北农学报》 CSCD 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	拟南芥尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)基因启动子的分离及表达特性分析	朱永兴王磊张兰张伟范云六	《作物学报》 CAS CSCD 北大核心	2007	6	在线阅读下载PDF 职称材料
7	陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建	周焘郭红媛张锐梁成真石雅丽郭三堆	《棉花学报》 CSCD 北大核心	2009	2	在线阅读下载PDF 职称材料
8	玉米转录因子ABP9瞬时表达体系的建立	陈晓晶潘振赵军	《安徽农业科学》 CAS	2014	1	在线阅读下载PDF 职称材料