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优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因 被引量:9
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作者 梁成真 张锐 +4 位作者 孙国清 孟志刚 周焘 丁忠涛 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页
ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明... ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明两步PCR成功获得基因完整的ORF、3′UTR以及部分5′UTR序列。本研究所获基因为棉花抗逆基因工程提供了候选基因源,优化后的TAIL-PCR技术为克隆棉花中目的基因提供了一种简便高效的方法。 展开更多
关键词 棉花 ABF/AREB/ABI5/DPBF 转录因子 TAIL-PCR 抗逆相关基因
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实时荧光定量PCR法检测抗虫棉Bt基因拷贝数方法的建立 被引量:5
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作者 闫喜中 张锐 +3 位作者 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第26期11376-11377,共2页
[目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因... [目的]建立并完善Taqman实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法。[方法]通过Bt基因序列,利用软件Primer5.0设计引物和探针,然后利用10倍系列稀释含有目的基因的质粒pG4AB,进行实时荧光定量PCR反应,制作标准曲线。[结果]抗虫基因拷贝数与Ct值的关系为Ct=-3.549 632X+43.783 512,相关系数R2为0.997 867。[结论]实时荧光定量PCR检测转基因抗虫棉Bt基因的方法具有特异性好、灵敏度高的特点。 展开更多
关键词 晚基因 实时荧光定量PCR 标准曲线
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拟南芥尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)基因启动子的分离及表达特性分析 被引量:6
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作者 朱永兴 王磊 +2 位作者 张兰 张伟 范云六 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期554-559,共6页
尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介... 尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT)是催化生育酚生物合成分支途径中的关键酶,催化叶绿醇焦磷酸(phytyl-PP)与尿黑酸(HGA)缩合生成生育酚的前体。本研究从拟南芥中分离HPT基因的启动子序列946bp,构建了该启动子与GUS嵌合的重组载体,通过农杆菌介导转化拟南芥,取正常生长条件下的拟南芥转基因植株进行GUS组织化学染色,结果表明,在HPT启动子的驱动下,GUS基因主要在转基因拟南芥的根中高表达,在成熟叶片、花丝、雌蕊中也有一些表达,而在茎、根尖、花药、种荚及发育的种子中则未表达,可见该启动子为根优势表达启动子。 展开更多
关键词 拟南芥 维生素E 生育酚 尿黑酸叶绿醇转移酶(HPT) 启动子
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陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建 被引量:2
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作者 周焘 郭红媛 +3 位作者 张锐 梁成真 石雅丽 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期252-254,共3页
18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插... 18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插入片段为50~200 kb,91%的克隆插入片段为80~150 kb,平均102 kb,空载率<2%,覆盖6.3倍基因组。 展开更多
关键词 棉花 18R 雄性不育恢复系 细菌人工染色体文库
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