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植物抗体基因工程:I.分泌马铃薯Y病毒中和抗体杂交瘤细胞系的筛选 被引量:3
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作者 刘德虎 郭军 +2 位作者 陈三风 梁华 王海扬 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第2期42-44,共3页
酶联免疫吸附试验证实,D73、D90和A69三个杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体均能够与马铃薯Y病毒株系PVY ̄o、PVY ̄N和PVY ̄c发生反应,但以D73的亲和性为最强。进而进行的侵染抑制试验也证实经D73单克隆抗体... 酶联免疫吸附试验证实,D73、D90和A69三个杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体均能够与马铃薯Y病毒株系PVY ̄o、PVY ̄N和PVY ̄c发生反应,但以D73的亲和性为最强。进而进行的侵染抑制试验也证实经D73单克隆抗体处理后的病毒接种物,其在‘A6’(SolanumdemissumxS.tuberosum)离休叶片引起枯斑的能力显著地受到抑制。因此,选用D73杂交瘤细胞系作为分离马铃薯Y病毒中和抗体基因的材料,对其分泌的抗体轻链和重链的亚类进行鉴定,结果发现组成该单克隆抗体分子的轻链和重链分别为K链(kappa)和γ_1链。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 杂交瘤细胞系 植物 抗体 基因工程
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植物抗体基因工程:II.马铃薯Y病毒中和抗体cDNA基因文库的构建及含抗体轻链和重链基因阳性克隆的筛选 被引量:1
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作者 刘德虎 郭军 +2 位作者 陈三风 梁华 王海扬 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第3期44-46,共3页
从大量繁殖的D73杂交瘤细胞中提取制备其基因组mRNA,并以此为模板,经反转录途径获得基因组cDNA,随后将其插入到λgt11中,构建了马铃薯Y病毒小鼠单克隆抗体cDNA基因文库。经免疫原位杂交,从该基因文库中筛选出... 从大量繁殖的D73杂交瘤细胞中提取制备其基因组mRNA,并以此为模板,经反转录途径获得基因组cDNA,随后将其插入到λgt11中,构建了马铃薯Y病毒小鼠单克隆抗体cDNA基因文库。经免疫原位杂交,从该基因文库中筛选出30个含抗体轻链基因和10个含抗体重链基因的阳性克隆,进一步将其插入到nGEM-7Z(+)质粒中,经酶切分析和电泳检测,证实在获得的轻链和重链阳性克隆中各有一个质粒(K6和G9)具有较长的外源DNA插入(分别为1Kb和1.6Kb),它们可能编码完整的抗体轻链和重链蛋白。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 基因克隆 基因工程
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植物抗体基因工程:Ⅲ.马铃薯Y病毒小鼠中和抗体链基因的序列分析及其植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 刘德虎 陈三凤 +1 位作者 王海扬 李刚强 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第4期46-46,共1页
序列分析表明,马铃薯Y病毒小鼠中和抗体轻链基因(K6)全长为956个核苷酸碱基(不包括poly(A)尾巴),其中包括5'端非编码区31个核苷酸碱基,编码轻链信号肽的57个核苷酸碱基,编码成熟蛋白的657个核苷酸基和3... 序列分析表明,马铃薯Y病毒小鼠中和抗体轻链基因(K6)全长为956个核苷酸碱基(不包括poly(A)尾巴),其中包括5'端非编码区31个核苷酸碱基,编码轻链信号肽的57个核苷酸碱基,编码成熟蛋白的657个核苷酸基和3'端非编码区的211个核苷酸碱基。与已知的其它K轻链基因(MRK16)相比,核苷酸的序列同源性为98.7%,由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为97.0%,其变异主要发生在三个抗原识别位点内(COR)。将完整的抗体轻链基因正向插入植物表达载体pB121中的原GUS基因位置上,置于花椰菜花叶病毒35G启动子控制之下,获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Y病毒中和抗体轻链基因的植物表达载体pYL。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 基因工程 植物抗体
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植物抗体基因工程:Ⅳ.马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因的序列分析及其植物表达 被引量:1
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作者 刘德虎 陈三风 李刚强 《高技术通讯》 CAS CSCD 1996年第4期8-11,共4页
序列分析表明,马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因(G9)全长为1505个核苷酸碱基(不包括Poly(A)尾巴),其中包括5'端非编码区16个核苷酸碱基、编码重链信号肽的57个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的1329个核苷酸碱... 序列分析表明,马铃薯Y病毒小鼠中和抗体重链基因(G9)全长为1505个核苷酸碱基(不包括Poly(A)尾巴),其中包括5'端非编码区16个核苷酸碱基、编码重链信号肽的57个核苷酸碱基、编码成熟蛋白的1329个核苷酸碱基和3'端非编码区的103个核苷酸碱基。与已知的小鼠抗体Mopc21的重链基因(γ1)相比,核苷酸的序列同源性为94.4%,由核苷酸序列所推导出的氨基酸序列同源性为92.6%,其中可变区内(VH)的氨基酸序列同源性达74.5%,这表明二者起源于同一种系基因。将完整的抗体重链基因正向插入植物表达载体pBⅠ121中的原GUS基因位置上,置于花椰莱花叶病毒35S启动子控制之下,获得了能够在植物细胞内表达马铃薯Y病毒中和抗体重链基因的植物表达载体pYH。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 单克隆抗体 植物表达载体
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