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我国农业生物安全二级实验室管理探讨 被引量:2
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作者 孙竹筠 孙彤 +4 位作者 苏苌 王培培 张礼生 韩雪松 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期206-210,共5页
生物安全实验室分为四级安全防护等级,其中生物安全一级实验室和生物安全二级实验室为基础实验室,不可进行高致病性病原微生物操作。农业领域内生物安全二级实验室使用最为频繁,非高致病性病原微生物极易被忽略而成为实验室的生物安全... 生物安全实验室分为四级安全防护等级,其中生物安全一级实验室和生物安全二级实验室为基础实验室,不可进行高致病性病原微生物操作。农业领域内生物安全二级实验室使用最为频繁,非高致病性病原微生物极易被忽略而成为实验室的生物安全隐患。本文对农业生物安全二级实验室现状进行分析,探讨如何更好地开展实验室生物安全管理,筑牢实验室生物安全屏障。 展开更多
关键词 生物安全 农业 实验室
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猪腺病毒3型TaqMan探针荧光定量PCR检测方法建立
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作者 解佳 刘静宜 +4 位作者 孙彤 郭伟强 俞赵荣 陈鸿军 陈立功 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期106-111,共6页
猪腺病毒3型(PAdV-3)导致猪肠道性疾病。为能够快速特异检测该病毒,本研究根据PAdV-3 hexon基因序列保守区设计特异性引物和探针,成功建立了一种针对PAdV-3的TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。结果显示:该方法特异性好,可鉴别P... 猪腺病毒3型(PAdV-3)导致猪肠道性疾病。为能够快速特异检测该病毒,本研究根据PAdV-3 hexon基因序列保守区设计特异性引物和探针,成功建立了一种针对PAdV-3的TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。结果显示:该方法特异性好,可鉴别PAdV-3与其他猪病病毒,最低检测限为10 copies/μL,敏感性高于常规PCR 100倍。该检测方法的建立为PAdV-3的快速诊断提供了重要的分子诊断工具。 展开更多
关键词 猪腺病毒3型 hexon基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR
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猪冠状病毒四重荧光定量PCR检测方法建立
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作者 俞赵荣 孙彤 +5 位作者 金雪明 孙竹筠 苏苌 刘静宜 刘英楠 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期97-105,共9页
为了准确鉴别猪重要冠状病毒的感染,本研究设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、猪δ-冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的四重荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检... 为了准确鉴别猪重要冠状病毒的感染,本研究设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、猪δ-冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的四重荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法,并对其特异性、敏感性及重复性进行评估。结果显示:该方法具有良好的扩增特异性,可精准区分上述四种猪冠状病毒;对SADS-CoV、PDCoV和PHEV的最低检测限为10拷贝/μL,对PEDV为100拷贝/μL,敏感性较常规PCR提高了100倍;组内和组内变异系数均<2%,重复性良好。结果表明,该方法为猪冠状病毒感染的鉴别诊断提供了可靠分子检测工具,具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 猪急性腹泻综合征冠状病毒 猪血凝性脑脊髓炎病毒 猪δ-冠状病毒 猪流行性腹泻病毒 荧光定量RT-PCR
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基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立 被引量:3
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作者 程佳 李遥 +7 位作者 刘英楠 钟秋萍 史馨瑾 魏常青 谢振华 廖欣欣 宋影影 陈鸿军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第2期74-83,共10页
为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆... 为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10%,重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3%,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 杆状病毒 EP153R ELISA
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