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宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究
被引量：
1
1
作者
胡丹
王斌
+4 位作者
冷有龙
王玉杰
于群
郑永辉
范春玲
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期429-433,共5页
ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p ...
ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。
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关键词
erp57
CRISPR/Cas9系统
基因敲除
流感病毒
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职称材料
基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系
被引量：
3
2
作者
徐广军
曹世诺
+3 位作者
郑君
张险峰
贾洪林
郑永辉
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期45-49,共5页
由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以...
由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以本实验室构建的含有单链引导RNA(sgRNA)骨架转录序列的通用质粒(p Gen-sgRNA)为模板,将U6启动子与合成的相关基因gRNA靶序列经PCR融合扩增,其产物再与sgRNA的骨架转录序列进行重叠延伸PCR扩增,并将扩增产物克隆于p GEM-T载体中,分别构建了具有靶向不同目的基因ORF的gRNA重组质粒。将这些重组质粒分别与pMJ920质粒共转染于MDCK细胞中,通过G418筛选和流式细胞仪分选,并以终点稀释法纯化培养筛选出的单细胞克隆株。经gRNA靶序列片段的测序鉴定,获得了目的基因敲除的MDCK细胞系,并分别命名为MDCK-IRGM4-、MDCK-IRGM5-和MDCKIRGM6-。通过western blot检测经γ干扰素诱导条件下的这3种IRGMs基因在敲除细胞系中相应的蛋白表达均为阴性。这3种MDCK细胞IRGMs敲除的细胞系的建立,为进一步研究IRGMs基因在抗细胞内病原微生物感染中的功能奠定了基础。
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关键词
CRISPR/Cas9
MDCK
IRGM4
IRGM5
IRGM6
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职称材料
题名
宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究
被引量：
1
1
作者
胡丹
王斌
冷有龙
王玉杰
于群
郑永辉
范春玲
机构
黑龙江八一农垦
大学
动物科技
学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
-
美国
密歇根州
立
大学
天然免疫
联合实验室
/
兽医
生物技术
国家
重点
实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期429-433,共5页
基金
国家自然科学基金(31502089)
黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2015-Y26)
+1 种基金
黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12541582)
兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP2015012)
文摘
ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。
关键词
erp57
CRISPR/Cas9系统
基因敲除
流感病毒
Keywords
erp57
CRISPR/Cas9 system
gene knockout
influenza virus
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系
被引量：
3
2
作者
徐广军
曹世诺
郑君
张险峰
贾洪林
郑永辉
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第1期45-49,共5页
基金
中国农业科学院创新工程经费
文摘
由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以本实验室构建的含有单链引导RNA(sgRNA)骨架转录序列的通用质粒(p Gen-sgRNA)为模板,将U6启动子与合成的相关基因gRNA靶序列经PCR融合扩增,其产物再与sgRNA的骨架转录序列进行重叠延伸PCR扩增,并将扩增产物克隆于p GEM-T载体中,分别构建了具有靶向不同目的基因ORF的gRNA重组质粒。将这些重组质粒分别与pMJ920质粒共转染于MDCK细胞中,通过G418筛选和流式细胞仪分选,并以终点稀释法纯化培养筛选出的单细胞克隆株。经gRNA靶序列片段的测序鉴定,获得了目的基因敲除的MDCK细胞系,并分别命名为MDCK-IRGM4-、MDCK-IRGM5-和MDCKIRGM6-。通过western blot检测经γ干扰素诱导条件下的这3种IRGMs基因在敲除细胞系中相应的蛋白表达均为阴性。这3种MDCK细胞IRGMs敲除的细胞系的建立,为进一步研究IRGMs基因在抗细胞内病原微生物感染中的功能奠定了基础。
关键词
CRISPR/Cas9
MDCK
IRGM4
IRGM5
IRGM6
Keywords
CRISPR/Cas9
MDCK
IRGM4
IRGM5
IRGM6
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究
胡丹
王斌
冷有龙
王玉杰
于群
郑永辉
范春玲
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系
徐广军
曹世诺
郑君
张险峰
贾洪林
郑永辉
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
3
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