检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究被引量：1: 1; 作者胡丹王斌 +4 位作者冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期429-433,共5页; ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p ... 展开更多; 关键词 erp57 CRISPR/Cas9系统基因敲除流感病毒; 在线阅读下载PDF 职称材料

弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价被引量：3: 2; 作者王成双马秀英 +2 位作者郑君贾洪林王新《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期312-315,共4页; 棒状体蛋白(Rops)是弓形虫的一类与侵入、复制相关的重要分泌蛋白。Rop46蛋白在弓形虫急性感染阶段和慢性感染阶段的表达存在显著差异。为探究Rop46的生物学功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了Rop46基因敲除重组质粒,制备了Rop46基... 展开更多; 关键词弓形虫 Rop46 CRISPR/Cas9; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系被引量：3: 3; 作者徐广军曹世诺 +3 位作者郑君张险峰贾洪林郑永辉《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期45-49,共5页; 由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以... 展开更多; 关键词 CRISPR/Cas9 MDCK IRGM4 IRGM5 IRGM6; 在线阅读下载PDF 职称材料

弓形虫Rop32与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选被引量：1: 4; 作者马秀英郑君 +1 位作者王成双贾洪林《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期471-474,共4页; 弓形虫棒状体蛋白32(Rop32)是由弓形虫棒状体在感染细胞中分泌于宿主细胞中的磷酸激酶,但其功能尚不清楚。为筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白,本研究利用构建的p GBKT7-Rop32诱饵质粒转化酵母菌株Y2H,通过表型从人包皮成纤维细胞文库中... 展开更多; 关键词刚地弓形虫 Rop32 酵母双杂交技术免疫共沉淀试验; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究被引量：1: 1; 作者胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室/兽医生物技术国家重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期429-433,共5页; 基金国家自然科学基金(31502089) 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2015-Y26) +1 种基金兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP2015012); 文摘 ERp57是细胞内质网内的蛋白二硫键异构酶家族成员,可以催化蛋白二硫键的合成以促进蛋白折叠。为研究erp57基因敲除对流感病毒复制的影响,本研究通过CRISPR/Cas9技术构建了erp57基因的向导RNA(g RNA)敲除质粒p GEM-erp57g RNA,并将其与p Cas9-EGFP共转染至人肺腺癌细胞A549中,采用流式分选及限制性稀释的方法筛选单细胞克隆株,通过靶基因组测序及western blot检测,筛选获得了erp57基因敲除的A549细胞系。erp57基因敲除细胞系与野生型细胞生长动力学无显著差异。此外,将H1N1亚型流感病毒分别感染野生型和erp57基因敲除细胞系以测定erp57基因敲除对流感病毒复制水平的影响。结果显示流感病毒在erp57基因敲除细胞中的复制显著地受到了抑制,表明ERp57是流感病毒复制过程中的一个关键蛋白。本研究为开发新的抗流感病毒手段提供了相关的实验依据。; 关键词 erp57 CRISPR/Cas9系统基因敲除流感病毒; Keywords erp57 CRISPR/Cas9 system gene knockout influenza virus; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价被引量：3: 2; 作者王成双马秀英郑君贾洪林王新; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-密歇根州立大学天然免疫联合实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期312-315,共4页; 基金兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP2015012); 文摘棒状体蛋白(Rops)是弓形虫的一类与侵入、复制相关的重要分泌蛋白。Rop46蛋白在弓形虫急性感染阶段和慢性感染阶段的表达存在显著差异。为探究Rop46的生物学功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了Rop46基因敲除重组质粒,制备了Rop46基因缺失虫株。序列分析表明,基因缺失虫株中的Rop46基因的编码序列缺失了82个碱基,证明本研究构建的基因敲除重组质粒能够有效的在弓形虫PLK虫株中敲除目的基因。利用流式细胞术对Rop46基因缺失虫株的生长特性进行检测和分析,结果显示Rop46基因缺失虫株的侵入和复制效率显著降低,表明缺失Rop46基因可能对PLK虫株的侵入及复制能力具有显著影响。; 关键词弓形虫 Rop46 CRISPR/Cas9; Keywords Toxoplasma gondii Rop46 CRISPR/Cas9; 分类号 S852.72 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系被引量：3: 3; 作者徐广军曹世诺郑君张险峰贾洪林郑永辉; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-美国密歇根州立大学天然免疫联合实验室兽医生物技术国家重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期45-49,共5页; 基金中国农业科学院创新工程经费; 文摘由干扰素诱导细胞产生的GTP蛋白酶M(IRGMs)在抵御病原微生物中发挥着核心作用。为建立IRGMs基因缺失的MDCK细胞系,本研究利用CRISPR/Cas9技术根据MDCK中IRGM4、IRGM5和IRGM6的基因序列设计并合成正链和负链引导RNA(gRNA)的靶DNA序列,以本实验室构建的含有单链引导RNA(sgRNA)骨架转录序列的通用质粒(p Gen-sgRNA)为模板,将U6启动子与合成的相关基因gRNA靶序列经PCR融合扩增,其产物再与sgRNA的骨架转录序列进行重叠延伸PCR扩增,并将扩增产物克隆于p GEM-T载体中,分别构建了具有靶向不同目的基因ORF的gRNA重组质粒。将这些重组质粒分别与pMJ920质粒共转染于MDCK细胞中,通过G418筛选和流式细胞仪分选,并以终点稀释法纯化培养筛选出的单细胞克隆株。经gRNA靶序列片段的测序鉴定,获得了目的基因敲除的MDCK细胞系,并分别命名为MDCK-IRGM4-、MDCK-IRGM5-和MDCKIRGM6-。通过western blot检测经γ干扰素诱导条件下的这3种IRGMs基因在敲除细胞系中相应的蛋白表达均为阴性。这3种MDCK细胞IRGMs敲除的细胞系的建立,为进一步研究IRGMs基因在抗细胞内病原微生物感染中的功能奠定了基础。; 关键词 CRISPR/Cas9 MDCK IRGM4 IRGM5 IRGM6; Keywords CRISPR/Cas9 MDCK IRGM4 IRGM5 IRGM6; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名弓形虫Rop32与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选被引量：1: 4; 作者马秀英郑君王成双贾洪林; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-密歇根州立大学天然免疫联合实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期471-474,共4页; 基金兽医生物技术国家重点实验室自主课题(SKLVBP2015012); 文摘弓形虫棒状体蛋白32(Rop32)是由弓形虫棒状体在感染细胞中分泌于宿主细胞中的磷酸激酶,但其功能尚不清楚。为筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白,本研究利用构建的p GBKT7-Rop32诱饵质粒转化酵母菌株Y2H,通过表型从人包皮成纤维细胞文库中筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白。结果表明p GBKT7-Rop32诱饵质粒无自激活和细胞毒性作用。通过酵母双杂交,共筛选到12个与Rop32具有相互作用的宿主细胞蛋白。将筛选的阳性克隆进行序列分析结果表明,筛选到的蛋白包括1个参与蛋白转运相关蛋白、1个凋亡相关蛋白、1个细胞骨架蛋白、1个参与能量转化的磷酸转移酶以及8个其它蛋白。利用免疫共沉淀试验进一步验证了Rop32和SEC63蛋白之间的特异性相互作用。Rop32与参与蛋白转运的SEC63的相互作用提示Rop32可能在弓形虫对营养物质和代谢物的运输过程中发挥作用。; 关键词刚地弓形虫 Rop32 酵母双杂交技术免疫共沉淀试验; Keywords Toxoplasma gondii Rop32 Yeast two-hybrid Co-IP; 分类号 S852.7 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	宿主细胞erp57基因敲除抑制流感病毒复制的研究	胡丹王斌冷有龙王玉杰于群郑永辉范春玲	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价	王成双马秀英郑君贾洪林王新	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
3	基于CRISPR/Cas9技术构建犬IRGM4、IRGM5和IRGM6基因敲除的MDCK细胞系	徐广军曹世诺郑君张险峰贾洪林郑永辉	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	3	在线阅读下载PDF 职称材料
4	弓形虫Rop32与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选	马秀英郑君王成双贾洪林	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料