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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：1: 1; 作者李凯高宏雷 +4 位作者祁小乐高玉龙高立邓小芸王笑梅《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页; 为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞... 展开更多; 关键词禽网状内皮组织增生症病毒 ENV基因原核表达纯化多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达: 2; 作者徐延伟高宏雷 +6 位作者高玉龙李凯高立秦立廷祁小乐王永强王笑梅《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期42-46,共5页; 为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得... 展开更多; 关键词 J亚群禽白血病 GP85基因毕赤酵母分泌表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备: 3; 作者孙美玉秦立廷 +4 位作者高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅《中国家禽》北大核心 2011年第12期18-21,共4页; 通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分... 展开更多; 关键词禽呼肠孤病毒 σC基因原核表达兔抗血清; 在线阅读下载PDF 职称材料

TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数被引量：6: 4; 作者李凯高宏雷 +4 位作者高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期742-746,共5页; 以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同... 展开更多; 关键词 TaqMan荧光定量PCR 毕赤酵母基因拷贝数 GAP基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测被引量：1: 5; 作者李冰李慧昕 +4 位作者王钰韩宗玺邵昱昊刘小丽孔宪刚《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期19-23,共5页; 为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原... 展开更多; 关键词鸭肠炎病毒 gL糖蛋白原核表达真核表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：1: 1; 作者李凯高宏雷祁小乐高玉龙高立邓小芸王笑梅; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期812-814,共3页; 基金现代农业肉鸡产业技术体系建设(nycyts-42-G3-01); 文摘为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。; 关键词禽网状内皮组织增生症病毒 ENV基因原核表达纯化多克隆抗体; Keywords reticuloendotheliosis virus env gene prokaryotic expression purification polyclonal antibody; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达: 2; 作者徐延伟高宏雷高玉龙李凯高立秦立廷祁小乐王永强王笑梅; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期42-46,共5页; 基金现代农业肉鸡产业技术体系建设(nycyts-42-G3-01); 文摘为获得J亚群禽白血病病毒gp85蛋白,将gp85基因克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建了pPIC9K-gp85表达载体。将鉴定正确的表达载体经SalⅠ酶切线性化后电转化毕赤酵母宿主菌GS115,经MD及G418抗性平板筛选后挑取阳性克隆进行PCR鉴定,获得重组酵母菌株GS115/pPIC9K-gp85。对阳性重组菌进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE、Western blotting和Dot-ELISA分析,结果表明,gp85基因在毕赤酵母中获得分泌表达,表达产物与J亚群禽白血病病毒多克隆抗体有良好的反应活性,分泌表达量达40mg/L。本研究为J亚群禽白血病病毒诊断方法的建立及gp85蛋白的深入研究奠定了基础。; 关键词 J亚群禽白血病 GP85基因毕赤酵母分泌表达; Keywords ALV-J gp85 gene Pichia pastoris secretory expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备: 3; 作者孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室; 出处《中国家禽》北大核心 2011年第12期18-21,共4页; 基金现代农业产业技术体系建设专项资金(nycytx-42-G3-01); 文摘通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分子量约为42ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白经纯化后免疫新西兰白兔,三次免疫获得抗σC蛋白的高效免疫血清。经ELISA检测,该血清抗体效价为1∶105,并且能够与重组杆状病毒表达的σC蛋白发生特异性反应。禽呼肠孤病毒σC蛋白的表达与兔抗血清的制备为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。; 关键词禽呼肠孤病毒 σC基因原核表达兔抗血清; Keywords avian reovirus σC gene prokaryotic expression rabbit antiserum; 分类号 S852.659.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数被引量：6: 4; 作者李凯高宏雷高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室兽医生物技术国家重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期742-746,共5页; 基金现代农业肉鸡产业技术体系建设(nycytx-42-G3-01); 文摘以3-磷酸甘油醛脱氢酶为内参基因,建立一种快速检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的TaqMan荧光定量PCR方法。通过对反应参数进行优化,建立针对目的基因和内参基因的双标准曲线,并对重组酵母基因组中外源基因和内参基因的拷贝数进行同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在重组酵母菌株基因组中的拷贝数。结果表明,2条标准曲线在101～108拷贝.μL-1具有良好的线性关系,以及良好的敏感性和重复性。利用该方法对60株重组酵母菌株进行荧光定量PCR检测,结果筛选到38株单拷贝插入菌株和22株多拷贝插入菌株。本研究所建立的TaqMan探针荧光定量PCR方法方便、高效,可用于重组毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的检测。; 关键词 TaqMan荧光定量PCR 毕赤酵母基因拷贝数 GAP基因; Keywords TaqMan real-time PCR Pichia pastoris gene copy number GAP gene; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测被引量：1: 5; 作者李冰李慧昕王钰韩宗玺邵昱昊刘小丽孔宪刚; 机构中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期19-23,共5页; 基金黑龙江省自然科学基金(QC08C12) 中国博士后科学基金(2008440920) 黑龙江省博士后资助项目(LBH-Z08022); 文摘为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。; 关键词鸭肠炎病毒 gL糖蛋白原核表达真核表达; Keywords duck enteritis viral glycoprotein L prokaryotic expression eukaryotic expression; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备	李凯高宏雷祁小乐高玉龙高立邓小芸王笑梅	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2010	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	J亚群禽白血病病毒gp85基因在毕赤酵母中的分泌表达	徐延伟高宏雷高玉龙李凯高立秦立廷祁小乐王永强王笑梅	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备	孙美玉秦立廷高玉龙祁小乐高宏雷王永强王笑梅	《中国家禽》北大核心	2011	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	TaqMan实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数	李凯高宏雷高立祁小乐高玉龙徐延伟王笑梅	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	6	在线阅读下载PDF 职称材料
5	鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测	李冰李慧昕王钰韩宗玺邵昱昊刘小丽孔宪刚	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料