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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
李凯
高宏雷
+4 位作者
祁小乐
高玉龙
高立
邓小芸
王笑梅
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期812-814,共3页
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞...
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。
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关键词
禽网状内皮组织增生症病毒
ENV基因
原核表达
纯化
多克隆抗体
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职称材料
鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测
被引量：
1
2
作者
李冰
李慧昕
+4 位作者
王钰
韩宗玺
邵昱昊
刘小丽
孔宪刚
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期19-23,共5页
为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原...
为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。
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关键词
鸭肠炎病毒
gL糖蛋白
原核表达
真核表达
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职称材料
题名
禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备
被引量：
1
1
作者
李凯
高宏雷
祁小乐
高玉龙
高立
邓小芸
王笑梅
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期812-814,共3页
基金
现代农业肉鸡产业技术体系建设(nycyts-42-G3-01)
文摘
为原核表达禽网状内皮组织增生症病毒(REV)env蛋白及制备抗env蛋白的高效价多克隆抗体,本研究以pMD18T-env(HLJR0901株)为模板,扩增得到REV的env全长基因,将其克隆于pET-32a(+)中。将阳性重组质粒pET-env转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,复性后免疫BALB/c小鼠,制备抗env多克隆血清。SDS-PAGE及western blot结果表明,env基因以融合蛋白形式获得正确表达,相对分子质量约为84ku,表达产物具有良好免疫原性;IFA结果显示,制备的抗env多克隆血清能与REV野毒株特异性反应;ELISA效价达到1∶105以上。该研究为REV的检测及env蛋白的深入研究奠定了基础。
关键词
禽网状内皮组织增生症病毒
ENV基因
原核表达
纯化
多克隆抗体
Keywords
reticuloendotheliosis virus
env gene
prokaryotic expression
purification
polyclonal antibody
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测
被引量：
1
2
作者
李冰
李慧昕
王钰
韩宗玺
邵昱昊
刘小丽
孔宪刚
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所禽传染病研究室/兽医生物技术国家重点实验室
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期19-23,共5页
基金
黑龙江省自然科学基金(QC08C12)
中国博士后科学基金(2008440920)
黑龙江省博士后资助项目(LBH-Z08022)
文摘
为研究鸭肠炎病毒(DEV)gL蛋白在感染鸡胚成纤维细胞(CEF)过程中的表达情况,本研究以DEVClone-03基因组为模板,应用PCR方法分别扩增得到截短的(gLt,181 bp～711 bp)和全长的gL(1 bp～711 bp)两个基因片段。将gLt基因片段克隆至pET-30a原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化复性,免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗gL蛋白多克隆抗体。同时将全长gL基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA-gL,转染293T细胞。采用获得的抗gL蛋白抗体检测DEV感染CEF后及真核表达质粒pcDNA-gL转染293T细胞后gL蛋白在不同时间点的表达情况。结果表明,在pcDNA-gL转染293T细胞后12 h应用western blot方法能够检测到gL蛋白的表达,其表达量随着转染时间增加而增加;在病毒感染CEF后24 h应用间接免疫荧光方法能够检测到gL蛋白少量的表达,western blot方法在病毒感染CEF48 h后检测到gL蛋白的表达,其表达量随着病毒感染时间增加而增加。上述结果提示,编码gL蛋白基因可能是病毒复制的晚期表达基因。
关键词
鸭肠炎病毒
gL糖蛋白
原核表达
真核表达
Keywords
duck enteritis viral
glycoprotein L
prokaryotic expression
eukaryotic expression
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备
李凯
高宏雷
祁小乐
高玉龙
高立
邓小芸
王笑梅
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
2
鸭肠炎病毒gL蛋白在鸡胚成纤维细胞中动态表达的检测
李冰
李慧昕
王钰
韩宗玺
邵昱昊
刘小丽
孔宪刚
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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