动物病原微生物研究与生物安全 被引量：3

1

作者 韩凌霞 《动物医学进展》 CSCD 2005年第11期102-104,共3页

文章分析了从事动物病原微生物研究在实验室造成生物危害的原因,介绍了我国和世界卫生组织对动物病原微生物的危害程度的分类,以及相应级别的生物安全实验室和生物安全规定,并着重描述了我国目前应用较多的Ⅱ级和Ⅲ级生物安全实验室的... 文章分析了从事动物病原微生物研究在实验室造成生物危害的原因,介绍了我国和世界卫生组织对动物病原微生物的危害程度的分类,以及相应级别的生物安全实验室和生物安全规定,并着重描述了我国目前应用较多的Ⅱ级和Ⅲ级生物安全实验室的主要特征,指出动物病原微生物及利用其进行的重组核酸技术及其获得的转基因产品都存在一定的潜在的生物安全问题,必须引起足够的重视。 展开更多

关键词 动物病原微生物 生物安全 重组核酸技术

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组织相容性复合体在实验鸡中的应用 被引量：7

2

作者 高彩霞 韩凌霞 韩建林 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第2期1-5,共5页

鸡主要组织相容性复合体(MHC)基因位于鸡16号染色体上,具有高度的多态性。现已发现,不同MHC-B单倍体对各种疾病的抗性不同。本文主要介绍了鸡MHC的结构特点、鸡MHC与抗病性的关系、鸡MHC检测方法的研究进展以及其在鸡抗病育种中的应用... 鸡主要组织相容性复合体(MHC)基因位于鸡16号染色体上,具有高度的多态性。现已发现,不同MHC-B单倍体对各种疾病的抗性不同。本文主要介绍了鸡MHC的结构特点、鸡MHC与抗病性的关系、鸡MHC检测方法的研究进展以及其在鸡抗病育种中的应用前景。 展开更多

关键词 鸡MHC 抗病育种 遗传质量控制

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无特定病原体京白鸡的G带和C带研究 被引量：1

3

作者 高鹏飞 曲连东 +1 位作者 关云涛 韩凌霞 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第8期43-45,共3页

作者以无特定病原体京白鸡为研究对象,采用骨髓法制备染色体标本,进行了G-带和C-带分析。G-带结果表明,前8对大型染色体可分为29个区、61条深带,共139条带。C-带结果表明,整条W染色体深染,而大型染色体的带型随细胞周期不同而不同。

关键词 无特定病原体 京白鸡 G-带带型 C-带带型

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无特定病原体京白鸡的核型研究 被引量：1

4

作者 韩凌霞 高鹏飞 +1 位作者 关云涛 曲连东 《中国家禽》 北大核心 2005年第z1期98-101,共4页

采用腹腔注射秋水仙素,取骨髓细胞制备染色体标本,对无特定病原体京白鸡的核型进行了分析。并根据前10对染色体相对长度、臂比值及着丝点指数的测量结果,与已公布的其它地方鸡品种进行了比较。

关键词 京白鸡 染色体 核型

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黑龙江省实验大鼠遗传学概貌分析 被引量：1

5

作者 韩凌霞 刘霄磊 +3 位作者 牛成明 周刚 司昌德 曲连东 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第2期48-50,共3页

目的对送检的黑龙江省生产的实验大鼠遗传概貌进行分析。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》GB/T14927.1-2001,应用乙酸纤维素板,利用Akp1、Es1、Es3、Es4、Es6、Es8、Es9和Es10等8种同工酶位点,对来自编号... 目的对送检的黑龙江省生产的实验大鼠遗传概貌进行分析。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》GB/T14927.1-2001,应用乙酸纤维素板,利用Akp1、Es1、Es3、Es4、Es6、Es8、Es9和Es10等8种同工酶位点,对来自编号分别为2011、2014、3026、8028和8029的5个单位的SD、Wistar、DA、PVG等4个品系的25只实验大鼠,进行生化标记位点的检测。结果除单位2014的SD大鼠在Es3存在a和b两种带型,8028和8029未检测Es10、2014和3026未检测Es6,8,9,其余各单位的大鼠在8个位点都表现出相同的带型。结论送检的黑龙江省生产的SD和Wistar大鼠符合封闭群遗传学概貌;DA和PVG大鼠样品间带型一致。 展开更多

关键词 生化标记位点 大鼠 遗传概貌

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宠物鸟H3N8亚型流感病毒HA基因的特征性分析 被引量：4

6

作者 张云 刘明 +5 位作者 倪健强 华荣虹 于康震 曲连东 Richar Webby Robert GWebster 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期420-424,共5页

来自香港和世界各地的10株宠物鸟H3N8流感病毒的HA基因进行了全基因序列测定,用DNASTAR和Tree View软件进行序列编辑,序列翻译,进化树绘制和分子演化分析。结果表明来自不同国家和地区的H3N8流感病毒的HA基因都非常相似,都形成一个独立... 来自香港和世界各地的10株宠物鸟H3N8流感病毒的HA基因进行了全基因序列测定,用DNASTAR和Tree View软件进行序列编辑,序列翻译,进化树绘制和分子演化分析。结果表明来自不同国家和地区的H3N8流感病毒的HA基因都非常相似,都形成一个独立的分支,属于欧亚亚系,同源率为95 9%～100%;香港2001年宠物鸟的毒株之间的同源率最高,分别为99 2%～100%。HA基因与A/Equine/Jilin/89(H3N8)的同源性为最高,在92 9%～93 6%之间。氨基酸分析表明只有A/Parakeet/Netherland/33/01的HA基因在97～99受体结合位点处有一个额外潜在的糖基化位点NKT;因此可见宠物鸟H3N8流感病毒的HA基因高度保守,HA基因均来自共同的祖先。 展开更多

关键词 HA基因 宠物鸟 位点 流感病毒 毒株 同源性 基因序列测定 亚型 受体结合 糖基化

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鹅呼肠孤病毒GRV1株分离鉴定及其σC基因特征性分析 被引量：7

7

作者 郭东春 张云 +4 位作者 刘明 欧阳岁东 胡奇林 张序 刘怀然 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期257-260,共4页

从患运动障碍的雏鹅肝脏和脾脏分离到一株鹅源呼肠孤病毒,该病毒经琼脂扩试验可与番鸭呼肠孤病毒(MuscovyDuckReovirus,MDRV)的抗血清发生交叉反应,推测其为呼肠孤病毒,命名为GRV1。参考GenBank禽呼肠孤病毒(AvianReovirus,ARV)和番鸭... 从患运动障碍的雏鹅肝脏和脾脏分离到一株鹅源呼肠孤病毒,该病毒经琼脂扩试验可与番鸭呼肠孤病毒(MuscovyDuckReovirus,MDRV)的抗血清发生交叉反应,推测其为呼肠孤病毒,命名为GRV1。参考GenBank禽呼肠孤病毒(AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒小外壳蛋白(minorcoreprotein)σC蛋白基因序列设计合成了一对引物,病毒RNA经RT-PCR扩增,产物为810bp,与预期的目的片断大小一致,测序结果表明σC基因在280～1089区间是一个开放性阅读框架,编码269个氨基酸的蛋白,GC含量为49.88%,等电点为6.497,分子量为29.4Ku。核苷酸序列经DNAStar(6.0)软件分析,与法国番鸭呼肠孤病毒89026株核苷酸同源率为93.0%,与鸡呼肠孤病毒σC基因同源率仅为21%～25%,同源性分析表明鹅呼肠孤病毒与番鸭呼肠孤病毒可能来自同一祖先,建议将鹅呼肠孤病毒连同番鸭呼肠孤病毒归属为正呼肠孤病毒属第二个亚群中不同于禽和内尔森贝海湾呼肠病毒的独立基因群。由蛋白质分析软件Anthepro5.0和MultiCoil软件分析表明,抗原区多位于N末端,没有跨膜区,σC为三股螺旋结构,这是我国第一次在鹅体内分离到呼肠孤病毒,同时也是第一次在数据库中提供σC的序列。 展开更多

关键词 鹅呼肠孤病毒 同源性 小核心蛋白(σC) 基因特征

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PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验 被引量：5

8

作者 韩凌霞 刘建华 +3 位作者 陈艳 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期241-247,270,共8页

将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋... 将猪圆环病毒2型(Type2porcinecircovirus,PCV2)JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中,获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系,盲传4代后,利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验(IFA),能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA经腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头,分别接种2、3次,接种剂量500μg/次,首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间,动物未出现明显临床症状。试验结束,病理切片结果显示,不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象;肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原;血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价达12∶560,IFA效价为11∶280;通过聚合酶链式反应(PCR)可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT-PCV在体内、外均具有感染性,能衍生出病毒,并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化,并激发较强的体液免疫应答。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2 病毒分子克隆 感染性 抗体试验

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无特定病原体HBK-B和HBK-Q种鸭的遗传多样性分析 被引量：6

9

作者 肖兵兵 韩凌霞 +4 位作者 于海波 司昌德 徐佳 曲连东 韩建林 《中国家禽》 北大核心 2008年第18期23-26,共4页

利用18个微卫星标记对国家实验禽类种子中心保存的HBK-B和HBK-Q两个封闭鸭群进行遗传分析。试验结果表明:两个群体中各有7个位点的多态信息含量(PIC)大于0.5,18个微卫星标记的平均PIC分别为0.474和0.480,呈中度多态;校正后的等位基因丰... 利用18个微卫星标记对国家实验禽类种子中心保存的HBK-B和HBK-Q两个封闭鸭群进行遗传分析。试验结果表明:两个群体中各有7个位点的多态信息含量(PIC)大于0.5,18个微卫星标记的平均PIC分别为0.474和0.480,呈中度多态;校正后的等位基因丰富度分别为3.56和3.54,表明这两个群体的遗传多样性基本相同。等位基因频率差异的卡方检验和两个群体间的遗传分化系数FST值显著水平的检验均证明这两个群体间的遗传分化已经达到了极显著水平(P<0.01),趋于形成两个不同的品系,但在今后的选育过程中应该对已经存在的近交加以控制。 展开更多

关键词 无特定病原体 HBK鸭 微卫星 多态性

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应用微卫星DNA标记对BWEL-SPF鸡种群的群体遗传学分析 被引量：6

10

作者 肖兵兵 韩凌霞 +2 位作者 牛成明 司昌德 韩建林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期106-111,共6页

本研究利用14个鸡微卫星DNA标记位点,采用DNA测序仪和荧光素标记分子内标,建立了鸡分子遗传学的检测方法,对F15世代BWEL-SPF鸡种群8个家系群体内和群体间的遗传结构进行了分析。结果表明,被检位点35.7%(5/14)的基因型趋于纯合,家系内等... 本研究利用14个鸡微卫星DNA标记位点,采用DNA测序仪和荧光素标记分子内标,建立了鸡分子遗传学的检测方法,对F15世代BWEL-SPF鸡种群8个家系群体内和群体间的遗传结构进行了分析。结果表明,被检位点35.7%(5/14)的基因型趋于纯合,家系内等位基因的变异程度显著降低。F-统计量检验结果表明,家系间的遗传分化均达到了极显著水平(P<0.001),群体间的变异占到了总遗传变异的12.9%。 展开更多

关键词 微卫星DNA标记 SPF鸡 遗传变异

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HBK-SPF鸭主要解剖数据的测定 被引量：7

11

作者 韩凌霞 刘霄磊 +3 位作者 蔡文博 于海波 李淑兰 曲连东 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第4期66-69,共4页

目的分别测定7日龄和56日龄的HBK-SPF鸭的解剖学数据,并分析比较性别之间的差异。方法采用常规方法测定7日龄和56日龄的雌、雄HBK-SPF鸭的解剖数据,并对雌雄差异进行了统计学分析。结果在所测定的解剖数据中,不同日龄、性别之间表现差... 目的分别测定7日龄和56日龄的HBK-SPF鸭的解剖学数据,并分析比较性别之间的差异。方法采用常规方法测定7日龄和56日龄的雌、雄HBK-SPF鸭的解剖数据,并对雌雄差异进行了统计学分析。结果在所测定的解剖数据中,不同日龄、性别之间表现差异显著性的项目不同,其中7日龄时,左肾、右肾存在性别差异,达到极显著(P<0.01),胫围和盲肠2存在显著性别差异(P<0.05);56日龄时,只有胸腺存在极显著性别差异(P<0.01),盲肠1和直肠差异显著(P<0.05),其它解剖数据在雌雄之间差异不显著。结论不同日龄的HBK-SPF鸭的解剖数据和脏器参数存在性别差异。 展开更多

关键词 HBK-SPF鸭 解剖数据 性别差异

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猪2型圆环病毒原核表达产物的免疫原性测定 被引量：2

12

作者 韩凌霞 司昌德 +2 位作者 刘怀然 姜骞 曲连东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第2期118-121,F0003,共5页

目的检测猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组原核表达产物的免疫原性。方法根据PCV2JXL株序列(GenBank登录号AY491310),设计合成引物,利用多聚酶链式反应(PCR)从含有PCV2接种猪肾细胞PK15中扩增了Cap蛋白的氨基端片段(737-421nt),克隆入上游... 目的检测猪2型圆环病毒(PCV2)全基因组原核表达产物的免疫原性。方法根据PCV2JXL株序列(GenBank登录号AY491310),设计合成引物,利用多聚酶链式反应(PCR)从含有PCV2接种猪肾细胞PK15中扩增了Cap蛋白的氨基端片段(737-421nt),克隆入上游带有谷光苷肽-S-转移酶的原核表达载体pGEX-6p-1中,获得重组质粒pGEX-PCV737-421。PCV2Cap蛋白羧基端(426-37nt)和Rep蛋白已在过去的研究中分别融合表达。利用IPTG对3种重组大肠杆菌BL21进行诱导,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分析(SDS-PAGE)以及对PCV2阳性猪多抗血清的蛋白免疫印迹试验,在此基础上,将3种SDS-PAGE分离粗纯的重组表达产物碾碎后分别免疫BALB/c小鼠,用获得的抗鼠血清与PCV2病毒感染PK15细胞做间接免疫荧光抗体试验(IFA)。结果PCV2Cap蛋白的氨基端片段能在大肠杆菌中表达,且Cap蛋白羧基端和Rep蛋白的原核表达产物都能在免疫印迹试验中被PCV2阳性猪血清检测出特异性条带,重组蛋白免疫鼠血清可在IFA试验中观察到特异性的荧光分布,即检测到培养细胞中的病毒抗原。结论PCV2全基因组都可以用原核系统高效表达,且表达产物具有免疫原性。 展开更多

关键词 圆环病毒属 荧光抗体技术 间接 免疫印迹法

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鸡生化基因位点检测方法的建立及在SPF鸡群中的应用 被引量：2

13

作者 韩凌霞 高鹏飞 +2 位作者 刘霄磊 司昌德 曲连东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第2期161-163,I0012,共4页

目的建立鸡生化标记检测方法,用于SPF鸡群的遗传学检测。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》,应用乙酸纤维素板,建立SPF鸡生化标记位点的检测方法。结果共有7种同工酶可以用于鸡的生化检测,其中血红蛋白-β... 目的建立鸡生化标记检测方法,用于SPF鸡群的遗传学检测。方法参照国家标准《实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法》,应用乙酸纤维素板,建立SPF鸡生化标记位点的检测方法。结果共有7种同工酶可以用于鸡的生化检测,其中血红蛋白-β链(Hbb)的检测组织为溶血素,转铁蛋白酶(Trf)的检测组织为肺脏,碳酸酐酶-2(Car2)的检测组织为肝脏或溶血素,异柠檬酸脱氢酶-1(Idh1)、苹果酸酶-1(Mod1)、碱性磷酸酶-1(Akp1)检测组织为肾脏,酯酶-1(Es1)检测组织为血清。结论建立了鸡生化标记检测方法,并对BWEL-SPF鸡群和Line-22鸡群进行了分析,发现都存在多态性。 展开更多

关键词 SPF鸡 生化标记位点 乙酸纤维板电泳法

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EIAV基因转移载体包装盒表达质粒的构建

14

作者 韩凌霞 尹岚岚 +3 位作者 李亚明 牛成明 高鹏飞 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期183-187,共5页

在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体成功构建并优化的基础上,构建了EIAV基因转移载体包装盒表达重组质粒。分别根据EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆(pLGFD3-8)和驴白细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆pOK8266T序列,设计并合成... 在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体成功构建并优化的基础上,构建了EIAV基因转移载体包装盒表达重组质粒。分别根据EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆(pLGFD3-8)和驴白细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆pOK8266T序列,设计并合成引物,扩增EIAVgag/pol全基因和rev基因的第2个外显子,分别插入真核表达载体pCDNA3.1(+),获得表达载体pCDFGP和pCDREV,与亲本株的核苷酸同源性分别是99.6%和99.8%,编码蛋白Gag、Pol及Rev蛋白的推测氨基酸同源性分别为99.2%、98.3%和100%。利用脂质体法,分别将pCDFGP和pCDREV单独及共转染HEK293细胞,利用EIAV阳性血清分别进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(westernblot),检测外源蛋白的表达情况。结果表明,双质粒共转染的细胞中转染后48h可检测到特异性荧光,转染后60h的细胞裂解产物中可以检测到55ku的Gag蛋白及26ku的p26蛋白,而单独转染pCDFGP和pCDREV的细胞,IFA和western blot试验结果均为阴性。结果表明同时存在gag/pol和rev基因第4外显子的情况下,EIAV包装盒才能表达。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 gag/pol基因 rev基因

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EIAV基因转移载体转录后调控元件的优化

15

作者 李亚明 韩凌霞 +5 位作者 曲连东 司昌德 秦海斌 杨增岐 于海波 徐佳 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第2期1-6,共6页

【目的】为了提高马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体质粒pcPPTPRE(+)的外源蛋白表达能力,对其转录后调控元件进行优化。【方法】将PCR扩增土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus,WHV)转录后调控元件(WPRE),克隆于pGM-T载体获得重... 【目的】为了提高马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体质粒pcPPTPRE(+)的外源蛋白表达能力,对其转录后调控元件进行优化。【方法】将PCR扩增土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck Hepatitis Virus,WHV)转录后调控元件(WPRE),克隆于pGM-T载体获得重组质粒pGM-WPRE,利用NotⅠ酶将WPRE亚克隆入pcPPTPRE(+),筛选WPRE正向连接的重组质粒pcPPTWPRE,采用磷酸钙法分别将pcPPTWPRE和pcPPTPRE(+)转染HEK293细胞和DF-1细胞,利用荧光显微镜观察EGFP蛋白的表达,利用流式细胞仪检测转染细胞中EGFP阳性细胞的表达率。【结果】在HEK293细胞中,pcPPTWPRE表达外源基因的能力极显著优于pcPPTPRE(+);在DF-1细胞中,pcPPTWPRE与pcPPTPRE(+)表达外源基因的能力均不强,但前者略优于后者。【结论】土拨鼠肝炎病毒转录后,调控元件(WPRE)可以明显增强EIAV载体质粒的外源蛋白表达能力,为高表达能力伪型EIAV重组病毒的获得奠定了基础,同时也为其他病毒载体的构建提供了借鉴。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 土拨鼠肝炎病毒 转录后调控元件 基因转移载体 增强绿色荧光蛋白

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不同周龄雌雄SJ5-SPF鸡生理常数及血液生化指标的测定与分析 被引量：7

16

作者 赵丽丽 文辉强 +3 位作者 韩凌霞 赵丽 彭一良 李淑兰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第6期59-64,共6页

目的为探讨年龄和性别因素对SJ5-SPF鸡生理生化指标的影响。方法采用全自动血液分析仪对不同周龄SJ5-SPF鸡血液生化指标进行测定,包括谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转移酶(GGT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(... 目的为探讨年龄和性别因素对SJ5-SPF鸡生理生化指标的影响。方法采用全自动血液分析仪对不同周龄SJ5-SPF鸡血液生化指标进行测定,包括谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转移酶(GGT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、间接胆红素(IBIL)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TCH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、钾(K)、钠(Na)、钙(Ca),共19项。同时还用RM6240C多道生理信号采集处理系统对不同周龄SJ5-SPF鸡的体温(T)、呼吸频率(R)、心率(HR)、舒张压(DBP)和收缩压(SBP)进行测定。结果 (1)生理常数所测定体温、呼吸频率、心率、舒张压和收缩压五项指标中,组间相比,4周龄与20、25、40周龄比较均有显著性差异(P<0.05),同一周龄雌雄间只有体温没有差异;舒张压只在40周龄存在极显著性差异(P<0.01);心率在4周龄、20周龄和25周龄雌、雄间存在极显著性差异(P<0.01);而呼吸频率和收缩压雌、雄间在4个周龄均有显著性差异(P<0.05)。(2)血液生化指标测定19项显示,组间相比,雌性各周龄之间只有谷丙转氨酶差异无显著性(P>0.05),雄性仅有谷丙转氨酶和葡萄糖差异无显著性(P>0.05),其余生化指标均存在一定的差异;同一周龄雌雄间相比,谷氨酰转移酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、葡萄糖、尿素氮和钠只有1个周龄差异有显著性(P<0.05),乳酸脱氢酶、总蛋白、球蛋白、白蛋白和肌酐在2个周龄差异有显著性(P<0.05),碱性磷酸酶、甘油三酯和钙在3个周龄差异有显著性(P<0.05),而胆固醇和钾在4个周龄差异有显著性(P<0.05)。结论本研究测定的结果可为SJ5-SPF鸡的疾病诊断、动物检疫和相关的研究提供科学依据。 展开更多

关键词 生理指标 生化指标 SJ5-SPF鸡

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鸡源REV对HBK-SPF雏鸭的感染试验 被引量：5

17

作者 牛成明 韩凌霞 +1 位作者 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期738-740,共3页

为研究鸡源网状内皮组织增殖病病毒(REV)对HBK无特定病原体(SPF)鸭的致病性,利用鸡源REV现地分离株REV-HN,分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF)、鸭胚(尿囊腔和卵黄囊腔接种)和雏鸭(口腔接种),试验设空白对照组,雏鸭还设有同居感染组。接种REV... 为研究鸡源网状内皮组织增殖病病毒(REV)对HBK无特定病原体(SPF)鸭的致病性,利用鸡源REV现地分离株REV-HN,分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF)、鸭胚(尿囊腔和卵黄囊腔接种)和雏鸭(口腔接种),试验设空白对照组,雏鸭还设有同居感染组。接种REV后不同时间收获DEF和胚体,及雏鸭的外周血淋巴细胞(PBL)和免疫器官,提取基因组DNA,通过RT-PCR和PCR方法检测REV前病毒env基因。结果在DEF中未检测到特异性的env基因片段,而在卵黄囊接种后72h鸭胚胚体和试验感染的雏鸭PBL中检测到。接种后30d,在1羽感染REV的雏鸭肾、胸腺和法氏囊中检测到REV前病毒。本研究为利用SPF鸭研究REV提供了依据。 展开更多

关键词 HBK-SPF鸭 网状内皮组织增殖病毒 感染试验

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不同周龄、性别对SJ5-SPF鸡主要脏器系数、肠道长度和体尺的影响 被引量：5

18

作者 赵丽丽 韩凌霞 +2 位作者 于海波 刘志涛 李淑兰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期67-71,共5页

目的分析不同周龄SJ5-SPF鸡脏器系数、肠道长度和体尺变化趋势及性别差异,为实验动物性别选择提供实验数据。方法选用4周、20周、25周和40周SJ5-SPF鸡,分别测定体重、15个主要脏器重量、5个主要肠道长度和6个主要体尺,计算脏器系数,并... 目的分析不同周龄SJ5-SPF鸡脏器系数、肠道长度和体尺变化趋势及性别差异,为实验动物性别选择提供实验数据。方法选用4周、20周、25周和40周SJ5-SPF鸡,分别测定体重、15个主要脏器重量、5个主要肠道长度和6个主要体尺,计算脏器系数,并对各周龄雌、雄SJ5-SPF鸡体重、脏器系数、肠道长度和体尺进行比较。结果体重在不同周龄雌雄之间差异均有显著性(P<0.01),所测得的脏器系数各周龄雌、雄之间均存在不同程度差异;在肠道长度中,空回肠和直肠在以上四个周龄中雌雄之间差异无显著性,其余肠道长度在部分周龄雌、雄之间有明显差异。在所测定的体尺中,体长、胫长、骨盆宽、胸深和胸宽雌、雄之间在上述四个周龄中有2个或3个周龄存在明显差异。结论周龄和性别对SJ5-SPF鸡的脏器系数、肠道长度和体尺都有影响。 展开更多

关键词 脏器系数 肠道长度 体尺 SJ5-SPF鸡

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仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量：2

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作者 周洁 赵丽娟 +3 位作者 陶凌云 倪丽菊 高诚 陈洪岩 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期293-298,共6页

目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进... 目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为2.1TCID_(50) SeV,比RT-PCR方法高102倍;肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致;通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。结论建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 仙台病毒 RT-LAMP 实时监控 快速检测

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EIAV基因转移载体的优化

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作者 尹岚岚 韩凌霞 +5 位作者 李亚明 司昌德 于海波 徐佳 曲连东 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期183-189,共7页

本研究在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体pcPPTPRE(+)的基础上[含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)],对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化。参考土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis ... 本研究在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体pcPPTPRE(+)的基础上[含有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)和人乙型肝炎病毒转录后调控元件(HPRE)],对其转录后调控元件和外源基因启动子进行优化。参考土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepatitis virus,WHV)基因组序列和人巨细胞病毒增强子/鸡β-actin启动子序列(CAGp),设计合成2对引物,分别扩增WHV转录后调控元件(WPRE)和CAGp片段,正向插入pcPPTPRE(+)获得重组质粒pcPPTWPRE和pcPPTWCAG。将获得的EIAV转移载体pcPPTWPRE和pcPPTWCAG以及pcPPTPRE(+),脂质体法分别转染人胚肾细胞HEK293和鸡胚成纤维细胞系DF-1,转染后12 h、24 h、36 h、48 h在荧光显微镜下观察特异性绿色荧光的表达。48 h后收获细胞,利用流式细胞仪检测转染细胞中表达EGFP的阳性细胞。结果表明,在HEK293细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均极显著高于pcPPTPRE(+)(P<0.01),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE(P<0.05);pcPPTWCAG的平均道数值极显著高于pcPPTPRE(+)和pcPPTWPRE,pcPPTWPRE显著高于pcPPTPRE(+)。在DF-1细胞中pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的阳性细胞平均百分率均显著高于pcPPTPRE(+),而pcPPTWPRE和pcPPTWCAG的平均道数值均极显著高于pcPPTPRE(+),pcPPTWCAG显著高于pcPPTWPRE。本研究利用WPRE和CAGp优化构建了EIAV基因转移载体pcPPTWCAG,获得了较强的基因表达能力,为以鸡为宿主进行转基因研究提供了条件。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 CAG启动子 WPRE 基因转移载体 绿色荧光蛋白

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