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禽流感病毒NP基因的真核表达及抗体检测芯片的建立
被引量：
5
1
作者
赵玉辉
王馥梅
+5 位作者
包红梅
孙晓东
路冰
熊永忠
陈化兰
王秀荣
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期362-365,共4页
为建立一种检测A型禽流感病毒(AIV)抗体的蛋白芯片,本研究以AIV总RNA为模板,RT-PCR方法扩增NP基因,与真核表达载体pFastBacHTa连接,并在昆虫细胞中表达。重组蛋白经纯化及westernblot鉴定,点样于醛基包被的载玻片上,制备检测AIV抗体的...
为建立一种检测A型禽流感病毒(AIV)抗体的蛋白芯片,本研究以AIV总RNA为模板,RT-PCR方法扩增NP基因,与真核表达载体pFastBacHTa连接,并在昆虫细胞中表达。重组蛋白经纯化及westernblot鉴定,点样于醛基包被的载玻片上,制备检测AIV抗体的蛋白芯片。确定芯片反应最佳条件为:点样浓度2mg/mL,固定24h,1%BSA进行封闭,一抗稀释度1∶100,二抗稀释度1∶2000。利用蛋白芯片分别对15个亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、抗新城疫病毒血清、抗法氏囊病毒血清和现地血清样品进行检测,通过与血凝抑制试验比较,表明建立的蛋白芯片方法具有良好的灵敏性和特异性,为AIV抗体检测及制备检测AIV不同亚型或多种病原抗体的蛋白芯片提供方法。
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关键词
流感病毒
NP蛋白
真核表达
蛋白芯片
在线阅读
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职称材料
抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析
被引量：
4
2
作者
文雪霞
包红梅
+5 位作者
孙佳善
赵玉辉
王云鹤
姜永萍
陈化兰
王秀荣
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期414-418,共5页
为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MA...
为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。
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关键词
禽流感
NS1蛋白
单克隆抗体
抗原表位
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职称材料
题名
禽流感病毒NP基因的真核表达及抗体检测芯片的建立
被引量：
5
1
作者
赵玉辉
王馥梅
包红梅
孙晓东
路冰
熊永忠
陈化兰
王秀荣
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室
浙江普洛医药科技有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期362-365,共4页
基金
公益性行业(农业)科研专向经费(200903055)
文摘
为建立一种检测A型禽流感病毒(AIV)抗体的蛋白芯片,本研究以AIV总RNA为模板,RT-PCR方法扩增NP基因,与真核表达载体pFastBacHTa连接,并在昆虫细胞中表达。重组蛋白经纯化及westernblot鉴定,点样于醛基包被的载玻片上,制备检测AIV抗体的蛋白芯片。确定芯片反应最佳条件为:点样浓度2mg/mL,固定24h,1%BSA进行封闭,一抗稀释度1∶100,二抗稀释度1∶2000。利用蛋白芯片分别对15个亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、抗新城疫病毒血清、抗法氏囊病毒血清和现地血清样品进行检测,通过与血凝抑制试验比较,表明建立的蛋白芯片方法具有良好的灵敏性和特异性,为AIV抗体检测及制备检测AIV不同亚型或多种病原抗体的蛋白芯片提供方法。
关键词
流感病毒
NP蛋白
真核表达
蛋白芯片
Keywords
influenza virus
NP protein
eukaryotic expression
protein microarray
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析
被引量：
4
2
作者
文雪霞
包红梅
孙佳善
赵玉辉
王云鹤
姜永萍
陈化兰
王秀荣
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室/兽医生物技术国家重点实验室
东北
农业
大学动物医学
学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第5期414-418,共5页
基金
十二五农村领域国家科技课题(2012AA101303)
哈尔滨市科技创新人才科研专项资金(RC2011XK002029)
社会公益研究专项计划(200903055)
文摘
为制备抗禽流感病毒(AIV)NS1蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位鉴定,本研究以原核表达并纯化的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA进行筛选,制备的D7和D9 2株能够稳定分泌抗NS1蛋白MAb的杂交瘤细胞,亚型鉴定均为IgG1型,轻链均为κ链。Western blot鉴定表明,这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。间接免疫荧光鉴定表明,这2株MAbs均能够识别真核表达的NS1蛋白。利用噬菌体展示技术得到D9对应的短肽WNLNTV,与NS1蛋白aa 182～aa 187基本匹配,提示182WNDNTV187为NS1蛋白的一个线性表位。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。
关键词
禽流感
NS1蛋白
单克隆抗体
抗原表位
Keywords
avian influenza virus
NS1 protein
monoclonal antibody
epitope
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽流感病毒NP基因的真核表达及抗体检测芯片的建立
赵玉辉
王馥梅
包红梅
孙晓东
路冰
熊永忠
陈化兰
王秀荣
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗禽流感病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析
文雪霞
包红梅
孙佳善
赵玉辉
王云鹤
姜永萍
陈化兰
王秀荣
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
4
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职称材料
已选择
0
条
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引证文献
统计分析
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