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猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
被引量：
4
1
作者
王宁
谨瑾
+4 位作者
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期1110-1118,共9页
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂...
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。
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关键词
猪肺炎支原体
单克隆抗体
P97蛋白
表位鉴定
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职称材料
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
2
作者
朱可蒙
谨瑾
+2 位作者
王宁
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期1073-1081,共9页
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB～DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD3...
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB～DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD322G,构建基因回补株ClplA-△lplA△lipB～DH5α和ClipB-△lplA△lipB～DH5α。通过Western blot、质谱分析和补偿试验等方法检测缺失株和回补株对底物的硫辛酸修饰功能。结果显示:上述突变株构建成功并能稳定遗传,回补株构建成功并能发挥生物学功能。补偿试验结果显示,在甘油为碳源的M9基础培养基中,回补株ClipB-△lplA△lipB～DH5α能够生长, ClplA-△lplA△lipB～DH5α补偿硫辛酸后能够生长。以上结果表明,大肠杆菌DH5α硫辛酸修饰功能缺陷菌株构建成功,这有利于以大肠杆菌为生物模型进行其他微生物硫辛酸修饰相关酶的功能研究。
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关键词
大肠杆菌
蛋白质硫辛酸修饰
RED同源重组
lplA
lipB
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职称材料
题名
猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
被引量：
4
1
作者
王宁
谨瑾
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体病创新团队
齐齐
哈尔
市
动物
卫生监督所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期1110-1118,共9页
基金
兽医生物技术国家重点实验室自主研究课题(SKLVBP201806)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专业(1610302017014)。
文摘
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。
关键词
猪肺炎支原体
单克隆抗体
P97蛋白
表位鉴定
Keywords
Mycoplasma hypneumoniae(Mhp)
monoclonal antibody(MAb)
P97 protein
epitope identification
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
R375.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
2
作者
朱可蒙
谨瑾
王宁
辛九庆
刘恒贵
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体病创新团队
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期1073-1081,共9页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302017014)
国家重点研发计划(2016YFD0500908)
文摘
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB～DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD322G,构建基因回补株ClplA-△lplA△lipB～DH5α和ClipB-△lplA△lipB～DH5α。通过Western blot、质谱分析和补偿试验等方法检测缺失株和回补株对底物的硫辛酸修饰功能。结果显示:上述突变株构建成功并能稳定遗传,回补株构建成功并能发挥生物学功能。补偿试验结果显示,在甘油为碳源的M9基础培养基中,回补株ClipB-△lplA△lipB～DH5α能够生长, ClplA-△lplA△lipB～DH5α补偿硫辛酸后能够生长。以上结果表明,大肠杆菌DH5α硫辛酸修饰功能缺陷菌株构建成功,这有利于以大肠杆菌为生物模型进行其他微生物硫辛酸修饰相关酶的功能研究。
关键词
大肠杆菌
蛋白质硫辛酸修饰
RED同源重组
lplA
lipB
Keywords
Escherichia coli
lipoic acid modification
Red homologous recombination
lplA
lipB
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
王宁
谨瑾
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
朱可蒙
谨瑾
王宁
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
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