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禽流感病毒M2蛋白抑制细胞自噬体降解的研究 被引量:2
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作者 谷琳琳 马勇 +4 位作者 包红梅 徐海峰 孙佳善 王秀荣 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期5-9,共5页
为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot... 为探究禽流感病毒(AIV)M2蛋白对细胞自噬的影响,本研究构建了pEGFP-LC3和pCAF-M2重组质粒,并采用脂质体将这两种重组表达质粒共转染293T细胞或Hela细胞中,同时以单独转染这两种重组质粒的细胞作为对照组,利用间接免疫荧光和westernblot的方法检测细胞自噬体及自噬流情况。自噬体检测结果表明,AIVM2蛋白能够诱导转染细胞内自噬体积累。通过LC3-IIturnover试验、mRFP-GFP-LC3双荧光指示系统以及pEGFP-LC3与LAMP1的共定位检测进一步证明,M2蛋白通过阻断自噬体与溶酶体融合,抑制溶酶体对自噬体的降解从而诱导自噬体积累。本研究揭示AIVM2蛋白对细胞自噬的发生具有重要作用,为深入研究自噬在A型流感病毒复制中的调节作用奠定基础。 展开更多
关键词 细胞自噬 AIV M2蛋白
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表达禽流感HA和NP双基因重组禽痘病毒的免疫保护性 被引量:8
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作者 乔传玲 姜永萍 +4 位作者 田国斌 邓国华 王秀荣 陈化兰 于康震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期178-181,共4页
将分别来自禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA基因和A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV HA NP)。将rFPV HA NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡... 将分别来自禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA基因和A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV HA NP)。将rFPV HA NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,并设亲本禽痘病毒免疫和非免疫对照组。免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒rFPV HA NP免疫鸡群后能够诱导产生高水平的特异性抗体,可完全抵抗H5N1毒株的致死性攻击,并可有效阻止H7N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明NP在与HA共同表达时,在诱导交叉保护性方面有一定的免疫增强功能。 展开更多
关键词 基因表达 禽流感 HA NP 双基因重组 禽痘病毒 免疫保护性
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H9亚型禽流感病毒血凝素特异性单因子血清制备 被引量:5
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作者 陈晓妹 王飞 +7 位作者 张翼 刘丽玲 田国斌 曾显营 管雪婷 程成 陈化兰 李雁冰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期439-442,共4页
为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧... 为制备特异性的H9亚型禽流感病毒(AIV)单因子血清,本研究分别将6株不同亚群的H9亚型AIV的血凝素(HA)基因以鸡偏嗜的密码子进行优化,经全基因合成插入高效真核表达载体pCAGGS中,构建的真核重组质粒转染293T细胞进行瞬时表达,间接免疫荧光试验结果表明,重组质粒中的HA目的基因获得表达。将重组质粒以200μg/只的剂量免疫1月龄SPF鸡,6周后采血分离血清。交叉微量血凝抑制试验结果表明,血凝抑制效价可达8 log2~12 log2,灵敏度高,与其他AIV亚型抗原无交叉反应,型特异性强。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9亚型 真核表达重组质粒 单因子血清
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鸭病毒性肠炎病毒基因组异构体的研究 被引量:4
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作者 柳金雄 陈普成 +2 位作者 邬丽 姜永萍 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期658-660,共3页
为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组异构体的存在形式,本研究在已建立的以pCC1FOS为载体的DEV疫苗株基因文库基础上对DEV全序列进行了测定,并进一步对DEV基因组的异构体进行了研究。对261个重组fosmid中的DEV基因组片段的末端序列进行... 为研究鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因组异构体的存在形式,本研究在已建立的以pCC1FOS为载体的DEV疫苗株基因文库基础上对DEV全序列进行了测定,并进一步对DEV基因组的异构体进行了研究。对261个重组fosmid中的DEV基因组片段的末端序列进行测序及序列分析,初步证明了DEV基因组有3种异构体,即P型、IS型和ILS型,未发现IL型的存在。并且,以上3种异构体在基因组中所占比例分别为77.1%、8.6%和14.3%。通过对11个重组fosmid的全序列测定,进一步确认了以上3种异构体的存在。该结果为DEV的分类提供了重要实验依据。 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 FOSMID文库 异构体
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鸭肠炎病毒UL41、UL42基因的克隆与分析 被引量:1
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作者 陈普成 柳金雄 +3 位作者 曾青华 姜永萍 田国彬 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期988-990,共3页
依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15kb,经EcoRⅤ单酶切,将其中的3.9kb片段克隆到pUC18中。序列分析表明该3.9kbEcoRⅤ片段含有... 依据GenBank登录的鸭肠炎病毒(DEV)核苷酸序列设计引物,利用长片段PCR技术扩增了DEV基因组UL36与UL43基因之间的未知序列,扩增所得片段长度约为15kb,经EcoRⅤ单酶切,将其中的3.9kb片段克隆到pUC18中。序列分析表明该3.9kbEcoRⅤ片段含有2个完整的转录方向相反的与单纯疱疹病毒(HSV)UL41和UL42基因同源的ORF,命名为DEV UL41和UL42基因。通过氨基酸序列比对发现:DEVUL41基因含有5个高度保守位点,而UL42含有2个,进化树分析表明DEV与疱疹病毒科α疱疹病毒亚科的马立克病毒、火鸡疱疹病毒的进化关系非常相近,为DEV的分类提供了参考依据。 展开更多
关键词 DEV UK41基因 UIA2基因 进化分析 分类
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