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表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析
被引量：
2
1
作者
黄艳秋
原冬伟
+8 位作者
刘行波
刘家森
陈淑慧
单丽玲
郭东春
姜骞
崔玉东
薛飞
曲连东
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期597-601,共5页
为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备...
为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备了表达RHDV VP60基因的重组BoHV-1(rBoHV-1/gE-/VP60)。通过PCR、western blot及间接免疫荧光鉴定表明VP60基因在rBoHV-1/gE-/VP60中获得表达。并且体内试验表明重组病毒能够有效诱导小鼠产生RHDV特异性抗体。本研究构建了表达RHDV VP60基因的rBoHV-1/gE-/VP60,为研制预防兔出血症的BoHV-1活载体疫苗奠定了基础。
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关键词
兔出血症病毒
VP60基因
牛疱疹病毒1型
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职称材料
多杀性巴氏杆菌Lon蛋白酶的原核表达及ATPase活性的检测
被引量：
1
2
作者
王淑亚
郭东春
+4 位作者
李影
王雅静
刘家森
姜骞
曲连东
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期530-533,共4页
为表达多杀性巴氏杆菌(P.multocida)Lon蛋白及检测其生物活性,本研究通过PCR扩增P.multocida C51-17株Lon基因,将其克隆到质粒pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a-Lon,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组...
为表达多杀性巴氏杆菌(P.multocida)Lon蛋白及检测其生物活性,本研究通过PCR扩增P.multocida C51-17株Lon基因,将其克隆到质粒pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a-Lon,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组蛋白Lon,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白Lon分子量大小约为97 ku,主要以可溶性蛋白形式表达;western blot检测结果表明,重组表达蛋白能够被P.multocida阳性血清识别;ATPase活性检测试验表明,纯化的重组蛋白Lon具有ATPase活性,其将ATP降解为ADP的酶活性可以达到27 708.47μmol/(mg·min)。本研究表达了P.multocida Lon重组蛋白,并且测定其ATPase活性,为进一步研究Lon蛋白在P.multocida致病中的作用奠定了基础。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
Lon蛋白酶
原核表达
ATPASE活性
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职称材料
题名
表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析
被引量：
2
1
作者
黄艳秋
原冬伟
刘行波
刘家森
陈淑慧
单丽玲
郭东春
姜骞
崔玉东
薛飞
曲连东
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技
学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人兽共患病研究团队
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期597-601,共5页
基金
国家自然科学基金(30800830)
黑龙江省科技计划项目(PC10S02)
黑龙江省教育厅面上项目(12541580)
文摘
为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备了表达RHDV VP60基因的重组BoHV-1(rBoHV-1/gE-/VP60)。通过PCR、western blot及间接免疫荧光鉴定表明VP60基因在rBoHV-1/gE-/VP60中获得表达。并且体内试验表明重组病毒能够有效诱导小鼠产生RHDV特异性抗体。本研究构建了表达RHDV VP60基因的rBoHV-1/gE-/VP60,为研制预防兔出血症的BoHV-1活载体疫苗奠定了基础。
关键词
兔出血症病毒
VP60基因
牛疱疹病毒1型
Keywords
rabbit hemorrhagic disease virus
VP60 gene
bovine hepervirus-1
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
多杀性巴氏杆菌Lon蛋白酶的原核表达及ATPase活性的检测
被引量：
1
2
作者
王淑亚
郭东春
李影
王雅静
刘家森
姜骞
曲连东
机构
东北
农业
大学动物医
学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/自然疫源性人兽共患病研究团队
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期530-533,共4页
基金
国家自然科学基金(31302109)
文摘
为表达多杀性巴氏杆菌(P.multocida)Lon蛋白及检测其生物活性,本研究通过PCR扩增P.multocida C51-17株Lon基因,将其克隆到质粒pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a-Lon,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组蛋白Lon,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白Lon分子量大小约为97 ku,主要以可溶性蛋白形式表达;western blot检测结果表明,重组表达蛋白能够被P.multocida阳性血清识别;ATPase活性检测试验表明,纯化的重组蛋白Lon具有ATPase活性,其将ATP降解为ADP的酶活性可以达到27 708.47μmol/(mg·min)。本研究表达了P.multocida Lon重组蛋白,并且测定其ATPase活性,为进一步研究Lon蛋白在P.multocida致病中的作用奠定了基础。
关键词
多杀性巴氏杆菌
Lon蛋白酶
原核表达
ATPASE活性
Keywords
Pasteurella multocida
Lon protease
prokaryotic expression
ATPase activity
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析
黄艳秋
原冬伟
刘行波
刘家森
陈淑慧
单丽玲
郭东春
姜骞
崔玉东
薛飞
曲连东
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
多杀性巴氏杆菌Lon蛋白酶的原核表达及ATPase活性的检测
王淑亚
郭东春
李影
王雅静
刘家森
姜骞
曲连东
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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