套式RT-PCR检测牛呼吸道合胞体病毒的研究 被引量：14

1

作者 史鸿飞 朱远茂 +4 位作者 高欲燃 任宪刚 冯军科 于作 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期238-240,共3页

为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV... 为了检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV),根据已发表的融合蛋白(F)基因序列,设计了套式RT-PCR引物,初步建立了BRSV的套式RT-PCR检测方法。对138份牛鼻腔棉拭子进行了检测,结果检测到了BRSV阳性样品54份,总的阳性检出率为39.1%。对大部分BRSV阳性样品的F基因扩增产物进行了序列测定与分析。用该套式RT-PCR对牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛病毒性腹泻病毒等进行了检测,结果无交叉反应,表明该检测方法具有良好的特异性。本研究首次用套式RT-PCR技术证实了我国部分省的牛群中存在BRSV感染。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 套式RT-PCR 牛鼻腔拭子

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抗Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测口蹄疫病毒的研究 被引量：6

2

作者 周国辉 李万 +1 位作者 赵磊 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期960-964,共5页

本研究用纯化的Asial型口蹄疫病毒（Footandmouthdiseasevirus，FMDV）免疫BALB／c小鼠，按常规单克隆抗体技术方法，经筛选获得6株能稳定分泌抗Asial型FMDV单抗的杂交瘤细胞株。以牛抗口蹄疫病毒IgG为捕获抗体，选择一株单抗（184）用... 本研究用纯化的Asial型口蹄疫病毒（Footandmouthdiseasevirus，FMDV）免疫BALB／c小鼠，按常规单克隆抗体技术方法，经筛选获得6株能稳定分泌抗Asial型FMDV单抗的杂交瘤细胞株。以牛抗口蹄疫病毒IgG为捕获抗体，选择一株单抗（184）用辣根过氧化物酶标记（HRP-184）作为检测抗体，建立了检测Asial型FMDV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出0．5859μg纯化Asial型FMDV抗原和2．5×10^3TCID50病毒，对O型FMDV、牛结核病、牛肺疫、牛流热、赤羽病、牛传染性鼻炎等病毒进行检测，均为阴性，无交叉反应发生。本研究建立的FMDV抗原捕获ELISA方法，具有敏感性高、特异性强和重复性好的特点，可用于Asia1型FMDV的特异性检测。 展开更多

关键词 Asia1型 口蹄疫病毒 单克隆抗体 抗原捕获ELISA

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牛呼吸道合胞体病毒研究进展 被引量：9

3

作者 冯军科 薛飞 +3 位作者 朱远茂 任宪刚 史鸿飞 高欲燃 《中国奶牛》 2010年第9期1-4,共4页

牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus,BRSV）是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。本病早在1968年就有记载,1970年BRSV首次从患有呼吸道疾病的牛体中分离到[1]。其危害性在于BRSV感染发病率很高,达到60%～80%,死... 牛呼吸道合胞体病毒（bovine respiratory syncytial virus,BRSV）是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原之一。本病早在1968年就有记载,1970年BRSV首次从患有呼吸道疾病的牛体中分离到[1]。其危害性在于BRSV感染发病率很高,达到60%～80%,死亡率在一些爆发中也能达到20%以上[2,3]。本病多发于秋冬季节, 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 呼吸道疾病 VIRUS 秋冬季节 发病率 死亡率 病原 犊牛

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应用ViewRNA技术特异性检测感染细胞中的不同马传染性贫血病毒株 被引量：1

4

作者 王珊珊 马建 +3 位作者 史楠 刘强 韦华冕 周建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期800-803,共4页

为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通... 为了对体外培养细胞感染的不同马传染性贫血病毒(EIAV)株进行特异的鉴别检测,本研究基于一种新的RNA原位杂交-ViewRNA技术,通过设计合成针对EIAVFDDV13和EIAVUK3病毒株基因组RNA的特异性探针,并结合信号放大技术和荧光标记技术,同时通过激光共聚焦显微镜进行观察,建立了可对两种不同株的EIAV基因组RNA进行细胞内原位检测的方法。研究结果表明,两组探针能够特异地与感染细胞中EIAVFDDV13和EIAVUK3的病毒RNA相结合,可在两种不同EIAV株共感染的宿主细胞中实现对两种毒株的有效鉴别和定位检测。该方法为进一步研究EIAV与宿主细胞间相互作用提供了有效手段。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 原位杂交 ViewRNA技术

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牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA方法的建立及应用 被引量：17

5

作者 祖立闯 朱远茂 +5 位作者 王延辉 辛九庆 李娇 任宪刚 冯军科 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期537-543,共7页

用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒... 用大肠杆菌表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白纯化后作为包被抗原,建立了检测牛传染性鼻气管炎病毒抗体的间接ELISA方法。交叉反应试验表明,该重组抗原与其它常见的5种牛病阳性血清不发生交叉反应;阻断反应试验表明,IBRV病毒悬液能在很大程度上阻断重组抗原与阳性血清的反应,而对阴性血清没有明显影响。在重复性试验中,批内重复的变异系数小于5%,批间重复的变异系数小于15%。与中和试验相比较,符合率、敏感性和特异性分别为84.1%、85.0%和83.4%。应用该诊断方法和本实验室已建立的以IBRV全病毒作为包被抗原的ELISA诊断方法,同时检测了采集于国内11个省份的2012份血清样本,IBRVgD-ELISA检测的平均阳性率为46.0%(926/2012),而且相对于IBRV全病毒ELISA诊断方法的符合率、敏感性和特异性分别为91.9%、94.2%和90.2%。本研究所建立的IBRVgD-ELISA具有良好的敏感性和特异性,为国内IBR流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎 重组gD蛋白 间接ELISA

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牛传染性鼻气管炎病毒VP8蛋白表位鉴定 被引量：1

6

作者 杨婷 周跃辉 +3 位作者 朱远茂 宋文凤 马磊 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期225-228,共4页

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为I... 为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)的VP8蛋白抗原表位,本研究采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了2株针对IBRV的VP8蛋白的单克隆抗体(MAb),命名为1F5和3C2。MAb1F5和3C2的腹水效价均大于1:4×10~5,亚型均为IgG1/κ。间接免疫荧光试验表明,2株MAb与IBRV呈特异性反应。利用肽扫描技术对MAb进行抗原表位鉴定,结果表明MAb3C2的抗原表位为^(138)PHRSLLERTA^(147),MAb1F5的抗原表位为^(183)GGGQEPG^(189),2株MAb针对的抗原表位在不同的IBRV分离株中高度保守。本研究为VP8蛋白的结构与功能的进一步分析及IBRV的检测奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 VP8蛋白 单克隆抗体 抗原表位

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马传染性贫血病毒第1 9、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析

7

作者 全滟平 赵立平 +4 位作者 韩秀娥 沈楠 吕晓玲 沈荣显 相文华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期487-491,518,共6页

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDD... 不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。 展开更多

关键词 马传染性贫血 驴胎皮肤细胞弱毒 全基因序列分析

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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表位鉴定 被引量：1

8

作者 周跃辉 朱远茂 +5 位作者 任建乐 严昊 王雪枝 马磊 史鸿飞 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期871-874,898,共5页

为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出... 为鉴定牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g D蛋白抗原表位,本研究利用p ET-30a原核表达系统表达、纯化了重组g D蛋白,采用超速离心纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,取脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组g D蛋白作为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗g D蛋白的MAb杂交瘤细胞株(1G3)。间接免疫荧光结果表明:MAb与IBRV呈阳性反应,中和试验测定其腹水中和效价为1∶32。利用肽扫描技术原核表达GST融合短肽对MAb 1G3识别的抗原表位进行筛选鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为259EESKGYE265。蛋白序列分析表明该抗原表位在IBRV各分离株及牛疱疹病毒5型(Bo HV-5)中均保守。本研究为IBRV的糖蛋白g D的结构和免疫学特性及IBRV致病性的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 单克隆抗体 表位鉴定

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感染马传染性贫血病毒的巨噬细胞差异表达蛋白质组分析

9

作者 刘海芳 杜承 +2 位作者 林跃智 王雪峰 周建华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期933-936,共4页

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染其主要靶细胞马巨噬细胞(eMDM)后与细胞蛋白的相互作用,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染48 h后的马外周血单核细胞分化的eMDM,并以未感染eMDM为对照,提取细胞的蛋白质样品,进行双向凝胶电泳(2-DE)分... 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)感染其主要靶细胞马巨噬细胞(eMDM)后与细胞蛋白的相互作用,本研究采用EIAV强毒株EIAVDLV34感染48 h后的马外周血单核细胞分化的eMDM,并以未感染eMDM为对照,提取细胞的蛋白质样品,进行双向凝胶电泳(2-DE)分离,并分析凝胶中差异蛋白点。结果共检测出19个表达差异的蛋白点(ratio>1.4,p<0.05),其中感染组相对于对照组有7个蛋白质上调表达,12个蛋白质呈现下调表达。将差异蛋白进行串联质谱分析进行鉴定,并通过生物信息学方法对这19个差异表达蛋白进行了蛋白互作用分析。此外,对其中5个比较重要蛋白的mRNA水平进行了荧光定量PCR分析,其表达变化与2-DE结果一致。本研究为进一步分析EIAV与其宿主细胞eMDM的相互作用提供了参考。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 eMDM 差异蛋白 双向电泳 生物信息学

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马传染性贫血病毒弱毒株LTR点突变型嵌合感染性克隆的构建

10

作者 左咏梅 吕晓玲 +5 位作者 赵立平 李庆章 郝艳红 沈荣显 相文华 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期569-574,共6页

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)长末端重复序列(Long terminal repeat,LTR)是基因组中高度变异区之一,EIAV LTR的变异对于指导病毒的复制和病毒致病性具有重要的生物学意义。为了阐明我国马传染性贫血病毒弱毒... 马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)长末端重复序列(Long terminal repeat,LTR)是基因组中高度变异区之一,EIAV LTR的变异对于指导病毒的复制和病毒致病性具有重要的生物学意义。为了阐明我国马传染性贫血病毒弱毒疫苗毒力致弱的分子机制,由马传贫强毒至弱毒致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,以驴胎皮肤弱毒株疫苗全长感染性克隆pLGFD3-8为父本,选取LTR R区的TAR起始碱基,poly(A)附加位点,采用反向遗传操作对其位点进行PCR体外定点突变,将弱毒序列构建的逆向点突变型全基因克隆转染到驴胎皮肤细胞(FDD)并在FDD上传代,通过逆转录酶活性(RT)检测、RT-PCR方法及real-time RT PCR检测并验证其感染性。检测结果为构建的逆向点突变型感染性克隆在FDD上被拯救,其衍生病毒感染的FDD上出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT-PCR阳性;电镜下可见大量典型的EIAV颗粒pLGFD-M点突变型嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3-8复制水平相似。此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 马传染性贫血病毒 定点突变 嵌合病毒

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我国A群牛轮状病毒感染的血清流行病学调查 被引量：32

11

作者 李鑫 常继涛 +1 位作者 刘海军 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期664-667,共4页

为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱... 为调查A群牛轮状病毒(BRV)在我国不同地区牛群中的感染和流行情况,本研究采用间接ELISA检测2005年～2006年期间在我国12个不同地区收集的1760份牛血清中抗A群BRV抗体。结果显示,其强阳性血清225份(12.8%);中等阳性血清1240份(70.4%);弱阳性血清279份(15.9%);阴性血清16份(1%)。总抗体阳性率高达99%。不同地区强阳性、中等阳性及弱阳性血清所占比例有所不同。结果表明,A群BRV在我国牛群中的感染和流行不但非常广泛,而且极为严重。本研究对我国BRV感染进行了较大规模的血清流行病学调查,其结果可为我国犊BRV腹泻疾病的防制提供重要的依据。 展开更多

关键词 A群牛轮状病毒感染 IGG抗体 ELISA 血清流行病学调查

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一株3型牛腺病毒的分离与鉴定 被引量：13

12

作者 于作 朱远茂 +4 位作者 蔡红 高欲燃 董秀梅 吕闯 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期169-172,共4页

本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源... 本研究于2009年由患急性呼吸道疾病牛的鼻拭子中分离获得一株病毒,经形态特征、血清学试验及PCR鉴定表明,该病毒与牛腺病毒3型(BAV-3)相似。对其E2A基因进行序列测定,并与GenBank中登录的BAV1型、3型、4型及人、绵羊、鼠等其它种属来源的腺病毒E2A基因序列进行比对及系统进化分析,结果显示该分离株与BAV-3的同源性为95.5%。经MEGA4软件分析,分离株与BAV-3验证值为100,表明其为BAV-3,并命名为BAV-3HLJ0955株。对该分离株热敏感试验表明,BAV-3 HLJ0955在56℃ 30min可被完全灭活,属于BAV第一群。这是国内首次分离获得BAV-3的报道。 展开更多

关键词 牛腺病毒3型 分离 鉴定

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牛副流感病毒3型NP单抗的制备及初步应用 被引量：9

13

作者 吕闯 朱远茂 +4 位作者 董秀梅 蔡红 于作 高欲燃 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期970-973,共4页

为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP(rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯... 为制备牛副流感病毒3型(BPIV3)核衣壳蛋白(NP)单克隆抗体(MAb),本研究利用原核表达并纯化的重组NP(rNP)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用以BPIV3为检测抗原的间接ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得1株稳定分泌抗NP特异性MAb的杂交瘤细胞株(5E5)并制备腹水,采用rNP及BPIV3包被的ELISA效价分别是2×106和1.28×105。间接ELISA、western blot、IFA试验表明该MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定该MAb亚类为IgG1/κ。特异性试验表明该MAb不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒反应。免疫组化试验表明该MAb可以检测BPIV3感染动物体内的病原。该MAb还可用于建立检测BPIV3病原及抗体的诊断方法,同时为研究NP的结构和功能提供了条件。 展开更多

关键词 牛副流感病毒3型 核衣壳蛋白 单克隆抗体 特异性

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载牛冠状病毒N蛋白壳聚糖微球的免疫效果评价 被引量：6

14

作者 孙庆申 李鑫 +3 位作者 车小琼 常继涛 杨勇博 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期882-886,共5页

为了对壳聚糖分子作为佐剂的缓释效果进行免疫学评价,本研究合成了牛冠状病毒DB2毒株N蛋白基因的3'端第487位～1287位碱基,用大肠杆菌对其进行了高效表达,通过SDS-PAGE电泳分离、电洗脱纯化该牛冠状病毒N蛋白(BCVN)。以戊二醛为交联... 为了对壳聚糖分子作为佐剂的缓释效果进行免疫学评价,本研究合成了牛冠状病毒DB2毒株N蛋白基因的3'端第487位～1287位碱基,用大肠杆菌对其进行了高效表达,通过SDS-PAGE电泳分离、电洗脱纯化该牛冠状病毒N蛋白(BCVN)。以戊二醛为交联剂,采用乳化交联的方法制备空白壳聚糖微球。利用吸附法制备载BCVN蛋白的壳聚糖微球,通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测免疫鼠血清中的抗体水平,由此评价壳聚糖微球对BCVN的缓释作用和佐剂效应。结果表明,壳聚糖微球的形态较好、表面光滑、分散性较好,平均粒径为6.50±1.77μm,电势分布在36mV,吸附BCVN蛋白的壳聚糖微球在体内所产生的免疫效果明显优于唯N蛋白组,说明载BCVN蛋白的壳聚糖微球在体内具有一定的缓释效果,使N蛋白在体内缓慢释放而长时间诱导抗体的产生,该研究结果为以壳聚糖微球作为疫苗佐剂积累了实验数据。 展开更多

关键词 壳聚糖 牛冠状病毒核衣壳蛋白 吸附 动物接种 缓释作用

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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定 被引量：10

15

作者 李娇 薛飞 +1 位作者 朱远茂 祖立闯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期200-205,共6页

利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到... 利用牛病毒性腹泻病毒(BVDV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA。参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区。通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定。然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌。取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白。将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 截短表达 鉴定

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牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的多克隆抗体制备及鉴定 被引量：7

16

作者 高欲燃 朱远茂 +6 位作者 康健 史鸿飞 李娇 任宪刚 冯军科 于作 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期227-231,共5页

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2... 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白的兔源多克隆抗体,本研究利用表达BVDV E2蛋白的重组质粒pET30a-E2转化E.coli BL21(DE3),经诱导表达获得重组E2蛋白。Western blot检测显示纯化蛋白能够与BVDV参考阳性血清反应。以纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,病毒中和试验测定其中和效价为1:2048,间接免疫荧光和western blot试验表明其具有良好的反应性和特异性。本研究制备的BVDV重组E2蛋白兔源多克隆抗体可应用于BVDV的检测,同时为进一步建立检测BVDV E2蛋白的ELISA方法奠定基础。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 多克隆抗体

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山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：9

17

作者 王芳 雷震 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期945-948,共4页

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好... 为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPVp32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti)。表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性。以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法。该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%。上述结果表明,该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体。本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测。 展开更多

关键词 GPV P32基因 大肠杆菌表达 ELISA

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Asia 1型口蹄疫病毒VP1基因的表达鉴定及其多抗制备 被引量：3

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作者 朱远茂 任宪刚 +5 位作者 史鸿飞 高欲燃 于作 冯军科 相文华 薛飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期285-288,共4页

本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包... 本研究旨在表达口蹄疫病毒(FMDV)的VP1全基因并制备特异性的多克隆抗体。利用PCR方法扩增Asia 1 IND 49197株VP1全基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为31.6ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA Purification System纯化后进行western blot和间接ELISA分析,结果显示重组蛋白能够被FMD阳性血清识别,具有良好的反应性。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶20480,病毒中和试验测定抗体效价为1∶64。本研究所表达的VP1蛋白可用于开发检测Asia1口蹄疫抗体的诊断试剂,所制备的多克隆抗体为进一步研究VP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定提供了条件。 展开更多

关键词 ASIA I口蹄疫病毒 VP1基因 多克隆抗体

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表达牛冠状病毒S1基因的重组人腺病毒的构建及鉴定 被引量：5

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作者 周国辉 于力 魏萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期834-838,共5页

为构建表达牛冠状病毒(BCV)S1基因的重组人腺病毒疫苗,本实验通过人工合成密码子优化的截短BCV S1的基因片段(55 bp～1 650 bp)。将其克隆到重组腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态... 为构建表达牛冠状病毒(BCV)S1基因的重组人腺病毒疫苗,本实验通过人工合成密码子优化的截短BCV S1的基因片段(55 bp～1 650 bp)。将其克隆到重组腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组的方式获得重组腺病毒质粒pAdV-BCV-S1,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞获得重组腺病毒rAdV-BCV-S1。利用间接免疫荧光法和western blot法检测该重组腺病毒的S1基因在AD-293细胞中的表达情况,同时用一步生长曲线法,测定该重组腺病毒的复制能力。结果表明:BCV S1基因在感染细胞中获得了高效表达:子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为6.8×108 pfu/mL。该重组腺病毒的构建为BCV重组疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛冠状病毒 S1基因 重组腺病毒

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O型FMDV VP1基因的表达鉴定及其多克隆抗体的制备 被引量：1

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作者 任宪刚 薛飞 +3 位作者 朱远茂 冯军科 史鸿飞 高欲燃 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期568-571,共4页

为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大... 为制备O型口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗血清,本研究人工合成了FMDV的VPI基因,并克隆构建了采用PCR方法以pUC57-VP1重组质粒,以其作为模板,经PCR将VPI基因亚克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pET-VP1。重组质粒鉴定验证后,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的分子量约为38ku,以包涵体的形式存在。Westernblot与间接ELISA结果显示重组蛋白能够与FMDV阳性血清反应。进一步将纯化的重组蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶1600。本研究为FMDV的其他研究工作提供了基础材料。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 VP1基因 表达鉴定 多克隆抗体制备

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