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猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究
被引量：
2
1
作者
史鑫琪
季朝阳
+10 位作者
陈晓彤
张子博
张鑫
郭慧娟
田璐
王洪峰
陈洪岩
王靖飞
冯力
夏长友
孟庆文
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期1-8,共8页
为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV...
为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。
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关键词
猪氨基肽酶N
猪传染性胃肠炎病毒
CRISPR/Cas9
ST细胞
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职称材料
题名
猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究
被引量：
2
1
作者
史鑫琪
季朝阳
陈晓彤
张子博
张鑫
郭慧娟
田璐
王洪峰
陈洪岩
王靖飞
冯力
夏长友
孟庆文
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
兽医
生物技术
国家
重点
实验室
/
实验
动物
与比较医学
创新
团队
/
国家
禽类
实验
动物
资源库
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
兽医
生物技术
国家
重点
实验室
/猪消化道传染病
创新
团队
哈尔滨
维科
生物技术
开发公司
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原与病理形态学创新团队
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期1-8,共8页
基金
国家重点研发计划(2021YFF0703000、2021YFF0703100)。
文摘
为研究与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)结合的猪氨基肽酶N(pAPN)受体核心区对TGEV复制以及细胞功能的影响,本研究检索并分析pAPN与TGEV的结合位点,结果显示,敲除pAPN aa668~aa963对其酶活性无影响。因此,利用CRISPR/Cas9技术构建pAPN与TGEV结合位点敲除细胞系,经PCR和western blot鉴定结果显示,正确构建一株敲除pAPN aa668~aa963的ST细胞系,即敲除pAPN 15-21外显子,命名为KO-ST-15。采用CCK-8和细胞划痕方法检测KO-ST-15细胞的增殖和细胞迁移活性,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子对ST细胞增殖和迁移活性均无显著影响。利用RT-qPCR和IFA检测KO-ST-15感染TGEV后病毒复制拷贝数和N蛋白的表达,结果显示,敲除pAPN 15-21外显子可极显著抑制TGEV在ST细胞系中的复制(P<0.001)。利用RT-qPCR检测KO-ST-15感染TGEV后炎症相关基因转录水平变化,结果显示,TGEV感染后KO-ST-15中的IL-6、IL-8和NLRP3(NOD-like receptor protein 3)mRNA转录水平无显著变化,但RIG-I和MDA5的转录水平显著上调(P<0.05)。上述结果首次表明,敲除pAPN15-21外显子能够极显著抑制TGEV在ST细胞中的复制,但细胞KO-ST-15的正常生理功能无变化,TGEV不能进入敲除pAPN 15-21外显子的细胞中引起炎症反应,该结果为进一步培育抗病育种猪提供参考依据和候选方案。
关键词
猪氨基肽酶N
猪传染性胃肠炎病毒
CRISPR/Cas9
ST细胞
Keywords
porcine aminopeptidase N
porcine transmissible gastroenteritis virus
CRISPR/Cas9
ST cell
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪氨基肽酶N病毒结合受体核心区对TGEV在ST细胞中复制影响的研究
史鑫琪
季朝阳
陈晓彤
张子博
张鑫
郭慧娟
田璐
王洪峰
陈洪岩
王靖飞
冯力
夏长友
孟庆文
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
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