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H5N1亚型禽流感变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫原性研究 被引量:16
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作者 田国彬 曾显营 +7 位作者 钟功勋 姜永萍 李雁冰 施建忠 毛胜刚 冯菊艳 王君伟 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期717-720,共4页
本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血... 本实验对经反向遗传方法构建的重组禽流感H5N1亚型变异株灭活疫苗种毒Re-4株的生物学特性及免疫效力进行研究。将Re-4株接种SPF鸡胚后37℃培养72h,鸡胚存活,无病变,HA滴度达29;以0.1mL(106.0EID50/0.1mL)的剂量鼻腔感染4周龄SPF鸡7d后血清HI抗体转阳,无任何症状,也不排毒;SPF鸡静脉致病指数(IVPI)为0;以Re-4重组株为种毒制备灭活疫苗,免疫SPF鸡后,3周后平均HI抗体效价达8.75log2;免疫鸡对亲本强毒株CKSX/06,以及变异株CKNX/06和流行株GSGD/96攻击提供完全保护。以上结果表明变异株灭活疫苗种毒Re-4株对SPF鸡胚和SPF鸡无致病性、适合鸡胚增殖、抗原针对性强,并且以该毒株制备的灭活疫苗具有良好的免疫效力,是研制预防H5N1亚型禽流感病毒山西变异株的理想疫苗种毒株。 展开更多
关键词 禽流感 H5N1 变异株 灭活疫苗
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重组禽流感病毒灭活疫苗(H9N2亚型,Re-9株)对2010年~2011年流行病毒株免疫效力的研究 被引量:4
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作者 杨婧 曾显营 +6 位作者 张盼涛 冯华朋 李倩倩 邓国华 李雁冰 田国彬 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期392-395,共4页
为评价H9N2亚型重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗Re-9株的免疫效力,本研究选取2010年~2011年分离的5株H9N2亚型AIV进行攻毒保护实验。这5个分离株均为类A/CK/Beijing/1/94病毒株,其HA和NA基因与Re-9株及其亲本株的同源性介于90.6%~97.5%和... 为评价H9N2亚型重组禽流感病毒(AIV)灭活疫苗Re-9株的免疫效力,本研究选取2010年~2011年分离的5株H9N2亚型AIV进行攻毒保护实验。这5个分离株均为类A/CK/Beijing/1/94病毒株,其HA和NA基因与Re-9株及其亲本株的同源性介于90.6%~97.5%和88.1%~98.7%之间,其抗原相关值在66.67%~100%之间。将Re-9株为种毒制备灭活疫苗,免疫4周龄SPF雏鸡后,3周时平均HI抗体效价达9.5 log2;在免疫后3周以2×107EID50的剂量攻击亲本株和5株流行病毒株,攻毒后采集3 d、5 d、7 d的拭子,免疫组拭子样品病毒检测均为阴性;对照组3 d、5 d拭子病毒检测的阳性率均在80%以上,7 d的阳性率在60%以下。以上结果表明灭活疫苗Re-9株抗原针对性强,而且具有良好的免疫效力,能够抵御近年来分离的H9N2亚型AIV,是理想的H9N2亚型禽流感疫苗株。 展开更多
关键词 H9N2 Re-9 免疫效力
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H5N1亚型禽流感病毒A/Guangxi/1/2005株抗药机制的研究 被引量:2
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作者 王飞 吴珊珊 +6 位作者 慈彦鹏 刘丽玲 田国彬 曾显营 管雪婷 李雁冰 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期682-685,共4页
为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-G... 为研究H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的抗药机制,本研究选取Clade2.3.4亚群中一株对金刚烷胺敏感的人源AIV A/Guangxi/1/2005(H5N1)(S-GX05),用抗流感病毒药物金刚烷胺对其进行定向诱导,筛选出一株抗药性病毒株,命名为R-A/Guangxi/1/2005(R-GX05)。通过全基因测序并与S-GX05全基因序列进行对比,结果显示S-GX05只在其M2蛋白中有一个氨基酸位点发生突变,即A30P;抗药性鉴定这两株病毒的半数药物抑制浓度(IC50)分别为0.9μM和48.9μM,表明R-GX05对金刚烷胺表现出一定程度的抗性。动物实验证实,这两株病毒对BALB/c小鼠的致病性基本一致,均表现出高致病性,其MLD50分别为4.7 log10 EID50和5.0 log10 EID50,两株病毒在小鼠体内各组织脏器中的分布及增殖能力也基本相同。这些结果表明,S-GX05在药物压力下产生抗药性后,并未引起其它生物学特性的改变。A30P的发现为进一步从分子水平上研究H5N1亚型AIV的抗药机制及新型抗流感新药的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 H5N1禽流感病毒 抗药性 金刚烷胺
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果子狸源H5N1亚型禽流感病毒的分离及生物学特性鉴定 被引量:1
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作者 吴珊珊 王飞 +5 位作者 慈彦鹏 刘丽玲 田国彬 曾显营 陈化兰 李雁冰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期181-184,共4页
2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全... 2011年,对广西自治区进行禽流感流行病学调查时从野生哺乳动物果子狸体内分离到一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV),命名为A/palm-civet/Guangxi/26/2011(H5N1)(PC/GX/26/11)。本研究对其全基因组序列进行测定及其对BALB/c鼠的致病性试验。全基因序列分析表明:该病毒属于Clade 2.3.2分支,其血凝素(HA)蛋白裂解位点存在多个连续的碱性氨基酸(-RRRR-),具有高致病性AIV(HPAIV)的典型分子特征,其HA、NA、PA、NS基因节段与A/muscovy duck/Vietnam/LBM57/2011(MD/VN/LBM57/11)(H5N1)有较高的同源性,为99.2%~99.6%;PB2、PB1、M、NP 4个基因节段与人源AIV A/Hubei/1/2010(HuB/1/10)(H5N1)的同源性最高,为99.0%~99.5%。动物试验显示:该病毒对小鼠的半数致死量为4.9 log EID50,对小鼠具有较高的致病性。在小鼠的肺和鼻甲骨中均能够进行良好的复制。以上结果表明,该分离株未经适应便具备感染哺乳动物并有较高致死的能力。 展开更多
关键词 果子狸 H5N1亚型HPAIV 进化分析 致病性
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山西亚群H5N1亚型HPAIV对鸭及鸭胚的继代感染研究 被引量:2
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作者 张翼 段振华 +5 位作者 刘丽玲 施建忠 田国彬 曾显营 陈化兰 李雁冰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期365-369,共5页
2006年从山西省分离获得的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)曾引起免疫鸡群的大量死亡,与我国之前分离的病毒抗原差异性较大,称为"山西鸡型"抗原变异株。本研究应用该亚群代表毒株CK/SX/2/06(H5N1),研究该病毒对SPF鸭和鸭胚的致病性,... 2006年从山西省分离获得的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)曾引起免疫鸡群的大量死亡,与我国之前分离的病毒抗原差异性较大,称为"山西鸡型"抗原变异株。本研究应用该亚群代表毒株CK/SX/2/06(H5N1),研究该病毒对SPF鸭和鸭胚的致病性,并通过病毒在鸭和鸭胚内的连续传代,探讨该亚群病毒在鸭和鸭胚中的进化规律。结果表明,病毒对3周龄鸭呈低致病性,在各脏器中的复制能力较弱;鸭感染病毒后无明显临床症状,排毒水平较低并且不能感染同居鸭。病毒在3周龄鸭和10日龄鸭胚中分别继代感染3代和5代后,对3周龄鸭仍呈低致病性且HA基因未发生氨基酸位点变化。病毒不能致死3周龄鸭和1日龄雏鸭,但能致死10日龄~23日龄鸭胚,而且对鸭胚的致病性随着鸭胚日龄的增长逐渐减弱,致死鸭胚时间从对10日龄鸭胚24h致死到对23日龄鸭胚72h致死直至对25日龄鸭胚只感染但不致死。病毒对鸭呈低致病性且在鸭群传播中保持着基因水平和致病性上的相对稳定,对不同日龄鸭胚、1日龄和3周龄鸭致病性的不同表现,与目前存在于我国的其他亚群H5N1HPAIV对鸭致病性和进化特点上呈现出明显的差异,并对家禽养殖业存在威胁。 展开更多
关键词 禽流感病毒 山西亚群 鸭胚 继代感染
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鸭IFN-γ,IL-2 mRNA荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 被引量:2
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作者 张盼涛 曾显营 +3 位作者 杨婧 李倩倩 田国彬 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期472-476,共5页
为评价疫苗免疫对鸭细胞免疫应答反应的影响,本研究提取鸭脾脏组织总RN A,采用鸭IFN-γ、IL-2、GAPDH基因特异性引物,建立了SYBR Green I荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。结果显示IFN-γ、IL-2、GAPD H基因扩增标准曲线相关系数均高于0.9... 为评价疫苗免疫对鸭细胞免疫应答反应的影响,本研究提取鸭脾脏组织总RN A,采用鸭IFN-γ、IL-2、GAPDH基因特异性引物,建立了SYBR Green I荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。结果显示IFN-γ、IL-2、GAPD H基因扩增标准曲线相关系数均高于0.99;3者扩增效率相近,均接近于100%;融解曲线呈特异性单峰;各基因组内和组间变异系数均小于2%。应用该方法检测不同佐剂禽流感灭活疫苗免疫樱桃谷鸭后脾脏组织IFN-γ和IL-2 mRNA的相对表达水平。结合免疫后抗体水平及攻毒保护结果,比较不同佐剂对禽流感灭活疫苗免疫应答的影响。结果显示,金黄色葡萄球菌毒素A重组蛋白(rSEA)佐剂组IFN-γ和IL-2 mRNA表达水平显著高于其他免疫组(p<0.05)。结果表明,建立的qRT-PCR特异性、重复性和稳定性良好,能够快速、准确检测鸭体内细胞因子的表达水平,为进一步评价疫苗免疫效果奠定了基础。 展开更多
关键词 荧光定量PCR SYBR Green 细胞因子 SEA 禽流感灭活疫苗
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