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疱疹病毒潜伏相关转录体的生物学特性 被引量：7
1
作者 高俊 刘荻萩 +1 位作者 马月 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期855-860,共6页
疱疹病毒是能够对人类和动物健康造成严重危害的烈性病原，其不同成员在生物学、致病性和分子特征上有很大的相似性。疱疹病毒共同的生物学特征就是可以发生潜伏感染，并且这种潜伏感染在应激和药物等刺激后发生再激活。
关键词 生物学特性 疱疹病毒 转录 潜伏感染 生物学特征 动物健康 分子特征 相似性
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PCV2相关性肺炎与猪圆环病毒Ⅱ型感染相关的猪呼吸道疾病综合征(PRDC) 被引量：1
2
作者 崔尚金 戚亭 +1 位作者 岳峰雄 周盛华 《畜禽业》 2007年第5期6-8,共3页
人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占1... 人们越来越多地在育肥猪的呼吸道疾病中诊断出与猪圆环病毒II型相关的肺炎。很多实验室诊断的呼吸系统综合征(PRDC)病例通常是多种病毒混合感染。在美国,2000年,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)占病例的42%,PCV2占22%,猪流感病毒(SIV)占19%,猪肺炎支原体占22%;我们国家现在的情况与此相似。本文介绍3个临床病例分别是PRRSV和PCV2共感染、PCV2和SIV共感染以及PCV2和猪肺炎支原体共感染。这就是今年国内的主要猪病形势,经常导致严重的临床疾病,唯一的组织学损伤是淋巴组织消退和气道纤维化,在这些损伤中大量的PCV2抗原表明PCV2在PRDC中起到重要的致病作用。去年夏季,江苏、安徽、江西、湖南、湖北、河南、山东等地的部分区域发生了以高热、呼吸困难和全身性出血为主的猪疫情。根据所收集的流行病学资料、实验室检测结果和相关动物实验,初步认为造成本次猪疫情发生的主要病原为多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus)以及猪2型圆环病毒(Porcine circovirus-2)感染,即3P综合征(3P Syndrome,以下称3P综合征)。这就是例证。PCV2感染相关的疾病经常与一种或多种病原体共发生。PCV2感染经常在PRDC暴发中出现,可能导致这些病例中损伤的严重性和持续性的原因。PCV2感染相关的损伤能够在急性呼吸系统疾病中发现,并不局限于消瘦症状。 展开更多
关键词 猪 猪圆环病毒Ⅱ型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪流感病毒 猪呼吸道疾病综合征
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非洲猪瘟病毒B318L蛋白的多克隆抗体的制备及应用 被引量：2
3
作者 刘晓红 刘宏扬 +4 位作者 叶光强 焦爽 宿志民 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期922-929,共8页
非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和... 非洲猪瘟病毒(ASFV)B318L是ASFV编码的晚期蛋白,具有香叶基香叶基合成酶活性。为了制备B318L的多克隆抗体并将其初步应用,本研究利用PCR方法从重组质粒p CAGGS-HA-B318L中扩增ASFV B318L基因构建重组表达质粒p GEX-6p-1-B318L,经PCR和测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导并克隆至p GEX-6p-1载体中,采用GST亲和层析柱纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE检测该蛋白的表达,采用western blot鉴定重组蛋白的纯化效果和反应原性,采用超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度。结果显示,在约60 ku处出现特异性条带,且重组B318L蛋白(rB318L)主要以可溶性形式表达;纯化后在约60 ku处出现了单一特异性条带,经超微量紫外分光光度计测定蛋白浓度为10 mg/m L。将纯化的r B318L 4次免疫小鼠并于3免后一周采血,采用western blot鉴定该多克隆抗体(pAb),经Protein G亲和层析介质纯化后采用SDS-PAGE进一步鉴定纯化效果,采用间接ELISA检测p Ab的效价。结果显示,制备的小鼠血清(pAb)在60 ku处出现特异性条带,其与原核表达的r B318L发生了反应;该p Ab包含重、轻链且纯度较好,且其效价可达1∶32000。将不同剂量的p CAGGS-HA-B318L(1μg、2μg、4μg)分别转染HEK293T细胞,24 h后收集细胞,将MOI 1的ASFV HLJ/18株感染猪肺泡巨噬细胞(PAM),并分别于感染后6 h、12 h、24 h收集细胞。上述细胞均经相应处理后分别采用western blot、间接免疫荧光试验(IFA)(pCAGGS-HA-B318L转染剂量为1μg)检测制备的p Ab的反应原性。Western blot结果显示,HEK293T细胞中出现约35 ku的特异性条带,并随转染质粒浓度的增加B318L蛋白表达量增多;ASFV感染24 h后的PAM在35 ku处出现特异性条带,其余时间点均无该条带。IFA结果显示,过表达B318L蛋白的HEK293T细胞中出现红色荧光;ASFV感染12 h后的PAM中出现红色荧光,24 h后PAM中红色荧光的量增加。将制备的B318L p Ab用于免疫共沉淀(Co-IP)试验检测293T细胞中过表达的B318L、ASFV感染PAM后内源表达的B318L,以及两种细胞中表达的B38L蛋白与p Ab、Protein A/G Magnetic beads三者结合物的反应性。结果显示,B318L p Ab可以检测到上述细胞中内源过表达和外源表达的B318L蛋白以及结合在beads上的B318L蛋白,均出现约35 ku的特异性条带。上述结果表明,B318L蛋白是ASFV晚期表达的蛋白,且制备并纯化的B318L p Ab反应原性较强,既可以与HEK293T细胞中过表达的B318L蛋白也可以与ASFV感染的PAM中内源表达的B318L蛋白反应,反应原性较强,且可以用于Co-IP试验检测细胞中表达的B318L蛋白,本研究为深入研究ASFV B318L的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 B318L蛋白 多克隆抗体
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马疱疹病毒1型调控蛋白对SV40早期启动子的调控
4
作者 高俊 刘荻萩 +1 位作者 马月 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期298-302,共5页
为研究马疱疹病毒1型(EHV-1)6种调控蛋白(极早期调控蛋白IEP、早期调控蛋白EICP0、EICP22、EICP27、IR2P和晚期调控蛋白ETIF)对猴空泡病毒40(SV40)早期启动子(SV40EIp)的调控作用,本研究将这6种EHV-1调控蛋白真核表达重组质粒分别与SV40... 为研究马疱疹病毒1型(EHV-1)6种调控蛋白(极早期调控蛋白IEP、早期调控蛋白EICP0、EICP22、EICP27、IR2P和晚期调控蛋白ETIF)对猴空泡病毒40(SV40)早期启动子(SV40EIp)的调控作用,本研究将这6种EHV-1调控蛋白真核表达重组质粒分别与SV40EIp萤火虫荧光素酶重组报告质粒共转染RK13细胞,并同时转染作为内控的海肾荧光素酶报告质粒,通过检测两种独立的报告酶与对应底物反应后的发光强度,得到SV40EIp活性相对值。从而评价EHV-1 6种调控蛋白对SV40EIp活性影响。结果表明:ETIF对SV40EIp活性影响不显著;IR2P对SV40EIp活性具有下调作用;IEP、EICP0、EICP22、EICP27对SV40EIp活性均具有上调作用;而对于含增强子的SV40EIp(SV40EIp E),这4种调控蛋白也能够上调SV40EIp E活性,其中EICP22上调作用最强。而且,EICP22和EICP27能够协同上调SV40EIp的活性。此外,EICP22与EHV-1早期基因启动子转录因子TBP、EICP27与TBP及EICP22与EICP27的免疫共沉淀试验(Co-IP)结果表明:仅EICP27可以与TBP发生相互作用,提示EICP22并非与EICP27或者TBP直接结合而实现协同上调作用,其协同上调作用还存在其他的作用方式。 展开更多
关键词 EHV-1 EICP22 EICP27 调控作用 SV40早期启动子
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