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DNA甲基化在奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎中的调控 被引量：8
1
作者 刘利 高雪 +3 位作者 高会江 张路培 李俊雅 许尚忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1554-1558,共5页
旨在研究CSN1S1基因启动子区上游STAT5结合区域的DNA甲基化在奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎中的变化及其对CSN1S1基因表达的调控。本研究利用亚硫酸氢盐修饰和荧光定量PCR法检测受金黄色葡萄球菌侵染后12、24、36和196h乳腺组织CSN1S1基... 旨在研究CSN1S1基因启动子区上游STAT5结合区域的DNA甲基化在奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎中的变化及其对CSN1S1基因表达的调控。本研究利用亚硫酸氢盐修饰和荧光定量PCR法检测受金黄色葡萄球菌侵染后12、24、36和196h乳腺组织CSN1S1基因启动子区上游甲基化程度及CSN1S1基因表达量。结果,24h内在细菌侵染的乳腺组织中甲基化程度随着时间的延长而增加;而CSN1S1基因表达量则显著降低(P<0.01),而在侵染后36和196h,甲基化程度和基因表达水平与24h无显著差异。结果表明,奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎能够促使乳腺组织DNA再甲基化,DNA再甲基化可能是奶牛乳房炎急性期的一种普遍调控。 展开更多
关键词 甲基化 金黄色葡萄球菌 乳房炎 基因表达
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用超声波活体检测建立肉牛宰后性状的预测模型 被引量：5
2
作者 王淑辉 许尚忠 +12 位作者 周正奎 淮亚红 姬爱国 高雪 陈金宝 任红艳 李俊雅 刘怀野 杨广林 祁茂彬 张利君 李波 金双勇 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期237-240,共4页
为了对肉牛进行早期选择并适时屠宰,该文通过超声波活体检测技术获得6种国内常用肉牛杂交品种和本土品种(60头)8月龄、22月龄眼肌面积和背膘厚数据,集中育肥屠宰后,用50头幼龄牛和成年牛超声测定的眼肌面积、背膘厚及体重建立了成年牛... 为了对肉牛进行早期选择并适时屠宰,该文通过超声波活体检测技术获得6种国内常用肉牛杂交品种和本土品种(60头)8月龄、22月龄眼肌面积和背膘厚数据,集中育肥屠宰后,用50头幼龄牛和成年牛超声测定的眼肌面积、背膘厚及体重建立了成年牛宰后性状(眼肌面积、背膘厚、产肉性状(高档肉质量、后部肉质量、优质肉质量和胴体质量))的数学预测模型,并对加入体重资料前后的预测模型进行检验分析。结果表明,屠宰后眼肌面积、背膘厚预测模型的决定系数小于0.75,但产肉性状预测模型的决定系数均大于0.75,经10头牛数据验证,所有模型预测结果与实测结果无显著差异,说明利用超声波技术测得幼龄牛或成年牛的眼肌面积和背膘厚预测屠宰后眼肌面积、背膘厚和产肉性状是可行的,且加入体重的预测模型较未加入的模型更为精确。 展开更多
关键词 肉牛 超声波技术 宰后性状 数学模型
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牛PU.1基因真核表达载体的构建、表达及鉴定 被引量：1
3
作者 刘利 张路培 +3 位作者 高雪 高会江 李俊雅 许尚忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期69-72,共4页
本研究从牛外周血单个核细胞提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码牛PU.1蛋白的cDNA;以pIRES2DsRed-Ex-press2为骨架构建牛PU.1基因表达载体pIRES2DsRed-Express2-PU.1,并利用脂质体介导重组质粒分别转染H293T细胞和牛胎儿成纤维细胞,通过荧光... 本研究从牛外周血单个核细胞提取细胞总RNA,RT-PCR获得编码牛PU.1蛋白的cDNA;以pIRES2DsRed-Ex-press2为骨架构建牛PU.1基因表达载体pIRES2DsRed-Express2-PU.1,并利用脂质体介导重组质粒分别转染H293T细胞和牛胎儿成纤维细胞,通过荧光观察和Western blotting鉴定表明成功构建了牛PU.1的表达载体,为下一步研究牛血单核细胞分化及牛抗病育种奠定基础。 展开更多
关键词 牛 PU 1基因 单核细胞
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金黄色葡萄球菌实时荧光PCR快速检测方法的建立 被引量：11
4
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期198-201,共4页
为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方... 为建立检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的快速检测方法,以SA Sa442基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光PCR快速检测SA的方法。结果显示,对16株试验菌株进行荧光PCR检测,只有SA检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为7.5 CFU/m L,利用该检测方法对采集的175份样品进行检测,共计检出5份SA阳性样品,与国标法(GB 4789.10—2010)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 Sa442基因 实时荧光PCR
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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：15
5
作者 李丹丹 徐义刚 +4 位作者 李梦圆 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期1453-1457,共5页
为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LMiap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测... 为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LMiap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 iap基因 实时荧光定量PCR
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基于vvhA基因检测创伤弧菌实时荧光PCR方法的建立 被引量：3
6
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2016年第9期31-33,70,共4页
为建立创伤弧菌(VV)的快速检测方法,根据vvhA基因序列设计合成引物和探针,建立实时荧光PCR方法。结果显示:所建立的方法能特异扩增出VV标准阳性菌株,而对其它14种菌株没有扩增;该方法的灵敏度为15CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同... 为建立创伤弧菌(VV)的快速检测方法,根据vvhA基因序列设计合成引物和探针,建立实时荧光PCR方法。结果显示:所建立的方法能特异扩增出VV标准阳性菌株,而对其它14种菌株没有扩增;该方法的灵敏度为15CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值(循环阈值)的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的156份样品进行检测,共计检出2份VV阳性样品,与行标法(SN/T 1870—2007)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 创伤弧菌 vvhA基因 实时荧光定量PCR
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溶藻弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：2
7
作者 李丹丹 徐义刚 +4 位作者 李梦圆 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期69-71,76,共4页
为建立溶藻弧菌(VA)的快速检测方法,本研究以VA Collagenase基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VA的方法。结果显示,对15株实验菌株进行荧光定量PCR检测,只有VA菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性... 为建立溶藻弧菌(VA)的快速检测方法,本研究以VA Collagenase基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VA的方法。结果显示,对15株实验菌株进行荧光定量PCR检测,只有VA菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为18 cfu/m L;稳定性和重复性实验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的165份样品进行检测,共计检出2份VA阳性样品,与SN/T2564-2010行标法检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 Collagenase基因 实时荧光定量PCR
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副溶血弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：4
8
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第1期58-62,共5页
为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VPtoxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性... 为建立检测副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的快速检测方法,本研究以VPtoxR基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立了实时荧光定量PCR快速检测VP的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有VP检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为4.9CFU/mL,利用该检测方法对采集的150份样品进行检测,共计检出3份VP阳性样品,与国标法(GB 4789.7—2013)检测结果一致,显示了良好的实用性。该检测方法灵敏度高、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 toxR基因 实时荧光定量PCR
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副溶血弧菌DPO-PCR检测方法的建立 被引量：2
9
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 王昱 邱索平 高会江 高慎阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期133-136,共4页
以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物... 以副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus,VP）toxR基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了DPO-PCR快速检测VP的方法.结果显示,退火温度在49～69℃都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VP的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为121 CFU/mL.利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出19份VP阳性样品,与行标法（SN/T 1870-2007）检测结果一致,实用性良好.该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性. 展开更多
关键词 副溶血弧菌 toxR基因 DPO-PCR
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肠侵袭性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用 被引量：1
10
作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期826-830,共5页
目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检... 目的为建立肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）的DPO-PCR快速检测方法。方法本研究以EIECipaH基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸（DPO）引物,建立了EIEC DPO-PCR检测方法。结果退火温度范围在47℃~67℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与EIEC的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.17×102 cfu/mL。利用该检测方法对采集的230份样品进行检测,共计检出3份EIEC阳性样品,与国标法（GB 4789.6-2003）检测结果一致,显示了良好的实用性。结论该DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。 展开更多
关键词 肠侵袭性大肠杆菌 IPAH基因 DPO-PCR
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