中国荷斯坦奶牛ABCG2基因外显子9多态性研究 被引量：6

1

作者 路国彬 李宏滨 +4 位作者 魏彩虹 杜立新 李玉荣 陆建 吕延飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期22-26,共5页

本研究旨在寻找ABCG2基因上与产乳性状相关的多态位点,为提高产乳性状提供理论依据。本研究采用PCR-SSCP技术分析了ABCG2基因exon9的多态性。使用SAS9.0对多态性与产乳性状之间的相关性进行方差分析。研究结果表明,在exon9中存在A→G突... 本研究旨在寻找ABCG2基因上与产乳性状相关的多态位点,为提高产乳性状提供理论依据。本研究采用PCR-SSCP技术分析了ABCG2基因exon9的多态性。使用SAS9.0对多态性与产乳性状之间的相关性进行方差分析。研究结果表明,在exon9中存在A→G突变,导致氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。A、B 2个等位基因的频率分别为0.86和0.14;存在3种基因型:AA、AB和BB型,基因型频率分别为:0.73、0.26、0.01;多态信息含量为0.22。方差分析结果显示,3种基因型间5种产乳性能的差异不显著。Y367C与产乳性状的相关性不明显,由于突变前后氨基酸性质发生了改变,可能会对蛋白质的结构产生一定的影响。 展开更多

关键词 中国荷斯坦奶牛 ABCG2基因 Y367C 多态性

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牛SLC27A1基因SNPs筛选及其与中国荷斯坦奶牛产奶性状的关联分析 被引量：4

2

作者 吕延飞 魏彩虹 +7 位作者 张莉 路国彬 刘开东 陆健 孙丹 张世芳 柳楠 杜立新 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第23期12471-12475,共5页

[目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR... [目的]对牛SLC27A1基因进行SNPs筛选并与中国荷斯坦奶牛的产奶性状进行关联分析,以期发现对中国荷斯坦奶牛产奶性状有显著影响的SNP位点。[方法]根据性能测定记录选取48头中国荷斯坦奶牛,提取血样DNA,组成2个DNA池,用于SNPs筛选,采用PCR-SSCP和克隆测序方法对DNA池进行SLC27A1基因SNPs筛选。针对发现的SNP位点,采用PCR-RFLP方法对另外231头中国荷斯坦奶牛进行群体基因型检测,采用SAS(8.02)GLM过程对各基因型与产奶性状进行关联分析。[结果]在exon3发现T112C位点,在3‘UTR发现G64A位点,T112C为同义突变;经PCR-RFLP检测,发现在T112C位点存在TT、TC、CC3种基因型,G64A位点存在GG、GA、AA3种基因型。2个位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态。T112C位点的CC型个体的产奶量极显著高于TC型个体(P<0.01),3种基因型对乳蛋白率和乳脂率影响均不显著(P>0.05),乳蛋白率呈现CC>TC>TT的趋势,乳脂率呈现TT>TC>CC的趋势;G64A位点3种基因型对产奶量、乳蛋白率、乳脂率的影响均不显著(P>0.05),但产奶量呈现GA>GG>AA的趋势,乳蛋白率和乳脂率呈现AA>GG>GA的趋势。[结论]该基因T112C位点与产奶量性状有一定的关联性,通过提高CC基因型频率有望提高中国荷斯坦奶牛的产奶量,SLC27A1基因可作为调控中国荷斯坦奶牛产奶量的候选基因,同时为该基因的标记辅助育种和进一步研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 SLC27A1基因 SNPS PCR-SSCP PCR-RFLP 产奶性状

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山羊GDF9基因多态性与产羔数关联分析研究 被引量：12

3

作者 董传河 杜立新 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第2期227-237,共11页

采用PCR-SSCP技术检测山羊GDF9基因外显子突变位点,发现编码序列第183 bp、719 bp、959 bp、1189bp处分别发生了C→A、C→T、A→C、G→A的单碱基突变。序列分析显示C183A突变没有引起氨基酸的改变,C719T突变使蛋白质第240位氨基酸残基... 采用PCR-SSCP技术检测山羊GDF9基因外显子突变位点,发现编码序列第183 bp、719 bp、959 bp、1189bp处分别发生了C→A、C→T、A→C、G→A的单碱基突变。序列分析显示C183A突变没有引起氨基酸的改变,C719T突变使蛋白质第240位氨基酸残基由缬氨酸变为丙氨酸,A959C突变使第320位氨基酸残基由谷氨酰胺变为脯氨酸,G1189A突变导致第397位氨基酸残基由缬氨酸变为异亮氨酸。应用LDR技术对济宁青山羊(234只)、鲁北白山羊(90)只、沂蒙黑山羊(84只)进行GDF9四个突变位点的群体检测,利用SAS软件GLM过程对四个位点的基因型效应和产羔数进行了最小二乘分析,结果表明C183A突变对济宁青山羊和鲁北白山羊产羔数没有显著影响,但对沂蒙黑山羊的产羔数有显著影响(P<0.05),CC型产羔数比AC型多0.11只(P<0.05);C719T突变和A959C突变对济宁青山羊、鲁北白山羊、沂蒙黑山羊的产羔数均没有显著影响(P>0.05);G1189A突变对山羊产羔数没有显著影响(P>0.05),对鲁北白山羊产羔数有显著影响(P<0.05),AG型产羔数比AA型多0.42只(P<0.01),G1189A突变对沂蒙黑山羊产羔数有极显著影响(P<0.01),AA型产羔数分别比AG型、GG型多0.34只(P<0.05)、0.38只(P<0.05)。 展开更多

关键词 山羊 产羔数 GDF9 PCR-SSCP LDR

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哺乳动物防御素研究进展 被引量：7

4

作者 龙晶 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第8期137-141,共5页

防御素是动植物先天免疫系统的主要成分。哺乳动物体内的防御素在宿主的嗜中性粒细胞、粘膜表面、皮肤和其他上皮细胞免疫中起重要作用。作者综述了哺乳动物防御素的来源与分布、分子结构特征、生物活性、作用机理及应用前景。

关键词 防御素 生物活性 应用前景

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慢病毒载体构建策略及生物安全性研究进展 被引量：6

5

作者 尹春光 杜立新 《动物医学进展》 CSCD 2008年第2期72-75,共4页

慢病毒可以感染分裂细胞和非分裂细胞,是较有前途的病毒载体,来源于HIV-1型载体,能阻止形成有复制能力的HIV-1病毒,构建一个更为安全的模式是慢病毒载体构建策略的焦点。该文介绍了慢病毒载体应用过程中的不同载体系统及构建策略,对载... 慢病毒可以感染分裂细胞和非分裂细胞,是较有前途的病毒载体,来源于HIV-1型载体,能阻止形成有复制能力的HIV-1病毒,构建一个更为安全的模式是慢病毒载体构建策略的焦点。该文介绍了慢病毒载体应用过程中的不同载体系统及构建策略,对载体的生物安全性进行了分析,展望了慢病毒在基因治疗、RNA干扰及转基因领域的应用前景。 展开更多

关键词 慢病毒 人类Ⅰ型免疫缺陷病毒 载体系统

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不同品种绵羊TGF-β1基因单核苷酸多态性及其与繁殖力关系的研究 被引量：4

6

作者 高丽霞 李宏滨 +4 位作者 杜立新 宋雪梅 李珍祖 李善刚 魏彩虹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期503-507,共5页

以小尾寒羊、滩羊、同羊、欧拉羊共计196头为研究材料,采用PCR-SSCP技术,对绵羊TGF-β1基因6-7外显子区间内的805 bp序列进行多态性分析,发现了一个多态位点。经克隆测序分析发现,第6内含子区内存在一个突变,该突变位点为第7外显子上游... 以小尾寒羊、滩羊、同羊、欧拉羊共计196头为研究材料,采用PCR-SSCP技术,对绵羊TGF-β1基因6-7外显子区间内的805 bp序列进行多态性分析,发现了一个多态位点。经克隆测序分析发现,第6内含子区内存在一个突变,该突变位点为第7外显子上游的第294位碱基处缺失了AGAC(序列:gi76871756中的14201位)。对不同绵羊群的基因型和等位基因频率统计结果表明,多胎品种小尾寒羊以AB基因型为主。χ2检验结果表明,单胎品种滩羊、同羊、欧拉羊以BB基因型为主,所有品种都处于Hardy-Weinberg平衡状态。 展开更多

关键词 转化生长因子Β1 PCR—SSCP 单核苷酸多态性 绵羊

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Mx基因稀有密码子和mRNA结构及大肠杆菌表达优化 被引量：26

7

作者 尹春光 杜立新 +1 位作者 赵桂平 李宏滨 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期75-82,共8页

通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构的分析,构建了4种重组表达菌株BL21(DE3)/pET-Mx,Rosseta(DE3)/pET-Mx,BL21(DE3)/pGEX-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx,在大肠杆菌中进行Mx基因的表达,Rosseta(DE3)/pET-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx... 通过对稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构的分析,构建了4种重组表达菌株BL21(DE3)/pET-Mx,Rosseta(DE3)/pET-Mx,BL21(DE3)/pGEX-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx,在大肠杆菌中进行Mx基因的表达,Rosseta(DE3)/pET-Mx和Rosseta(DE3)/pGEX-Mx重组表达菌中都获得了表达,Western blotting检测到了特异的75 kDa表达产物。实验结果证明稀有密码子和mRNA翻译起始区二级结构对Mx蛋白表达都有影响,选择适用于稀有密码子表达的菌株Rosetta(DE3)有利于Mx蛋白的表达,同时翻译起始区二级结构能值较低的表达载体pGEX-Mx获得的表达量明显增高。实验中首次获得了重组表达鸡全长Mx蛋白的大肠杆菌重组菌。 展开更多

关键词 MX蛋白 翻译起始区 稀有密码子

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绵羊MC4R基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：13

8

作者 张菊 杜立新 +1 位作者 李宏滨 魏彩虹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期804-810,共7页

本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 ... 本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 bp,含有999 bp的完整CDS编码区,编码332个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与牛、人、猪、大鼠、小鼠MC4R基因对应序列的同源性分别为95.2%、68.8%、82.7%、76.6%、77.1%,预测的氨基酸序列同源性分别为97.0%、92.8%、93.7%、92.2%、91.6%。组织表达谱分析表明MC4R基因在各组织均不同程度的表达,其中在大脑表达量很高,其他组织较低。生物信息学预测MC4R蛋白功能发现,绵羊的MC4R蛋白存在7个跨膜螺旋结构域,同时预测MC4R存在10个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。结果表明,MC4R是一个非常保守的蛋白,在绵羊的生长发育中起着重要作用。 展开更多

关键词 黑素皮质素受体-4 基因克隆 半定量RT-PCR 生物信息学

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牛β-防御素BNBD5基因在毕赤酵母中的表达 被引量：4

9

作者 李宏滨 龙晶 杜立新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期123-126,共4页

本研究在本实验室成功构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库的基础上,旨在通过对牛β-防御素基因的分析,进一步揭示乳房炎抗性的分子机理。以牛β-防御素BNBD5基因作为乳房炎抗性的候选基因,通过克隆该基因的编码区,成功构建了毕赤酵母表... 本研究在本实验室成功构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库的基础上,旨在通过对牛β-防御素基因的分析,进一步揭示乳房炎抗性的分子机理。以牛β-防御素BNBD5基因作为乳房炎抗性的候选基因,通过克隆该基因的编码区,成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA/BNBD5,并采用毕赤酵母表达系统表达了BNBD5蛋白。该结果为今后BNBD5抗体的制备奠定了基础。 展开更多

关键词 奶牛 乳房炎 Β-防御素 毕赤酵母 表达

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绵羊CAST基因2型和4型转录本的克隆及特性分析 被引量：4

10

作者 张菊 杜立新 +1 位作者 魏彩虹 李宏滨 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1107-1112,共6页

钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)是一种内源性的需要Ca2+激活的钙蛋白酶抑制剂,在肌肉组织的蛋白质降解过程中起重要的调节作用。文章利用牛CAST基因的mRNA序列,通过逆转录RT-PCR首次克隆获得绵羊CAST基因2型转录本和4型转录本的部... 钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin,CAST)是一种内源性的需要Ca2+激活的钙蛋白酶抑制剂,在肌肉组织的蛋白质降解过程中起重要的调节作用。文章利用牛CAST基因的mRNA序列,通过逆转录RT-PCR首次克隆获得绵羊CAST基因2型转录本和4型转录本的部分cDNA序列,并对序列进行生物信息学分析。CAST基因2型转录本的扩增片段为4385bp,完整的开放阅读框为2361bp,编码786个氨基酸;CAST基因4型转录本的扩增片段为1467bp,完整的开放阅读框为1317bp,编码438个氨基酸。CASTⅡ型蛋白序列存在4个保守结构域,CASTⅣ型蛋白序列存在3个保守结构域;两者的二级结构均以螺旋为主,富含疏水区域,其氨基酸序列存在多个磷酸化位点以及蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)的磷酸化位点。通过RT-PCR分析CAST基因2型转录本和4型转录本的组织表达谱,结果表明CAST基因2型转录本在所检测的10个组织中均表达,CAST基因4型转录本仅在睾丸组织中表达。 展开更多

关键词 CAST CDNA克隆 组织表达

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鸡6个功能基因microRNA靶标区域SNP的生物信息学预测 被引量：4

11

作者 耿立英 张传生 杜立新 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1026-1032,共7页

GDF-8、IGF-I、IGF-III、IGF2R、IGFBP2和GHR是鸡的重要经济性状候选基因。利用miRanda和Targetscan软件预测6个基因3′UTR潜在的microRNA靶标,并发掘靶标区域SNP位点。结果表明:在6个基因的26个microRNA靶标区域,共检测到125个SNP位点... GDF-8、IGF-I、IGF-III、IGF2R、IGFBP2和GHR是鸡的重要经济性状候选基因。利用miRanda和Targetscan软件预测6个基因3′UTR潜在的microRNA靶标,并发掘靶标区域SNP位点。结果表明:在6个基因的26个microRNA靶标区域,共检测到125个SNP位点,在靶标及其5′和3′邻接等长侧翼区分别检测到47个、44个和35个SNPs位点,其中12个SNP定位于靶标种子序列互补区。种子序列互补区及其3′侧翼区的SNP位点可能会影响microRNA的调控,导致家禽的表型变异。 展开更多

关键词 鸡 非翻译区 小RNA 生物信息学 单核苷酸多态性

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深度测序鉴定绵羊microRNA转录组 被引量：4

12

作者 张世芳 魏彩虹 +8 位作者 陆健 张小宁 周鑫磊 张淑珍 王光凯 曹家雪 赵福平 张莉 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期19-22,共4页

本研究采集的Texel绵羊胎儿的背最长肌样品包括5个发育阶段:70、85、100、120和135 d。通过采用Solexa测序技术对混池样品进行了microRNA(miRNA)深度测序,获得了16532850条原始序列读数。使用ACGT101-miR v4.2分析软件对miRNA测序数据... 本研究采集的Texel绵羊胎儿的背最长肌样品包括5个发育阶段:70、85、100、120和135 d。通过采用Solexa测序技术对混池样品进行了microRNA(miRNA)深度测序,获得了16532850条原始序列读数。使用ACGT101-miR v4.2分析软件对miRNA测序数据进行了深度发掘;通过与最新的哺乳动物成熟miRNA序列(miRNA数据库:miRBase v17.0)、miRNA前体序列、绵羊基因组序列(绵羊基因组数据库,2010年2月)的比对分析,对绵羊microRNA转录组数据库进行了大幅更新,pre-miRNA(miRNA前体)序列增至1529条,编码的miRNA成熟体序列增至1999条。通过实时荧光定量PCR技术对深度测序获得的5个miRNA在混池样品中进行了验证。绵羊miRNA的研究起步较晚,而miRNA的发现与鉴定将促进基因调控机制及miRNA功能的研究。 展开更多

关键词 Solexa测序 Texel绵羊 背最长肌 microRNA转录组

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不同激活条件和培养基对兔卵母细胞孤雌激活和胚胎发育的影响 被引量：2

13

作者 李善刚 陈学进 +2 位作者 李宏滨 魏彩虹 杜立新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1665-1670,共6页

对新西兰兔成熟卵母细胞在不同方式激活后的发育潜能和孤雌胚胎在不同培养体系中的发育进行了研究。结果发现电击激活和化学激活单独使用不能很好的激活兔卵母细胞,两次电击和化学激活配合使用能够较好的激活兔卵母细胞。通过比较发现B... 对新西兰兔成熟卵母细胞在不同方式激活后的发育潜能和孤雌胚胎在不同培养体系中的发育进行了研究。结果发现电击激活和化学激活单独使用不能很好的激活兔卵母细胞,两次电击和化学激活配合使用能够较好的激活兔卵母细胞。通过比较发现B2培养基支持兔孤雌胚胎发育的能力显著高于其他培养基。试验建立了和体内受精时间过程相似的卵母细胞活化和培养系统,为兔的核移植技术优化了条件。 展开更多

关键词 兔 卵母细胞 孤雌激活 胚胎发育 胚胎培养

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临床型乳房炎奶牛与健康奶牛嗜中性粒细胞差异蛋白质组的表达分析 被引量：3

14

作者 刘开东 柳楠 +5 位作者 杜立新 魏彩虹 张莉 路国彬 赵福平 刘积凤 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1298-1303,共6页

嗜中性粒细胞是防止病原入侵的第一道防线,且已有研究表明嗜中性粒细胞在奶牛乳腺免疫中发挥着关键作用。文章运用双向凝胶电泳方法对临床型乳房炎奶牛与健康奶牛嗜中性粒细胞差异表达蛋白质组进行分析,成功获得分辨率较高、重复性较好... 嗜中性粒细胞是防止病原入侵的第一道防线,且已有研究表明嗜中性粒细胞在奶牛乳腺免疫中发挥着关键作用。文章运用双向凝胶电泳方法对临床型乳房炎奶牛与健康奶牛嗜中性粒细胞差异表达蛋白质组进行分析,成功获得分辨率较高、重复性较好的奶牛嗜中性粒细胞双向电泳凝胶图谱,并通过MALDI-TOF MS鉴定获得差异表达的蛋白质7种,主要涉及细胞代谢、氧化应激、炎症反应等相关蛋白通路。实验获得的临床型乳房炎奶牛与健康奶牛嗜中性粒细胞差异表达蛋白有望为今后奶牛乳房炎的抗病育种研究提供理论依据。 展开更多

关键词 奶牛 嗜中性粒细胞 双向电泳 蛋白质组学

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绵羊BTG1基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：2

15

作者 张菊 杜立新 +1 位作者 李宏滨 魏彩虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期911-917,共7页

B细胞易位基因1(BTG1基因)是BTG/TOB基因家族的成员之一,在动物细胞的增殖和分化中起重要的作用.利用牛BTG1基因的mRNA序列与绵羊的EST数据库进行Blast检索,并通过序列拼接和逆转录RT-PCR方法首次获得绵羊BTG1基因的部分cDNA序列(GenBan... B细胞易位基因1(BTG1基因)是BTG/TOB基因家族的成员之一,在动物细胞的增殖和分化中起重要的作用.利用牛BTG1基因的mRNA序列与绵羊的EST数据库进行Blast检索,并通过序列拼接和逆转录RT-PCR方法首次获得绵羊BTG1基因的部分cDNA序列(GenBank登录号FJ444829),其片段长度为1 358 bp,包括完整的开放阅读框516 bp,编码171个氨基酸.半定量PCR研究结果表明:BTG1基因在小尾寒羊和陶赛特羊的10种组织中均表达,并具有一致的表达趋势.同源分析结果表明,绵羊BTG1蛋白的氨基酸序列中存在BTG/TOB的保守结构域,并且该蛋白在不同物种间具有很高的保守性.通过生物信息学预测BTG1蛋白功能,发现绵羊BTG1蛋白存在1个跨膜结构域、8个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点.蛋白质结构同源建模分析表明,绵羊BTG1蛋白具有BTG/TOB蛋白家族的典型空间结构. 展开更多

关键词 B细胞易位基因1(BTG1基因) CDNA克隆 半定量RT-PCR 生物信息学预测

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绵羊Myostatin基因敲除载体的构建 被引量：2

16

作者 孙丹 金梅 +5 位作者 杜立新 魏彩虹 张莉 路国彬 陆健 吕延飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期93-97,共5页

根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除载体。利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9 kb,包括全部的exon1,intron1,exon2及部... 根据Myostatin基因突变可导致肌肉量激增而产生"双肌"表型的特点,构建绵羊Myostatin基因置换型敲除载体。利用LA-PCR技术成功地扩增得到绵羊Myostatin基因同源臂序列,其中同源长臂4.9 kb,包括全部的exon1,intron1,exon2及部分启动子和大部分intron2;同源短臂1.1 kb,包括部分exon3和3′非翻译区序列,将二者连入PloxpII正负筛选敲除骨架载体,利用骨架载体上Neo基因替代Myostatin基因的exon3,从而成功构建专门针对Myostatin第3外显子区域缺失的置换型敲除载体PloxpⅡ-OVIS-MSTN。酶切和测序鉴定证明载体构建正确,为后续获得绵羊Myostatin基因缺失型体细胞株奠定试验基础。 展开更多

关键词 绵羊 MYOSTATIN基因 基因敲除 置换型敲除载体

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山羊myostatin基因慢病毒RNA干扰载体的构建及效果验证 被引量：1

17

作者 陆健 张世芳 +6 位作者 张小宁 刘佳森 李碧春 赵福平 张莉 魏彩虹 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期1-6,共6页

myostatin基因是肌肉生长和发育的关键负调控因子之一,该基因突变或失活的物种都呈现肌肉增大的双肌表型,暗示在家畜中使该基因失活可以增加其产肉量。为了进一步揭示myostatin在山羊胎儿成纤维细胞中的生物学功能以及制备可有效失活myo... myostatin基因是肌肉生长和发育的关键负调控因子之一,该基因突变或失活的物种都呈现肌肉增大的双肌表型,暗示在家畜中使该基因失活可以增加其产肉量。为了进一步揭示myostatin在山羊胎儿成纤维细胞中的生物学功能以及制备可有效失活myostatin基因的工具,将筛选的myostatin基因潜在RNA干扰靶位点连接到慢病毒干扰载体的转移质粒中,构建慢病毒介导的RNA干扰载体,验证其干扰效果。结果表明,干扰序列与转移质粒连接正确,成功构建myostatin基因慢病毒干扰载体,慢病毒三质粒共转293T细胞,获得的慢病毒颗粒可高效转染山羊胎儿成纤维细胞,Real-time PCR检测发现慢病毒干扰载体Lv322有效减少山羊胎儿成纤维细胞中myostatin基因mRNA 75%的表达(P<0.01),Western blotting检测显示myostatin蛋白则有效降低了94%(P<0.01)。本试验为研究myostatin基因的功能及制备失活转基因动物提供有效工具以及理论基础。 展开更多

关键词 MYOSTATIN基因 山羊胎儿成纤维细胞 慢病毒载体 RNA干扰

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绵羊Myostatin基因真核表达载体的构建及在其原代成纤维细胞中的瞬时表达 被引量：1

18

作者 陆健 宋正海 +7 位作者 吕延飞 赵福平 张莉 魏彩虹 范广习 丁家桐 李碧春 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期14-19,共6页

Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDN... Myostatin(MSTN)基因是胚胎期肌肉形成和出生后骨骼肌生长的主要调控因子之一,通过抑制肌细胞的扩增和分化而调控肌肉的生长和发育。为了进一步揭示MSTN在绵羊成纤维细胞中的生物学功能,采用RT-PCR从绵羊肌肉组织中扩增MSTN基因,将其cDNA终止密码子TGA删除,采用定向克隆技术连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP)报告基因的真核表达载体pAcGFP-N1中,构建融合蛋白重组质粒,经XhoⅠ/SacⅡ双酶切、测序鉴定后,用脂质体介导质粒转染绵羊原代成纤维细胞,观测荧光表达及用RT-PCR和Western blotting方法检测基因转录、蛋白质表达情况。结果表明,成功克隆绵羊MSTN基因,通过PCR方法在MSTN阅读框两端引入了XhoⅠ和SacⅡ克隆位点,成功构建pAcGFP-MSTN融合蛋白真核表达载体,重组质粒转染绵羊成纤维细胞24h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,通过RT-PCR扩增出1138bp的转录产物,并用Western blotting检测到78ku目的蛋白的表达。本试验为研究MSTN基因在成纤维细胞和脂肪分化调控中的具体机制奠定基础。 展开更多

关键词 MYOSTATIN 绵羊成纤维细胞 真核表达载体

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