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小反刍兽疫病毒H基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究被引量：5: 1; 作者隋修锟金红岩 +4 位作者李文超史利军赵占中梁琳李刚《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期974-980,共7页; 为表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白,并探讨其免疫原性,通过RT-PCR克隆PPRV Nigeria75/1毒株H基因,将其克隆至供体质粒pFB-LIC-Bse中,测序验证后将重组质粒pFB-LIC-Bse-PPRV-H转化至DH10Bac感受态细胞中,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质... 展开更多; 关键词小反刍兽疫病毒 H蛋白杆状病毒表达系统免疫性检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：8: 2; 作者宫苗苗曾妮 +1 位作者程朝飞李刚《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期17-22,26,共7页; 目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(... 展开更多; 关键词狂犬病病毒基质蛋白原核表达蛋白纯化酶联免疫吸附试验; 在线阅读下载PDF 职称材料

小反刍兽疫病毒H基因DNA疫苗的构建及对小鼠的免疫原性: 3; 作者李文超隋修锟 +3 位作者金红岩梁琳王文泉李刚《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1142-1147,共6页; 旨在构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫原性。利用RT-PCR扩增了PPRV的H基因并将其克隆到pcDNA3.1(+)载体中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-H,然后转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,采用间接免疫荧光和Western blot... 展开更多; 关键词小反刍兽疫病毒 DNA疫苗 H基因免疫原性; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析被引量：1: 4; 作者薛晓娟金红岩 +3 位作者赵玲娜隋修锟 Zheney Makay 李刚《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2227-2234,共8页; 旨在以人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体,构建表达水泡性口炎病毒(VSV)双血清型G蛋白的重组腺病毒。利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因并将其克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMV K-NpA中。通过PacⅠ酶线性化后,与同样经PacⅠ酶线性化的... 展开更多; 关键词 VSV G蛋白重组腺病毒免疫反应小鼠; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫病毒H基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究被引量：5: 1; 作者隋修锟金红岩李文超史利军赵占中梁琳李刚; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室/农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期974-980,共7页; 基金国家自然科学基金(31172342) 国家科技支撑计划(2013BAD12B05) +2 种基金国际合作项目(D32025/17453) 国家公益行业项目(200903037-2) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项基金(2014ywf-yb-6); 文摘为表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白,并探讨其免疫原性,通过RT-PCR克隆PPRV Nigeria75/1毒株H基因,将其克隆至供体质粒pFB-LIC-Bse中,测序验证后将重组质粒pFB-LIC-Bse-PPRV-H转化至DH10Bac感受态细胞中,经同源重组获得重组杆状病毒穿梭质粒bacmid-PPRV-H,将其转染昆虫细胞sf21获得含有PPRV H基因的重组杆状病毒。采用SDS-PAGE、Western blot、IFA及小鼠免疫试验鉴定表达产物的反应原性及免疫原性。结果表明,在杆状病毒表达系统中表达的PPRV H蛋白能与His-tag单克隆抗体及PPRV阳性血清发生特异性反应,其相对分子质量为68ku;表达产物接种小鼠可诱导其产生特异性抗体和抗小反刍兽疫病毒中和抗体,淋巴细胞增殖试验检测结果表明重组杆状病毒rBacmid-H能与相应抗体和致敏的效应淋巴细胞发生较强的特异性反应。本试验获得的重组杆状病毒表达的PPRV H蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,可诱导小鼠产生保护性中和抗体,该试验为进一步开发小反刍兽疫亚单位疫苗奠定了基础。; 关键词小反刍兽疫病毒 H蛋白杆状病毒表达系统免疫性检测; Keywords peste des petits ruminants virus H protein baculovirus expression system immunoge-nicity detecting; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：8: 2; 作者宫苗苗曾妮程朝飞李刚; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站; 出处《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期17-22,26,共7页; 基金国家自然科学基金(No.31172342) 国家高技术研究发展计划"863"计划(No.2008AA10Z411) +4 种基金 FAO/IAEA项目(No.14133 No.14515 No.17453)联合资助~~; 文摘目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。; 关键词狂犬病病毒基质蛋白原核表达蛋白纯化酶联免疫吸附试验; Keywords rabies virus matrix protein prokaryoticexpression protein purification ELISA; 分类号 R373.9 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫病毒H基因DNA疫苗的构建及对小鼠的免疫原性: 3; 作者李文超隋修锟金红岩梁琳王文泉李刚; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站北京华都诗华生物制品有限公司; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1142-1147,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31172342) 国家科技支撑计划(2013BAD12B05) +1 种基金 FAO/IA-EA国际合作项目(CRP17453/D32030); 文摘旨在构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H蛋白的核酸疫苗,并评价其对小鼠的免疫原性。利用RT-PCR扩增了PPRV的H基因并将其克隆到pcDNA3.1(+)载体中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-H,然后转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,采用间接免疫荧光和Western blot检测H蛋白的瞬时表达情况。将重组质粒通过后腿肌肉注射的方式免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA、淋巴细胞增殖试验和细胞因子检测评价该DNA疫苗的免疫效果,结果表明,成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1-H,并且能够在CEF细胞中表达。免疫小鼠后,pcDNA3.1-H能够诱导小鼠产生较高的特异性抗体水平,DNA疫苗免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖试验刺激指数(SI)均高于空载体和PBS免疫组,并且能够分泌较高水平的IFN-γ和IL-4。因此,制备的DNA疫苗免疫小鼠后可诱导体液免疫应答和细胞免疫应答,具有较好的应用前景。; 关键词小反刍兽疫病毒 DNA疫苗 H基因免疫原性; Keywords Peste des petits ruminants virus DNA vaccine Hgene immunogenicity; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析被引量：1: 4; 作者薛晓娟金红岩赵玲娜隋修锟 Zheney Makay 李刚; 机构中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室/农业部兽用药物与兽医生物技术北京科学观测实验站; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2227-2234,共8页; 基金国家科技支撑计划项目(2013BAD12B05) 国家自然科学基金项目(31172342 +4 种基金 31472203) 转基因重大专项(2014ZX0801203B) 国际合作项目(D32025/17453) 国家公益行业项目(200903037-2) 创新团队基金(ASTIP-IAS15); 文摘旨在以人5型复制缺陷型腺病毒为表达载体,构建表达水泡性口炎病毒(VSV)双血清型G蛋白的重组腺病毒。利用融合PCR技术扩增VSV-IN-G-NJ-G基因并将其克隆至腺病毒穿梭载体pacAd-CMV K-NpA中。通过PacⅠ酶线性化后,与同样经PacⅠ酶线性化的骨架载体pacAd5 9.2-100共转染AAV-293细胞,获得重组腺病毒rAd-VSV-IN-G-NJ-G。该重组腺病毒于AAV-293细胞连续传代至20代效价稳定。经间接免疫荧光和Western blot检测,G蛋白获得正确表达。将重组腺病毒接种小鼠,利用间接ELISA及病毒中和试验检测其体液免疫水平,结果显示可诱导产生VSV特异性抗体,其中和抗体水平在1∶32;利用淋巴细胞增殖试验检测细胞免疫水平,结果表明可以引起接种小鼠强烈的淋巴细胞增殖。构建的重组腺病毒免疫小鼠后可以引起一定的体液免疫和细胞免疫反应,为表达VSV糖蛋白重组腺病毒疫苗的深入研究奠定了基础。; 关键词 VSV G蛋白重组腺病毒免疫反应小鼠; Keywords VSV G protein recombinant adenovirus immunogenicity mice; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	小反刍兽疫病毒H基因在杆状病毒中的表达及其免疫原性研究	隋修锟金红岩李文超史利军赵占中梁琳李刚	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立	宫苗苗曾妮程朝飞李刚	《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心	2013	8	在线阅读下载PDF 职称材料
3	小反刍兽疫病毒H基因DNA疫苗的构建及对小鼠的免疫原性	李文超隋修锟金红岩梁琳王文泉李刚	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	表达水泡性口炎病毒双血清型G蛋白重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性分析	薛晓娟金红岩赵玲娜隋修锟 Zheney Makay 李刚	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	1	在线阅读下载PDF 职称材料