狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)生物学特性研究进展

1

作者 刘聪暖 娄忠子 +3 位作者 李立 范彦雷 闫鸿斌 贾万忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期860-865,874,共7页

本文比较了狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)线粒体cox1(细胞色素C氧化酶亚基1)和nad1(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1)基因片段序列,核基因编码基因elp(埃兹-根蛋白-膜突蛋白样蛋白)、ef1a(延伸因子1α)、pepck(磷酸烯醇式丙酮酸... 本文比较了狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)线粒体cox1(细胞色素C氧化酶亚基1)和nad1(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1)基因片段序列,核基因编码基因elp(埃兹-根蛋白-膜突蛋白样蛋白)、ef1a(延伸因子1α)、pepck(磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶)和pold(DNA聚合酶δ)序列,核糖体rRNA基因(ITS1和18SrRNA)序列,以及狮棘球绦虫与其它棘球绦虫之间的DNA序列的差异度,并简述了其吻钩皱褶明显的形态学特征和以独特的狮类为终末宿主的生物学特性。通过对狮棘球绦虫分子遗传标记特征、种地位的确立、种系发生、鉴定方法、宿主范围、地理分布、流行病学特征和未来研究方向的阐述,为从事该领域研究的学者和临床工作者提供了背景知识,并对棘球蚴病的临床流行病学调查和防治工作提供了依据。 展开更多

关键词 狮棘球绦虫 分类学 种系发生 生物学特性 分子遗传标记 流行病学

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小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用 被引量：4

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作者 蒙学莲 窦永喜 +2 位作者 朱学亮 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期426-433,共8页

旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区... 旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区N端29-136位氨基酸和m4-胞外区C端137-240位氨基酸)编码基因的pEGFP-N1系列真核表达载体,将测序正确的重组质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1细胞株,利用免疫共沉淀技术验证tH蛋白与SLAM蛋白相互作用的关键氨基酸区段。结果表明,成功构建了预期的重组表达载体,转染CHO细胞后目的蛋白正确表达;免疫共沉淀时,tH能与SLAM、m1、m2和m3蛋白发生反应,但没有与m4蛋白发生反应。由此可知,SLAM N端29-136位氨基酸是决定SLAM与PPRV H蛋白结合的关键氨基酸区段,这与麻疹病毒属其他宿主SLAM受体的研究结果一致。 展开更多

关键词 血凝素蛋白 SLAM 转染 免疫共沉淀 相互作用

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甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析 被引量：5

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作者 莫斯科 房永祥 +1 位作者 冯海燕 景志忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1662-1668,共7页

为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登... 为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登录号分别为FJ905823和FJ9058258),再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪-人异种移植中,近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势,也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。 展开更多

关键词 猪白细胞抗原 合作猪 RT-PCR 生物信息学

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棘球属绦虫分子种系发生研究进展 被引量：11

4

作者 李立 娄忠子 +4 位作者 闫鸿斌 范彦雷 李建秋 殷宏 贾万忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1155-1162,共8页

棘球属绦虫引起的棘球蚴病是一种严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。棘球属绦虫分子种系发生分类研究的最新结果表明,其传统的形态学分类需要修正,从原有的5个种增加到9个种。特对棘球属绦虫分子种系发生研究新进展作一综述,为... 棘球属绦虫引起的棘球蚴病是一种严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。棘球属绦虫分子种系发生分类研究的最新结果表明,其传统的形态学分类需要修正,从原有的5个种增加到9个种。特对棘球属绦虫分子种系发生研究新进展作一综述,为棘球蚴病的病原生物学鉴定和分类提供参考。 展开更多

关键词 棘球属绦虫 分类学 分子种系发生 进化 流行病学

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带科绦虫线粒体基因组全序列研究进展 被引量：10

5

作者 贾万忠 闫鸿斌 +3 位作者 郭爱疆 史万贵 詹芳 付宝权 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期596-600,共5页

关键词 带科绦虫 基因组全序列 线粒体 INFECTIONS 人兽共患寄生虫病 基因组序列分析 棘球蚴病 囊尾蚴病

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绦虫线粒体基因组学研究进展

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作者 贾万忠 闫鸿斌 +4 位作者 娄忠子 倪兴维 史万贵 郭爱疆 詹芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期910-914,共5页

绦虫大约有1 500多种,隶属于扁形动物门（Platyhel-minthes）绦虫纲（Cestoda）,营寄生生活,由成虫及其幼虫（蚴）所致的绦虫病和绦虫蚴病严重危害人和动物的健康。绦虫线粒体基因组有许多独特的特征如基因组很小,基因位置排列相对稳定... 绦虫大约有1 500多种,隶属于扁形动物门（Platyhel-minthes）绦虫纲（Cestoda）,营寄生生活,由成虫及其幼虫（蚴）所致的绦虫病和绦虫蚴病严重危害人和动物的健康。绦虫线粒体基因组有许多独特的特征如基因组很小,基因位置排列相对稳定等,tRNA和两个主要非编码区的二级结构、碱基组成和变异等有也其自身特点,这些特征已经在研究物种分类、基因进化、现有物种进化史等方面得到应用[1-4]。 展开更多

关键词 线粒体基因组 基因组学 绦虫纲 扁形动物门 物种分类 相对稳定 二级结构 非编码区

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猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究

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作者 郭爱疆 吴润 +4 位作者 贾万忠 刘斌 闫鸿斌 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期208-213,共6页

本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通... 本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。 展开更多

关键词 猪带绦虫六钩蚴 TSOL18 单抗 体外杀六钩蚴作用

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猪Toll样受体7基因的克隆及序列分析 被引量：5

8

作者 段凤云 房永祥 +3 位作者 陈国华 王生富 何延华 景志忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期599-601,共3页

目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1... 目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1050个氨基酸,富含16.2%的亮氨酸;同源性分析显示,与GenBank上登载的猪TLR7参考序列(DQ333222)的同源性为98.8%,与牛和绵羊的同源性较高,与马、狗、人、家鼠、褐鼠的次之,其遗传演化关系与亲缘关系密切;推导氨基酸的分子结构预测表明,该分子属于I型跨膜受体,由胞外区(588个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(174个氨基酸)组成,有信号肽序列、富含亮氨酸的重复序列(LRR)和Toll/IL-1R同源区结构域。结论:成功克隆了猪TLR7基因,预测分析证实具有典型的TLR家族结构特征,这为进一步研究其参与病原分子模式识别和信号传导奠定了基础。 展开更多

关键词 猪Toll样受体7 分子克隆 序列分析 结构预测

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抑制性消减杂交技术的应用 被引量：8

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作者 李小庆 景志忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期46-50,共5页

基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、... 基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。 展开更多

关键词 抑制性消减杂交 差异表达 功能基因DSN均一化技术 CDNA微阵列

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猪MyD88基因的原核表达 被引量：2

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作者 曾爽 陈国华 +2 位作者 崔青 房永祥 景志忠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第12期1-5,共5页

采用PCR方法从pGEM-pMyD88重组质粒中克隆了猪MyD88分子全长基因,构建了无信号肽序列的原核表达载体pET-30a-pMyD88-ED,在不同IPTG浓度和时间下进行诱导表达,利用切胶洗脱法纯化表达的融合蛋白。结果表明,在IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,... 采用PCR方法从pGEM-pMyD88重组质粒中克隆了猪MyD88分子全长基因,构建了无信号肽序列的原核表达载体pET-30a-pMyD88-ED,在不同IPTG浓度和时间下进行诱导表达,利用切胶洗脱法纯化表达的融合蛋白。结果表明,在IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为6 h时表达量达到最大,SDS-PAGE分析表明表达出约35 ku的融合蛋白,主要以包涵体的形式存在;通过切胶纯化后,融合蛋白的纯度可达90%;Western blot分析显示,表达的融合蛋白能被抗His标签的单克隆抗体识别,说明目的蛋白在大肠埃希菌中得到了成功表达。 展开更多

关键词 猪MyD88分子 原核表达 大肠埃希菌

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猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析 被引量：3

11

作者 和燕玲 房永祥 +2 位作者 陈国华 刘磊 景志忠 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第24期11450-11452,11463,共4页

[目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础。[方法]应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27～202... [目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础。[方法]应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27～202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达。[结果]经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37℃、0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105。[结论]TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原。 展开更多

关键词 猪TLR7胞外区片段 重组蛋白 抗原性

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高效液相色谱法测定白牦牛乳中VC的含量 被引量：2

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作者 和燕玲 景志忠 《中兽医医药杂志》 2009年第6期33-35,共3页

关键词 高效液相色谱法 牦牛乳 维生素含量 VC 测定 营养价值 电位滴定法 气相色谱法

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