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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达
被引量：
9
1
作者
李炯
刘艳红
+4 位作者
安芳兰
刘俊林
刘湘涛
尚佑军
殷宏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病...
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
逆转录病毒载体
口蹄疫病毒
衣壳前体基因
绿色荧光蛋白基因
BHK-21细胞
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职称材料
猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化
2
作者
郝宝成
梁剑平
+5 位作者
兰喜
刑小勇
项海涛
温峰琴
胡永浩
柳纪省
《湖北农业科学》
北大核心
2011年第15期3116-3119,共4页
为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,...
为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。
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关键词
猪戊型肝炎病毒
衣壳蛋白
CP239片段
原核表达
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职称材料
题名
逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达
被引量：
9
1
作者
李炯
刘艳红
安芳兰
刘俊林
刘湘涛
尚佑军
殷宏
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部畜禽病毒学重点开放实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期376-382,共7页
基金
国家"863计划"(2006AA10A204)
甘肃省科技攻关项目(ZGS-052-A41-0006-03)
中国农业科学院兰州兽医研究所所长基金项目
文摘
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。
关键词
逆转录病毒载体
口蹄疫病毒
衣壳前体基因
绿色荧光蛋白基因
BHK-21细胞
Keywords
retroviral vector
FMDV
capsid precursor protein gene
green fluorescent protein gene
BHK-21 cells
分类号
S852.659.61 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化
2
作者
郝宝成
梁剑平
兰喜
刑小勇
项海涛
温峰琴
胡永浩
柳纪省
机构
中国农业科学院
兰州
畜牧与兽药
研究所
/新兽药
重点
开放实验室
/甘肃省新兽药工程
重点
实验室
中国农业科学院
兰州
兽医
研究所
/
家畜
疫病
病原
生物学
国家
重点
实验室
/农业部
畜禽
病毒学
重点
开放实验室
/农业部
草食动物
疫病
重点
开放实验室
甘肃
农业
大学
动物
医
学院
出处
《湖北农业科学》
北大核心
2011年第15期3116-3119,共4页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(BRF090402)
文摘
为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。
关键词
猪戊型肝炎病毒
衣壳蛋白
CP239片段
原核表达
Keywords
swine hepatitis E virus
capsid protein
CP239 fragment
prokaryotic expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达
李炯
刘艳红
安芳兰
刘俊林
刘湘涛
尚佑军
殷宏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化
郝宝成
梁剑平
兰喜
刑小勇
项海涛
温峰琴
胡永浩
柳纪省
《湖北农业科学》
北大核心
2011
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