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口蹄疫病毒抗原位点研究进展 被引量:7
1
作者 吴海波 邵军军 常惠芸 《动物医学进展》 CSCD 2005年第9期1-4,共4页
抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫... 抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫病毒的抗原位点进行分析一直是口蹄疫病毒研究领域中的热点,该研究将有助于了解病毒的致病机理和推动新型疫苗的研制。文章对病毒的基本特性、抗原位点的研究方法和研究概况做一综述。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基本特性 抗原位点
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口蹄疫病毒细胞受体研究进展 被引量:2
2
作者 吴海波 邵军军 +1 位作者 许立场 常惠芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期70-72,共3页
关键词 病毒细胞受体 口蹄疫病毒 受体研究 DISEASE 宿主细胞 病毒感染 组织嗜性 感染途径 复制过程 疫病预防
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Asia1型口蹄疫病毒VP1基因的克隆、原核表达及纯化 被引量:4
3
作者 独军政 常惠芸 +5 位作者 丛国正 林彤 邵军军 魏小娟 刘在新 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期631-634,共4页
According to the published nucleotide sequences of the VP1 gene of foot-and-mouth disease virus serotype Asia 1 isolates, a pair of primers were designed and synthesized to clone the VP1 gene of YNBS/58 strain. PCR pr... According to the published nucleotide sequences of the VP1 gene of foot-and-mouth disease virus serotype Asia 1 isolates, a pair of primers were designed and synthesized to clone the VP1 gene of YNBS/58 strain. PCR product was cloned into pProexHTb vector, and E.coli BL21 was transformed by the recombinant plasmid pProex-VP1 for sequencing and expression .The expressed product was identified by SDS-PAGE and Western blot, and purified by Ni-NTA His.Bind resins. The results showed that the nucleotide sequence identity of VP1 gene between YNBS/58 and India93, India 97,India99, Iseral and YNAs1.1 strains is from 80.3% to 97.5% and amino acid identity is from 85.8% to 96.5%, the recombinant VP1 protein was significant at 34 ku by SDS-PAGE and Western blot, which accounted for 30% of total protein in E.coli lysates,and the recombinant protein was purified successfully. 展开更多
关键词 VP1基因 口蹄疫病毒 原核表达 al型 ASI 克隆 纯化 接触性传染病 国际兽疫局 偶蹄动物 病毒感染 畜牧业 血清型 检疫
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域多克隆抗体的制备和特性分析 被引量:4
4
作者 高闪电 常惠芸 +4 位作者 独军政 王景锋 周建华 赵建勇 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期975-978,共4页
目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒... 目的:表达口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域β6LBD,并制备兔抗β6LBD多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增整联蛋白β6LBD基因片段,经BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切后连入pGEX-4T-1原核表达载体,构建的pGEX-4T-1-β6LBD重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白。然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价,并以Western blot鉴定其特异性。结果:SDS-PAGE电泳分析显示pGEX-4T-1-β6LBD诱导后表达一Mr约为42000的GST-β6LBD融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带,用纯化GST-β6LBD免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12800以上,具有较高的特异性。结论:制备了具有高亲和性和特异性的抗猪源整联蛋白β6LBD多克隆抗体,为深入研究整联蛋白β6在口蹄疫病毒感染过程中的作用了奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合域 多克隆抗体
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:6
5
作者 李永亮 田美娜 +4 位作者 卢曾军 杨苏珍 付元芳 曹轶梅 刘在新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期296-300,共5页
用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接EL... 用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接ELISA法筛选获得6株能稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、4B1、4D7、4E11、7B2、8B11。鉴定结果显示,4B1和4E11细胞分泌IgG1,其余4株细胞分泌IgG2b;纯化后6株腹水单抗的纯度达90%以上,对3B蛋白的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;6株单抗均不与FMDV结构蛋白VP1和3D非结构蛋白发生反应;间接免疫荧光试验证明所制备的单抗能够识别3B蛋白;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存6个月后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B蛋白 单克隆抗体
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体识别的抗原表位分析 被引量:6
6
作者 赵建勇 伏小平 +3 位作者 独军政 高闪电 冯艳丽 常惠芸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第4期1583-1585,共3页
[目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱... [目的]分析测定口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白β6亚基配体结合域单克隆抗体(mAb)的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[方法]利用叠加ELISA法、间接ELISA法、硫氰酸盐洗脱法测定C2D8、B7B6、B8C9、C4C7、E7C7 5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数。[结果]5株mAb间具有相似或不同的抗原识别位点,其中C4C7与E7C7、C4C7与B8C9、E7C7与B8C9等mAb间的识别位点相似,而C4C7与B7B6、E7C7与C2D8等mAb间的识别位点不同。5株mAb C2D8、E7C7、B8C9、C4C7、B7B6的饱和值分别为1∶200、1∶400、1∶800、1∶800、1∶800,亲和力为B8C9>C4C7>B7B6≥E7C7>C2D8。[结论]分析测定了5株mAb的抗原识别位点、饱和值、亲和力常数,从而为利用mAb深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 整联蛋白 受体 单克隆抗体 抗原表位
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用protein G纯化口蹄疫病毒单克隆抗体的特性分析 被引量:3
7
作者 宋帅 林彤 +4 位作者 邵军军 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期139-142,共4页
目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱... 目的为了获得高效价和高纯度的O型口蹄疫病毒单克隆抗体。方法用O型口蹄疫乳鼠毒(LD50=10-8.5)感染免疫小鼠,按有限稀释法和ELISA方法筛选出阳性杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,所收腹水用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀,再用proteinG亲和层析柱进行亲和层析纯化单体,并用SDS-PAGE和单抗检测方法分析其纯化抗体的纯度和活性。结果经3次亚克隆获得了一株杂交瘤细胞株(10E6),抗体亚类鉴定为IgG2a;SDS-PAGE电泳显示,纯化的抗体纯度较高,只有IgG2a的重链和轻链,而没有其它杂蛋白带;单抗ELISA检测方法显示,纯化的抗体具有良好的活性,其效价为1∶102400,高于腹水效价。结论用proteinG亲和层析法获得了高纯度和高效价的单克隆抗体,将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究奠定基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 单克隆抗体 链球菌G蛋白 亲和层析
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SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VP1及其C端的表达、纯化和反应原性分析 被引量:3
8
作者 高闪电 常惠芸 +5 位作者 独军政 邵军军 丛国正 林彤 韩雪清 谢庆阁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期631-634,共4页
目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VPl基因及其C端编码区,然后将该其分别克... 目的:表达SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端,进行反应原性分析并制备多克隆抗体。方法:以SAT2型口蹄疫病毒南非地区分离株结构蛋白VPl编码区的重组克隆载体为模板,设计特异性引物,扩增VPl基因及其C端编码区,然后将该其分别克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)plysS,经IPTG诱导,以金属离子螯合层析法对表达的VPl、VP1C端融合蛋白进行纯化,经Westernblot对其反应原性进行分析。用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA方法测定抗体效价。结果:实现了SAT2型口蹄疫病毒结构蛋白VPl及其C端的高效表达,表达产物主要以包涵体的形式存在。SDS—PAGE显示纯化的目的蛋白分别在相对分子质量35000和19000处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot结果显示,纯化的VP1及其C端均可与牛SAT2型FMDV阳性血清反应,而与阴性对照血清无交叉反应。结论:用纯化的VPl及VP1C融合蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1:12800以上,具有较高的特异性。 展开更多
关键词 SAT2型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 原核表达 反应原性分析
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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达·纯化及活性检测 被引量:4
9
作者 李菁 林彤 +4 位作者 高闪电 丛国正 独军政 邵军军 常惠芸 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5248-5250,共3页
[目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3... [目的]表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1,并对其进行纯化和相关活性的检测。[方法]以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增其编码区,经酶切后与pGEX-4T-1、pPROExHTb等原核表达载体相连,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达菌株,经IPTG诱导表达,以实现VP1蛋白的表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达并对2种载体重组菌进行超声裂解,取上清和沉淀电泳,用金属螯合亲合层析法对His-VP1进行纯化。[结果]SDS-PAGE电泳分析显示pPRO-VP1诱导后目的条带为33ku,与预期结果相符;目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带;His-VP1可与A型口蹄疫病毒豚鼠灭活阳性血清发生特异性的反应。[结论]表达及纯化了具有高特异性的A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1,为深入研究结构蛋白VP1在口蹄疫病毒致病机制中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 表达及纯化
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整联蛋白αvβ3与口蹄疫病毒感染 被引量:2
10
作者 赵建勇 高闪电 +2 位作者 独军政 伏小平 常惠芸 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第9期46-48,共3页
关键词 病毒感染 整联蛋白 口蹄疫 病毒受体 细胞表面 宿主特异性 组织嗜性 蛋白聚糖
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口蹄疫病毒受体猪源β1亚基基因的克隆和分子特征 被引量:2
11
作者 高闪电 独军政 +2 位作者 常惠芸 周建华 谢庆阁 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期14-18,共5页
首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有10个潜在的糖基化... 首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有10个潜在的糖基化位点(NXTX/NXSX),2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。猪脚基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的脚基因的核苷酸序列一致性分别为99.5%,90.0%,91.8%,90.7%,90.2%,86.5%和77.4%,推导的氨基酸序列一致性分别为99.9%,93.9%,97.5%,96.7%,94.2%,92.4%和94.9%。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构,其中1~20位、729~757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 猪整联蛋白β1基因 分子特征
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A型口蹄疫病毒型特异性抗原的可溶性原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
12
作者 高闪电 常惠芸 +3 位作者 独军政 丛国正 邵军军 林彤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期821-824,共4页
目的可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体。方法以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区... 目的可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体。方法以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建可溶性原核表达载体pET-30a-OmpT-AVP1。将该重组质粒转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,以金属离子螯合层析法对可溶性表达的VP1融合蛋白进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA、Western blot和间接免疫荧光法分别对多克隆抗体进行鉴定。结果 SDS-PAGE电泳分析显示pET-30a-OmpT-AVP1重组菌经诱导后表达一Mr约为33 000的VP1融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带。Western blot分析结果显示,VP1蛋白可与豚鼠抗A型口蹄疫病毒阳性血清反应。用纯化VP1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上,具有较高的型特异性,并且可与同型FMDV细胞培养物中的病毒抗原发生反应。结论制备了具有高亲和性和特异性的兔抗A型FMDV结构蛋白VP1多克隆抗体,为A型FMDV易感动物的抗体筛查及病原鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 A型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 原核表达 可溶性 OmpT信号肽
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口蹄疫病毒受体羊源整联蛋白β6亚基配体结合域的原核表达、纯化及鉴定 被引量:1
13
作者 薛霜 独军政 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期55-58,共4页
利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHT... 利用原核细胞表达羊口蹄疫病毒(FMDV)受体整联蛋白β6亚基的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白。以含有羊整联蛋白β6亚基全长cDNA的质粒为模板,PCR扩增得到β6LBD基因片段,经酶切消化处理后与同样酶切处理的原核表达载体pPROEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRO/β6LBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达重组羊β6LBD融合蛋白。SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达并利用镍离子亲和树脂对其纯化,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot方法分析鉴定表达产物。成功构建了pPRO/β6LBD原核表达载体,实现了羊FMDV受体整联蛋白亚基β6LBD在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量(Mr)约为33 kDa,重组蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。用本试验室保存的抗FMDV受体猪源整联蛋白β6亚基LBD的单克隆抗体进行ELISA和Western blot检测,显示该单抗可与重组目的蛋白发生特异性反应,证明纯化后的蛋白与特异性抗体具有良好的特异性反应及抗原活性。为深入研究整联蛋白受体β6亚基在羊体内的分布及其在FMDV致病过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白β6亚基 配体结合域 原核表达
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口蹄疫病毒受体骆驼β1亚基基因的克隆和分子特征 被引量:2
14
作者 高闪电 独军政 +2 位作者 常惠芸 周建华 谢庆阁 《浙江农业科学》 2008年第1期112-116,共5页
首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基... 首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2 397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基化位点(NXTX/NXSX)、2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。骆驼β1基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠、鸡和猪的β1基因的核苷酸序列一致性分别为94.8%、94.8%、96.1%、94.7%、94.9%、89.9%、80.2%、95.7%,推导的氨基酸序列一致性分别为98.7%、94.8%、98.4%、97.5%、95.1%、94.1%、85.5%、98.9%。通过生物学软件分析发现β1亚基1-20位、729-757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 骆驼整联蛋白β1基因 分子特征
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口蹄疫病毒L^(pro)蛋白的致病机理
15
作者 李菁 林彤 +5 位作者 宋帅 高闪电 邵军军 丛国政 独军政 常惠芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期175-178,共4页
关键词 口蹄疫病毒 致病机理 ro蛋白 远距离传播 国际兽医局 动物疫病 传染性 发病率
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的细胞定位及组织分布
16
作者 赵建勇 常惠芸 +4 位作者 独军政 高闪电 宋帅 伏小平 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期533-537,共5页
利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的... 利用pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染CHOK1细胞,间接免疫荧光法(IFA)检测整联蛋白αvβ6在转染细胞中的表达分布。以间接免疫组化法(IHA)检测整联蛋白αvβ6在健康猪舌、唇、气管等组织的表达分布。采用抗猪源整联蛋白β6亚基的单克隆抗体作为一抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG分别作为二抗。结果表明,pcDNA3.1(+)-β6p真核表达载体稳定转染的CHOK1细胞的细胞膜及细胞质内可见致密的绿色荧光(IFA),猪舌、唇、气管等组织细胞的细胞膜及细胞质内均出现了棕黄色的特异阳性反应物,表明整联蛋白αvβ6受体广泛分布于猪体的器官组织细胞中,为深入研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 整联蛋白 细胞定位 组织分布
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口蹄疫病毒受体猪源整联蛋白αvβ6的分子特征
17
作者 高闪电 独军政 +6 位作者 常惠芸 从国正 邵军军 林彤 周建华 王光华 谢庆阁 《浙江农业科学》 2007年第5期596-600,共5页
为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编... 为研究整联蛋白αvβ6在口蹄疫病毒感染中的作用,本实验从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白αv和β6亚基的基因并将新基因β6登录到GenBank中,登录号为EF432729。猪整联蛋白β6亚基基因的编码区含有2 367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其信号肽由26个氨基酸组成,胞外域由681个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由52个氨基酸组成。β6亚基含有9个潜在的糖基化位点,3个氨基葡聚糖结合位点,1个依赖于cGMP的蛋白激酶磷酸化位点,10个蛋白激酶C磷酸化位点,2个表皮生长因子相似结构域和2个半胱氨酸丰富区。生物学软件分析发现β6亚基和αv亚基都有头部、茎部和胞浆域组成,且二亚基形成了比较复杂的三级结构,是其发挥生物学功能的结构基础。本实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 受体 猪整联蛋白αvβ6 分子特征
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亲和层析和反相层析纯化O型口蹄疫病毒单抗的比较
18
作者 宋帅 林彤 +2 位作者 邵军军 常惠芸 胡永浩 《甘肃畜牧兽医》 2009年第1期2-5,共4页
为了获得有效纯化抗体的方法,将杂交瘤细胞株(4C3)用细胞培养液扩大培养后制备腹水,所得腹水依次用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀后再分别用亲和层析和反相层析进一步纯化抗体,并用SDS-PAGE和间接酶联免疫吸附试验分析其纯化抗体的纯度和活... 为了获得有效纯化抗体的方法,将杂交瘤细胞株(4C3)用细胞培养液扩大培养后制备腹水,所得腹水依次用50%和45%的饱和硫酸铵沉淀后再分别用亲和层析和反相层析进一步纯化抗体,并用SDS-PAGE和间接酶联免疫吸附试验分析其纯化抗体的纯度和活性。结果表明,亲和层析获得了较高纯度的抗体,并且抗体活性没有丧失,反相层析获得的抗体有较好的活性,但抗体中还有微量的杂蛋白。因此亲和层析是单抗纯化的较好途径,所获得的高纯度单抗将为O型口蹄疫病毒的基础研究和应用研究提供良好的物质基础。 展开更多
关键词 亲和层析 反相层析 O型口蹄疫病毒 单抗
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口蹄疫疫苗库的发展 被引量:1
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作者 郎一飞 高闪电 常惠芸 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期929-932,共4页
口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由FMD病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的烈性传染病,患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡,水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强,造成的经济损失严重,世界动物卫生组织(OIE)将该... 口蹄疫(Foot and mouth disease,FMD)是由FMD病毒(FMDV)引起的偶蹄动物的烈性传染病,患病动物的口、舌、唇、蹄、乳房等部位发生水泡,水泡破溃后形成烂斑。由于该病传染性强,造成的经济损失严重,世界动物卫生组织(OIE)将该病列为实时通报的传染病之一。 展开更多
关键词 口蹄疫 世界动物卫生组织 烈性传染病 苗库 偶蹄动物 FMD病毒 经济损失 传染性
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猪A型口蹄疫病毒特异性IgA抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用
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作者 王园园 潘丽 +1 位作者 吕建亮 张中旺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1818-1824,共7页
为建立一种检测口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)特异性IgA抗体的检测方法,本研究以原核表达系统表达纯化的FMDV结构蛋白VP1作为包被抗原,以鼠抗猪IgA单克隆抗体为二抗,辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG抗体为三抗,建立猪A型F... 为建立一种检测口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)特异性IgA抗体的检测方法,本研究以原核表达系统表达纯化的FMDV结构蛋白VP1作为包被抗原,以鼠抗猪IgA单克隆抗体为二抗,辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG抗体为三抗,建立猪A型FMDV特异性IgA抗体间接ELISA检测方法。确定抗原包被浓度为3.50μg/mL,二抗与三抗的最佳稀释度为1∶10 000,二抗和三抗作用时间均为30min。所建立的方法与抗猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒等病原的特异性IgA抗体间无交叉反应,A型口蹄疫感染样品的阳性检出率在90%以上,批内和批间重复性试验的变异系数介于3.16%~9.76%。该方法为监测FMDV特异性IgA抗体水平变化规律及猪的黏膜免疫效果评价及口蹄疫的早期诊断提供了一种新方法。 展开更多
关键词 口蹄疫 黏膜免疫 IGA 间接ELISA
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