T细胞表位预测及其在抗口蹄疫病毒疫苗研发中的应用研究进展 被引量：1

1

作者 陈启伟 王永录 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期19-23,共5页

随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文阐述了T细胞表位预测的理论和方法... 随着分子免疫学研究的不断发展,对T淋巴细胞免疫分子机制的阐释,大量T细胞表位信息以及功能基因组学资料的积累,使得基于数据驱动的预测T细胞表位的研究受到重视,可能成为疫苗研发的重要工具之一。本文阐述了T细胞表位预测的理论和方法及其在抗口蹄疫病毒疫苗研发中的应用,并讨论了未来的研究方向。 展开更多

关键词 T细胞 表位预测 疫苗 口蹄疫病毒

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同源重组介导的重组病毒研究进展 被引量：3

2

作者 赵银龙 李健 +6 位作者 朱海霞 颜新敏 赵志荀 吴健 张强 穆晓峰 吴国华 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第11期1-6,共6页

病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行... 病毒同源重组是以同源臂为基础的将目的基因整合到病毒基因组中的技术。将表达盒串联到转移载体,通过同源重组构建重组病毒从而实现病毒基因改造、外源基因表达以及重组活载体疫苗制备等。就重组病毒的优缺点、构建原理及应用进展进行了概述,对重组病毒构建的难点进行了分析,全面系统地阐述了重组病毒的构建模式,针对基因框(启动子-报告基因-目的基因-调控元件-终止子)给出具体的构建方案,同时对其未来发展前景进行了展望,以期为今后重组病毒的构建提供理论基础。 展开更多

关键词 同源重组 表达盒 转移载体 重组病毒 病毒载体

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副猪嗜血杆菌生物被膜形成与功能的研究进展 被引量：3

3

作者 马艳平 刘永生 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期244-246,共3页

副猪嗜血杆菌是存在于健康猪上呼吸道的一种致病菌,也是格拉泽氏病的病原。副猪嗜血杆菌生物膜的形成与其致病力的变化和造成慢性感染有直接关系,研究副猪嗜血杆菌生物膜的形成及功能对阐明致病菌的慢性感染和抗生素的耐受性具有重要的... 副猪嗜血杆菌是存在于健康猪上呼吸道的一种致病菌,也是格拉泽氏病的病原。副猪嗜血杆菌生物膜的形成与其致病力的变化和造成慢性感染有直接关系,研究副猪嗜血杆菌生物膜的形成及功能对阐明致病菌的慢性感染和抗生素的耐受性具有重要的科学意义。本文就副猪嗜血杆菌生物被膜的形成机制、影响因素、功能、及其研究方法进行综述。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 生物被膜 形成机制 功能

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RNA干扰及其在口蹄疫病毒防御中的应用 被引量：1

4

作者 杨生海 殷宏 +3 位作者 刘永生 孙彩琴 陈豪泰 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期10-13,共4页

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种真核生物细胞在转录后引发基因沉默的分子机制。目前,RNAi的分子机制及其功能仍然有待更加细致地阐明,但作为一种反向遗传学手段已经在基因功能研究中广泛运用,并已作为一种治疗策略运用于人类抵... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种真核生物细胞在转录后引发基因沉默的分子机制。目前,RNAi的分子机制及其功能仍然有待更加细致地阐明,但作为一种反向遗传学手段已经在基因功能研究中广泛运用,并已作为一种治疗策略运用于人类抵抗重大遗传性疾病和病毒性疾病的研究当中。本研究将对RNAi的分子机制及其在抗口蹄疫病毒功能方面的研究作出简要的概括和展望。 展开更多

关键词 RNA干扰 小干扰RNA 病毒防御 口蹄疫

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腺病毒在动物口蹄疫防治中的研究进展 被引量：1

5

作者 王猛 刘永生 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第2期240-241,共2页

由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治... 由于腺病毒载体转导目的基因具有高效率、低致病性、高滴度以及在体内不整合到动物宿主细胞染色体等优点,已被认为是最有效的转基因载体之一,成为重组疫苗和基因治疗研究的热点。本文就腺病毒载体的生物学特性、研究进展及在口蹄疫防治中发挥的重要作用进行综述。 展开更多

关键词 腺病毒载体 重组疫苗 SHRNA 干扰素 口蹄疫

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山羊痘病毒A11R基因的克隆及生物信息学分析

6

作者 吴健 朱海霞 +8 位作者 赵志荀 颜新敏 赵银龙 吴娜 李健 张志东 张强 李影 吴国华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期158-163,共6页

为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基... 为了分析绵羊痘病毒A11R蛋白质的分子特征,提取了山羊痘病毒古浪分离株(GL)的基因组DNA,设计引物进行PCR扩增,将PCR产物连接到p GEM-T Easy载体后转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆进行序列测定,利用生物信息学软件对A11R基因序列进行预测分析。结果显示,A11R基因序列由954个核苷酸组成的开放阅读框,编码317个氨基酸残基组成的多肽,蛋白质分子质量的理论值为36 091.7,理论等电点为5.14。A11R蛋白质的二级结构中,α螺旋占29.02%,β折叠占10.41%,其余60.57%为无规则卷曲。多序列比对分析显示,不同羊痘病毒分离株A11R序列高度保守,同源性在98%以上。进化树分析结果显示,GL株与NK株、TU株以及SA株在一个分支,说明它们之间具有较近的亲缘关系,上述研究结果为进一步研究A11R蛋白质的生物学功能和羊痘病毒早期蛋白质分子间相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 羊痘病毒 A11R 基因克隆 生物信息学

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不同ELISA试剂盒检测感染猪口蹄疫病毒3ABC抗体效果比较 被引量：2

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作者 王文莉 刘华南 +6 位作者 卢炳州 赵俊皓 徐守兴 胡永浩 郑海学 张克山 刘湘涛 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期39-44,共6页

为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗... 为更准确研究口蹄疫病毒(FMDV)感染猪非结构蛋白抗体变化规律,选取3种不同的试剂盒,分别检测接种O型口蹄疫病毒猪FMDV非结构蛋白3ABC抗体。试验数据表明,人工感染O型口蹄疫病毒猪最早在感染后第5天检测到非结构蛋白抗体,至第7天3ABC抗体全部转为阳性;3种试剂盒检测最早3ABC抗体与症状对应关系有差异,每两种商业试剂盒呈现不同程度的相关性。其中A试剂盒显示出最大的灵敏度,而B试剂盒显示最高的特异性,C试剂盒的敏感性依可疑样品的处理方式而变化,因此对3种试剂盒进行比较,发现A试剂盒更稳定,更适合于猪FMDV非结构蛋白抗体检测。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 3ABC抗体 酶联免疫吸附试验 猪

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细胞凋亡信号传导通路的研究进展 被引量：18

8

作者 刘萍 丛国正 +3 位作者 独军政 邵军军 林彤 常惠芸 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第3期715-717,726,共4页

细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活... 细胞凋亡是机体维持自身稳定的一种基本生理机制,是有许多基因产物及细胞因子参与的一种有序的细胞自我消亡形式。细胞凋亡发生过程的启动和进行受到精确调控,具有独特而复杂的信号系统。各种凋亡信号通过信号传导通路传至细胞内,激活靶分子而产生细胞效应,引发细胞凋亡。一般认为,细胞凋亡存在3条主要通路:线粒体通路、内质网通路和死亡受体通路,各通路间互相联系,共同调节细胞凋亡。 展开更多

关键词 细胞凋亡 信号传导 死亡受体 线粒体 内质网

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防御素临床应用现状的研究进展 被引量：1

9

作者 马艳平 刘永生 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期26-28,共3页

防御素是广泛存在于动植物及人体内的一类不含糖链的碱性阳离子多肽,具有广谱抗菌活性。在杀灭细菌、对抗癌症、杀伤病毒、转基因工程及食品方面有重要作用。本文从防御素的结构、生物学活性、临床应用等方面进行综述,从而为临床医学提... 防御素是广泛存在于动植物及人体内的一类不含糖链的碱性阳离子多肽,具有广谱抗菌活性。在杀灭细菌、对抗癌症、杀伤病毒、转基因工程及食品方面有重要作用。本文从防御素的结构、生物学活性、临床应用等方面进行综述,从而为临床医学提供参考。 展开更多

关键词 防御素 结构 生物学活性 临床应用

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细胞免疫检测方法研究进展 被引量：2

10

作者 刘新生 王永录 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第1期246-250,共5页

细胞免疫在机体的免疫过程中发挥着重要的作用,掌握细胞免疫的各个过程对全面了解机体免疫反应、监测抗原变异、正确理解病原体致病的分子机制、自身免疫性疾病的治疗以及疫苗的研制等都具有重要的意义。笔者从体内功能检测、体外表型... 细胞免疫在机体的免疫过程中发挥着重要的作用,掌握细胞免疫的各个过程对全面了解机体免疫反应、监测抗原变异、正确理解病原体致病的分子机制、自身免疫性疾病的治疗以及疫苗的研制等都具有重要的意义。笔者从体内功能检测、体外表型检测、体外功能检测3个方面系统地介绍了目前在细胞免疫检测研究中常用的检测方法,并对这些方法的优缺点进行了分析比较。 展开更多

关键词 细胞免疫 检测 方法

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C型口蹄疫结构蛋白VP3的原核表达及生物活性

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作者 刘文倩 王猛 +2 位作者 张奕强 刘永生 张杰 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第4期38-40,共3页

利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Mod... 利用PCR扩增技术,以本实验室构建的C型口蹄疫pMD-P1重组质粒为模板扩增C型口蹄疫VP3片段,并连接到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建阳性质粒pGEX-VP3并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。使用不同IPTG浓度进行诱导,收集菌液进行SDS-PAGE。使用Model 422 Electro-Eluter切胶回收目的蛋白,并进行Western-Blotting分析。结果得到50 ku左右目的条带,证实融合蛋白VP3大肠杆菌中得到以包涵体形式表达,且使用切胶回收后的蛋白能被C型口蹄疫阳性血清识别,具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 C型口蹄疫 结构蛋白VP3 原核表达 生物活性

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口蹄疫A型病毒AF/72株特异性鉴定及其豚鼠标准血清的制备

12

作者 杜进鑫 王永录 +5 位作者 张永光 方玉珍 蒋守田 吕建亮 潘丽 刘力宽 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第4期253-256,共4页

用口蹄疫A型病毒AF/72株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为108.0/ml;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他7株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血... 用口蹄疫A型病毒AF/72株的细胞毒AF/72/MF6/BF12,经测定其TCID50为108.0/ml;经RT-PCR获得其VP1基因序列,并与GenBank中的其他7株口蹄疫A型病毒株比对,同源性均大于85%;经间接夹心ELISA测定,OD值均大于0.2,且该毒仅能被口蹄疫A型标准血清中和,具有型特异性;经紫外分光光度法测定其146S含量,均值为189 ng/ml,远大于22 ng/ml的国际标准。将此细胞毒与弗氏佐剂联合制成灭活疫苗免疫豚鼠后分离血清,经无菌检验和外源病毒检验,纯净性达到兽用生物制品标准要求;经ELISA检测此血清的抗体滴度、原血清、强阳性血清和弱阳性血清的中和效价均远小于1∶45。参照标准的要求,确定强阳性血清为口蹄疫A型病毒株AF/72的参考血清。 展开更多

关键词 FMD 标准毒株 血清

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猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

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作者 郝宝成 梁剑平 +5 位作者 兰喜 刑小勇 项海涛 温峰琴 胡永浩 柳纪省 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第15期3116-3119,共4页

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,... 为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。 展开更多

关键词 猪戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 CP239片段 原核表达

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家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：4

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作者 臧金凤 尚佑军 +5 位作者 陈妍 吴锦艳 王光祥 张志东 刘湘涛 孙继国 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期100-104,111,共6页

利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以... 利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立布鲁氏菌病抗体ELISA检测方法。结果表明,通过反应条件优化确定抗原的适宜包被浓度为5μg/mL,血清适宜稀释度为1∶20,二抗的适宜工作浓度为1∶20 000;通过敏感性试验结果表明,当血清稀释至1∶1 280时,仍检测为阳性;通过批间、批内重复性试验,变异系数均小于10%,表明本检测方法具有较高的重复性。用该方法对100份临床样本进行检测,并与试管凝集试验(SAT)进行相符性验证,符合率为94%,为布鲁氏菌病临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 BP26蛋白 间接酶联免疫吸附试验

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羊蜱病综合防控措施 被引量：4

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作者 张克山 尚佑军 刘湘涛 《养殖与饲料》 2010年第12期40-41,共2页

关键词 蜱病 防控措施 羊 综合防控 商城县 信阳市 河南省 综合征

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