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重组日本血吸虫抱雌沟蛋白rGST-SjGCP配伍GEL 02或ISA 201佐剂的免疫效果比较 被引量：1
1
作者 石帅锋 贾静 +4 位作者 郑明政 张倩 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期63-70,共8页
为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分... 为评估日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及其与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后的免疫应答,本研究通过构建重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达,纯化融合蛋白rGST-SjGCP,用Western blot检测其抗原性,再将其分别与2种佐剂配伍后免疫小鼠评估其免疫效果,用ELISA检测特异性抗体水平。结果显示:重组质粒pGEX-4T-1/SjGCP在大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后得到约100 kDa的融合蛋白rGST-SjGCP;rGST-SjGCP分别与GEL 02和ISA 201佐剂配伍后免疫小鼠,均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,分别是佐剂对照组的7.07倍(P<0.001)和6.86倍(P<0.001),特异性抗体亚型IgG1/IgG2a的比值与佐剂对照组相比分别升高了13.68%(P<0.05)和14.71%(P=0.3468);日本血吸虫感染小鼠血清和融合蛋白rGST-SjGCP免疫小鼠血清均可特异性识别目的蛋白,表明rGST-SjGCP具有良好的抗原性;与PBS组相比,rGST-SjGCP与GEL 02佐剂配伍后在小鼠中诱导了25.87%(P<0.01)的减虫率和27.36%(P<0.05)的肝脏减卵率,rGST-SjGCP与ISA 201佐剂配伍后在小鼠中未诱导产生差异显著的减虫率和肝脏减卵率。结果表明,rGST-SjGCP结合GEL 02佐剂可诱导偏向Th2型免疫应答,具有免疫保护效果。本研究为评价日本血吸虫抱雌沟蛋白作为疫苗候选抗原的潜力及疫苗佐剂的选择提供了依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抱雌沟蛋白 佐剂 疫苗
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日本血吸虫病肝纤维化的研究进展 被引量：2
2
作者 钟昊然 金亚美 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期177-183,共7页
血吸虫病是一种严重危害人畜健康和社会经济发展的人兽共患寄生虫病。宿主感染日本血吸虫后,沉积于肝脏的虫卵分泌可溶性虫卵抗原(SEA)主要刺激肝星状细胞(HSC)产生免疫应答反应,导致细胞外基质(ECM)过度沉积,最终引起肝纤维化,造成宿... 血吸虫病是一种严重危害人畜健康和社会经济发展的人兽共患寄生虫病。宿主感染日本血吸虫后,沉积于肝脏的虫卵分泌可溶性虫卵抗原(SEA)主要刺激肝星状细胞(HSC)产生免疫应答反应,导致细胞外基质(ECM)过度沉积,最终引起肝纤维化,造成宿主严重的病理损害。对于血吸虫病晚期患者,即使进行了彻底的杀虫治疗,肝纤维化仍会发展、恶化,而目前尚无有效针对肝纤维化的治疗策略,因此进行肝纤维化的机制研究将对血吸虫病的防治起到积极作用。本文从日本血吸虫病肝纤维化的形成与调节、日本血吸虫病肝纤维化的诊断与治疗等方面进行综述。 展开更多
关键词 日本血吸虫 肝纤维化 发病机制 信号通路 诊断与治疗
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日本血吸虫带电多泡体蛋白5的生物学特性研究 被引量：1
3
作者 张旻 傅志强 +1 位作者 林矫矫 洪炀 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期764-770,共7页
目的克隆、表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)带电多泡体蛋白5(CHMP5),并对其生物学特性进行研究。方法利用PCR扩增S.japonicum CHMP5基因目的片段,构建重组质粒pET28a(+)-CHMP5,并对该基因进行生物信息学分析。利用... 目的克隆、表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.japonicum)带电多泡体蛋白5(CHMP5),并对其生物学特性进行研究。方法利用PCR扩增S.japonicum CHMP5基因目的片段,构建重组质粒pET28a(+)-CHMP5,并对该基因进行生物信息学分析。利用荧光定量PCR检测CHMP5在不同时期虫体中的转录水平。对体外表达的重组CHMP5蛋白进行纯化与质谱鉴定,并通过Western blotting检测其反应原性。利用免疫组化实验分析CHMP5在虫体中的分布。以小鼠为动物模型,评估重组CHMP5蛋白抗日本血吸虫病的免疫保护效果。结果S.japonicum CHMP5的开放阅读框为675 bp,编码224个氨基酸,具有6个B细胞抗原表位;主要定位于S.japonicum虫体的体被上。CHMP5基因在35 d和42 d虫体中的转录水平高于其它检测时期,且42 d雌虫中的转录水平约是42 d雄虫的3倍。克隆表达的重组CHMP5蛋白其理论分子量约为29 kDa,具有较好的反应原性;用其免疫小鼠24 d,即可使小鼠产生较高水平的IgG抗体,并最终诱导产生18.96%的减虫率和42.98%的肝脏减卵率。结论成功克隆、表达了S.japonicum体被蛋白CHMP5,其在不同发育时期虫体中均有表达,获得的重组CHMP5蛋白可诱导小鼠产生部分的免疫保护效果,为深入探讨S.japonicum CHMP5的生物学功能提供了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 带电多泡体蛋白5 转录水平 组织定位 免疫保护
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HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性分析 被引量：2
4
作者 钟昊然 侯玲 +4 位作者 桂祥 吕荣雪 刘金明 古少鹏 金亚美 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3609-3620,共12页
旨在探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性,本研究将BALB/c小鼠随机分为空白对照组(n=10),感染后4周组、6周组和HMGB1抑制剂组(n=5),进行血常规及生化检测,观察肝病理学及Masso... 旨在探究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)与日本血吸虫病肝炎症和纤维化的相关性,本研究将BALB/c小鼠随机分为空白对照组(n=10),感染后4周组、6周组和HMGB1抑制剂组(n=5),进行血常规及生化检测,观察肝病理学及Masson染色情况、荧光定量PCR检测HMGB 1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的转录水平。结果显示:感染后4周,小鼠谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、肝组织HMGB 1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和TNF-α的转录水平均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);感染后6周,小鼠WBC、Neu、Mon、Eos、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和ALT极显著升高(P<0.01),肝组织HMGB 1、IL-1β、TNF-α、IL-6、IFN-γ、α-SMA、Col1α1、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的转录水平均显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);感染后6周小鼠肝虫卵聚积处伴有炎性细胞浸润和胶原纤维增生;HMGB1抑制剂可显著降低小鼠血清ALT值和肝组织HMGB 1、α-SMA、TGF-β1、IL-6和TNF-α的转录水平(P<0.05)。综上表明,HMGB1与日本血吸虫病肝炎症和纤维化具有一定相关性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 肝纤维化 炎症 高迁移率族蛋白B1
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日本血吸虫PHB1的克隆、表达及其免疫保护效果评估
5
作者 张旻 杨珊珊 +5 位作者 张燕 周思含 黄明月 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第3期138-145,共8页
为了探讨日本血吸虫抗增殖蛋白1(SjPHB1)的免疫保护潜力,应用PCR技术扩增SjPHB1基因,克隆至pMD19-T克隆载体,对其进行测序及生物信息学分析;然后构建pET32a(+)-SjPHB1重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对重组菌进行鉴定... 为了探讨日本血吸虫抗增殖蛋白1(SjPHB1)的免疫保护潜力,应用PCR技术扩增SjPHB1基因,克隆至pMD19-T克隆载体,对其进行测序及生物信息学分析;然后构建pET32a(+)-SjPHB1重组表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,对重组菌进行鉴定、诱导表达,并纯化重组蛋白;再利用Western blot检测重组蛋白的反应原性;最后以小鼠为动物模型,评估重组蛋白抗日本血吸虫病的免疫保护效果。结果显示:SjPHB1基因ORF序列为825 bp,编码274个氨基酸,具有2个优势辅助T细胞抗原表位和6个优势B细胞抗原表位;rSjPHB1以包涵体的形式表达,分子量约为47 kDa,能被anti-His的小鼠血清、人工感染日本血吸虫的小鼠阳性血清特异性识别,表明获得正确表达;该重组蛋白能被免疫小鼠血清识别,具有良好的反应原性;rSjPHB1刺激小鼠产生了较高水平的特异性IgG抗体,但未诱导产生显著的减虫率和肝脏减卵率。本研究结果为进一步探讨SjPHB1基因的生物学特性提供了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抗增殖蛋白1 克隆 表达 免疫保护效果
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日本血吸虫p53融合蛋白的表达及免疫保护效果评价 被引量：1
6
作者 张倩 杨珊珊 +5 位作者 何静 黄明月 柴淑梅 洪炀 林矫矫 傅志强 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第1期41-47,共7页
为评估日本血吸虫p53(Sjp53)蛋白的免疫保护效果,利用PCR扩增Sjp53基因,构建重组表达质粒pColdⅠ-Sjp53,并在大肠杆菌(E. coli)中诱导表达,用Western blot检测其免疫原性。将融合表达蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,ELISA检测其特异性... 为评估日本血吸虫p53(Sjp53)蛋白的免疫保护效果,利用PCR扩增Sjp53基因,构建重组表达质粒pColdⅠ-Sjp53,并在大肠杆菌(E. coli)中诱导表达,用Western blot检测其免疫原性。将融合表达蛋白免疫小鼠评估其免疫保护效果,ELISA检测其特异性抗体水平。结果扩增到Sjp53基因2883 bp的编码区,构建的重组表达质粒pColdⅠ-Sjp53可在大肠杆菌中诱导表达并纯化得到约111 kDa的融合蛋白r Sjp53。应用r Sjp53结合ISA206佐剂免疫BALB/c鼠,可诱导高水平的特异IgG抗体。免疫血清可识别r Sjp53和日本血吸虫成虫抗原的相应条带,本研究表明r Sjp53具有良好的抗原性。r Sjp53在小鼠日本血吸虫病免疫保护试验中诱导了显著的肝脏减卵率,为35.34%。本研究结果为进一步研究日本血吸虫p53基因的功能提供了理论基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 Sjp53 表达 免疫保护
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大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶的表达纯化及多克隆抗体制备
7
作者 何宇婷 郭晴晴 +7 位作者 岳永程 贾静 韩艳辉 周岩 卢丽丹 唐文强 洪炀 傅志强 《中国动物传染病学报》 2025年第5期150-157,共8页
片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能... 片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能酶。本研究对大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(FgTGR)进行了克隆、表达及纯化,并制备其多克隆抗体。通过PCR方法扩增了含开放阅读框(ORF)的FgTGR序列与含硒蛋白序列的FgTGR序列(FgTGRsec),分别构建了克隆质粒pMD19T-FgTGR和表达质粒pET28a(+)-FgTGRsec。将pET28a(+)-FgTGRsec单独转入BL21(DE3)感受态细胞后进行诱导表达,此外,将pET28a(+)-FgTGRsec与pSUABC质粒共同转入BL21(DE3)感受态细胞后进行表达,并对表达后的这两种重组蛋白分别进行纯化。以纯化的重组FgTGR蛋白(rFgTGR)作为免疫抗原对BALB/c小鼠进行皮下免疫,制备多克隆抗体。FgTGR ORF为1920 bp,编码639个氨基酸,理论分子量约为70 kDa,FgTGRsec基因片段为1968 bp,编码656个氨基酸,表达的重组蛋白理论分子量约为72 kDa,两者在大肠杆菌中表达的重组蛋白在蛋白电泳结果中均符合预测大小。成功制备了针对rFgTGR的多克隆抗体,将该抗体1∶400稀释后作为蛋白免疫印迹实验的一抗,可成功地检测到rFgTGRsec条带。本研究成功表达了含硒蛋白和不含硒蛋白的重组FgTGR蛋白,制备了针对FgTGR蛋白的多克隆抗体,为FgTGR的酶动力学研究及其抑制物的筛选提供了基础。 展开更多
关键词 大片形吸虫 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 表达纯化 多克隆抗体
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