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携带PCV-2 ORF2的感染性PRRSV克隆在Marc-145细胞表达的研究 被引量:1
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作者 郑海红 张可煜 +1 位作者 周艳 袁世山 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期1-6,共6页
为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)删除外源基因的机制,以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,构建在PRRSV全长基因组上同时包含其Nsp2区域缺失108nt及其ORF1与ORF2间插入猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2的全长cDNA pDCPV,... 为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)删除外源基因的机制,以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,构建在PRRSV全长基因组上同时包含其Nsp2区域缺失108nt及其ORF1与ORF2间插入猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2的全长cDNA pDCPV,将pDCPV转染Marc-145细胞,获得拯救病毒vDCPV。鉴定vDCPV的遗传稳定性发现,vDCPV比先前发表的只在PRRSV ORF1与ORF2间插入PCV-2ORF2获得的拯救病毒vCPV更具有遗传稳定性,这提示PRRSV删除外源序列的最主要机制是插入外源序列后导致基因组过长,由此可能影响N蛋白与基因组作用及其他结构蛋白包装过程。IFA结果显示,vDCPVP能微弱表达PCV-2cap蛋白。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 外源基因表达 遗传稳定性 删除外源基因机制
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猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF4/ORF5基因区间的反向遗传操作:插入外源序列特性研究
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作者 丛雁方 张可煜 +5 位作者 高飞 韦祖樟 郑浩 童光志 袁世山 郑海红 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第6期16-22,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF4/ORF5基因间隔区有10个核苷酸(nucleotide,nt),为了探索ORF4/ORF5基因间隔区作为外源基因插入靶点的可行性,本研究通过突变PCR技术,获得一系列O... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF4/ORF5基因间隔区有10个核苷酸(nucleotide,nt),为了探索ORF4/ORF5基因间隔区作为外源基因插入靶点的可行性,本研究通过突变PCR技术,获得一系列ORF4/ORF5间在不同位置插入不同碱基数及特定序列的突变体,随后进行了病毒拯救和复制分析。结果表明,在ORF4/5的10 nts间隔序列之前至少可插入13 nts;在间隔序列之后只能允许3 nts的插入;间隔序列之间能允许至少18 nts的插入,但允许插入的序列具有特异性,由此,暗示ORF4/5允许插入的外源序列与插入位置有关。本研究获得的诸多突变病毒为进一步研制PRRSV基因标识疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF4 ORF5基因间隔区 外源序列 病毒感染性
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蛹虫草多糖对注射环磷酰胺小鼠抗氧化功能的影响 被引量:9
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作者 王米 王宵旸 +5 位作者 张丽芳 费陈忠 张可煜 王春梅 杨锐乐 薛飞群 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3251-3256,共6页
试验旨在阐明蛹虫草多糖(CMP)对小鼠抗氧化活性的影响。选取90只雄性 BALB/c 小鼠,体重18-20 g,随机分为6组,3个 CMP 组(低、中、高 CMP 组),模型对照组(CY 组)、阳性对照组(PC 组)及空白对照组(BC组)各1个。CMP 组和 CY 组... 试验旨在阐明蛹虫草多糖(CMP)对小鼠抗氧化活性的影响。选取90只雄性 BALB/c 小鼠,体重18-20 g,随机分为6组,3个 CMP 组(低、中、高 CMP 组),模型对照组(CY 组)、阳性对照组(PC 组)及空白对照组(BC组)各1个。CMP 组和 CY 组分别腹腔注射80 mg/kg 环磷酰胺,连续3 d,然后3个 CMP 组分别灌胃给予17.5、35.0、70.0 mg/kg 体重的 CMP,BC 组和 CY 组给予生理盐水,PC 组灌胃给予70 mg/kg 体重的 CMP,持续18 d。于最后一次给药24 h 后,采集小鼠内脏,测定心脏、肝脏及肾脏匀浆液中 T-AOC、MAD、CAT、SOD 和 GSH-Px 水平。结果显示,与 CY 组相比,3个 CMP 处理组小鼠内脏匀浆液中的 SOD 和 T-AOC 活性均极显著增加(P 〈0.01),MDA 水平极显著降低(P 〈0.01);低剂量 CMP 组心脏 CAT 无显著变化(P 〉0.05),中、高剂量 CMP 组心脏 CAT 水平分别显著(P 〈0.05)、极显著(P 〈0.01)提高;除低剂量 CMP 组肝脏 GSH-Px 活性显著增加(P 〈0.05)外,其余 CMP 组内脏 GSH-Px 活性均极显著增加(P 〈0.01)。本试验中 CMP 可以有效提高小鼠心脏、肝脏及肾脏的抗氧化活性,这为抗氧化新药的研发提供了借鉴。 展开更多
关键词 蛹虫草多糖 环磷酰胺 抗氧化活性 小鼠
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蛹虫草多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响 被引量:7
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作者 王米 王霄阳 +7 位作者 张丽芳 徐斌武 杨锐乐 费陈忠 张可煜 郑文丽 王春梅 薛飞群 《中国家禽》 北大核心 2017年第7期58-62,共5页
为研究蛹虫草多糖(CMP)对鸡新城疫苗免疫效果的影响,将200只14日龄雏鸡随机分为5组,除空白对照组(BC)外,均接种新城疫疫苗,28日龄第二次接种。第一次接种疫苗的同时,三个CMP40组鸡分别肌肉注射低、中、高浓度的多糖,免疫对照组(VC)和BC... 为研究蛹虫草多糖(CMP)对鸡新城疫苗免疫效果的影响,将200只14日龄雏鸡随机分为5组,除空白对照组(BC)外,均接种新城疫疫苗,28日龄第二次接种。第一次接种疫苗的同时,三个CMP40组鸡分别肌肉注射低、中、高浓度的多糖,免疫对照组(VC)和BC组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d。在第1次接种后的第7(D7)、14(D14)、21(D21)、28(D28)、35(D35)和42(D42)天采血,分别用MTT法和血凝抑制(HI)试验测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价变化,在D14、D21和D28用ELISA测定血清IL-4和IFN-γ浓度。结果显示,CMP40L组在所有时间点的A570值和血清抗体效价显著高于VC组和BC组(P<0.05);低剂量的CMP40发挥佐剂性能的效果最好,同时可促进机体对IFN-γ和IL-4的分泌。 展开更多
关键词 蛹虫草多糖 血清抗体 淋巴细胞增殖 细胞因子 新城疫
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蛹虫草多糖对鸡脾脏淋巴细胞的影响 被引量:6
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作者 王米 杨锐乐 +6 位作者 张丽芳 张赛奇 孟新宇 张可煜 费陈忠 薛飞群 胡元亮 《中国家禽》 北大核心 2014年第5期20-23,共4页
试验将7种浓度蛹虫草多糖(CMP)单独或与刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖(A570值)的变化;将5种浓度的CMP 40%乙醇提取物(CMP40)、CMP 50%乙醇提取物(CM... 试验将7种浓度蛹虫草多糖(CMP)单独或与刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)同时加入鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖(A570值)的变化;将5种浓度的CMP 40%乙醇提取物(CMP40)、CMP 50%乙醇提取物(CMP50)分别与ConA加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ的含量.结果显示,CMP在31.25~2 000 μg/mL时,CMP40+ConA组的A570值显著高于ConA对照组;CMP在31.25~500μg,/mL时,CMP50+ConA组A570值显著高于ConA对照组,CMP40+LPS组、CMP50+LPS组的A570值显著高于LPS对照组;CMP40在125~1 000μg/mL时、CMP50在500 μg/mL时,各多糖组的A570值显著高于细胞对照组;CMP40和CMP50在250~1 000 μg/mL时,各多糖组的IL-2和IFN-γ浓度显著高于对照组.结果表明,CMP40和CMP50在合适的剂量能单独或协同ConA、LPS刺激鸡的T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫能力. 展开更多
关键词 蛹虫草多糖 鸡脾脏淋巴细胞 增殖 白细胞介素-2 Γ-干扰素
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硫酸化酵母葡聚糖对鸡淋巴细胞的影响 被引量:2
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作者 王米 张丽芳 +6 位作者 徐斌武 杨锐乐 雷娜 费陈忠 王宵旸 张可煜 薛飞群 《中国家禽》 北大核心 2016年第18期22-25,共4页
为研究硫酸化酵母葡聚糖(SCG)对鸡细胞免疫的影响,将7种浓度SCG单独或与Con A、LPS加入到鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化;将5种浓度的SCG分别与Con A加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h... 为研究硫酸化酵母葡聚糖(SCG)对鸡细胞免疫的影响,将7种浓度SCG单独或与Con A、LPS加入到鸡脾脏淋巴细胞的培养体系中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化;将5种浓度的SCG分别与Con A加入到鸡脾淋巴细胞的培养体系中,培养24 h后收集细胞培养上清液,测定IL-2和IFN-γ的含量。结果显示,SCG浓度在在250-2 000μg/m L时,SCG+Con A、SCG各剂量组随着多糖浓度的增加其A570值先增加后降低(P〈0.05);SCG+LPS各剂量组的A570随着多糖浓度的增加而降低,2 000μg/m L剂量组显著低于其他三组(P〈0.05);均具有显著的量效关系。SCG浓度在62.25-1 000μg/m L时,多糖组脾脏淋巴细胞体外培养上清液中IL-2与IFN-γ浓度,随着多糖浓度的增加其促进淋巴细胞分泌细胞因子的能力先增加后降低,具有明显量效关系;且均在250μg/m L时效果最好。结果表明,SCG在合适剂量能单独或协同Con A、LPS刺激鸡T、B淋巴细胞增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,从而增强鸡的细胞免疫。 展开更多
关键词 硫酸化酵母葡聚糖 鸡脾脏淋巴细胞 增殖 IL-2 IFN-Γ
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