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日本血吸虫钙网质蛋白活化宿主巨噬细胞的初步研究
1
作者
马丽贞
李丹丹
+4 位作者
苑纯秀
艾敏
史晓娜
塔娜
冯新港
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2016年第2期47-52,共6页
为研究日本血吸虫钙网质蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,Sj CRT)活化小鼠巨噬细胞的功能,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统所表达的真核重组的Sj CRT蛋白与巨噬细胞共培养72 h,采用流式细胞术检测巨噬细胞表面趋化因子受...
为研究日本血吸虫钙网质蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,Sj CRT)活化小鼠巨噬细胞的功能,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统所表达的真核重组的Sj CRT蛋白与巨噬细胞共培养72 h,采用流式细胞术检测巨噬细胞表面趋化因子受体CCR7的表达。收集Sj CRT蛋白刺激72 h后的巨噬细胞,抽提RNA并反转录为c DNA,利用RT-PCR检测环加氧酶(cyclooxygenase,COX-2)、磷脂酶A2(phospholipases A2,PLA2)、TNF-α和IL-1β基因的表达。Sj CRT与巨噬细胞共孵育72 h后收集上清,ELISA检测上清中TNF-α的含量,Griess法测上清中NO的含量。流式结果显示,与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组的巨噬细胞表面CCR7的表达量增高且差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组巨噬细胞的COX-2、c PLA2、TNF-α和IL-1β表达量显著升高。ELISA结果显示,Sj CRT能够刺激巨噬细胞分泌致炎性因子TNF-α。Griess法表明Sj CRT能够促进巨噬细胞分泌NO。本研究结果表明Sj CRT能活化小鼠巨噬细胞,为阐明其在RA血吸虫疫苗中的功能等提供基础资料。
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关键词
日本血吸虫
钙网质蛋白
巨噬细胞
趋化因子受体
细胞因子
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职称材料
日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平
2
作者
李红飞
王孝波
+4 位作者
冯新港
靳亚平
杨健美
苑纯秀
林矫矫
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011年第2期33-41,共9页
【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实...
【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实时定量PCR分析该基因mRNA在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cDNA序列为模板,构建原核pET28a-β-catenin-310重组质粒,表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,以此抗血清为一抗,通过Westernblotting分析β-catenin蛋白在不同发育阶段日本血吸虫体内表达量的变化。【结果】β-catenincDNA(GenBank登陆号GU570442)序列全长2 354 bp,含完整的开放阅读框,编码671个氨基酸。β-catenin基因mRNA表达水平在虫卵中最高,23 d雌虫次之,在13 d童虫和23 d雄虫中也较高,约是23 d雌虫的一半,在其他发育阶段mRNA的表达水平相对较低。构建的重组质粒以包涵体形式表达β-catenin重组蛋白,该蛋白有很好的免疫原性。在日本血吸虫不同发育阶段β-catenin蛋白表达量的变化趋势与β-cateninmRNA表达水平的变化基本一致。【结论】不同发育阶段日本血吸虫β-catenin基因mRNA表达水平与β-catenin蛋白表达水平变化趋势基本一致;结合日本血吸虫发育特征,推测Wnt/β-catenin信号通路可能对虫体的器官分化、虫卵的形成及卵胚发育等过程起着重要的调控作用。
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关键词
日本血吸虫
Β-CATENIN基因
克隆表达
WNT信号通路
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职称材料
题名
日本血吸虫钙网质蛋白活化宿主巨噬细胞的初步研究
1
作者
马丽贞
李丹丹
苑纯秀
艾敏
史晓娜
塔娜
冯新港
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开发实验室
上海
师范大
学
生命与环境
科学
学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2016年第2期47-52,共6页
基金
中国农业科学院创新团队基金
文摘
为研究日本血吸虫钙网质蛋白(Schistosoma japonicum calreticulin protein,Sj CRT)活化小鼠巨噬细胞的功能,利用杆状病毒昆虫细胞表达系统所表达的真核重组的Sj CRT蛋白与巨噬细胞共培养72 h,采用流式细胞术检测巨噬细胞表面趋化因子受体CCR7的表达。收集Sj CRT蛋白刺激72 h后的巨噬细胞,抽提RNA并反转录为c DNA,利用RT-PCR检测环加氧酶(cyclooxygenase,COX-2)、磷脂酶A2(phospholipases A2,PLA2)、TNF-α和IL-1β基因的表达。Sj CRT与巨噬细胞共孵育72 h后收集上清,ELISA检测上清中TNF-α的含量,Griess法测上清中NO的含量。流式结果显示,与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组的巨噬细胞表面CCR7的表达量增高且差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Sj CRT蛋白刺激组巨噬细胞的COX-2、c PLA2、TNF-α和IL-1β表达量显著升高。ELISA结果显示,Sj CRT能够刺激巨噬细胞分泌致炎性因子TNF-α。Griess法表明Sj CRT能够促进巨噬细胞分泌NO。本研究结果表明Sj CRT能活化小鼠巨噬细胞,为阐明其在RA血吸虫疫苗中的功能等提供基础资料。
关键词
日本血吸虫
钙网质蛋白
巨噬细胞
趋化因子受体
细胞因子
Keywords
Schistosoma japonicum
calreticulin protein
macrophagocyte
chemochines recepters
cytokine
分类号
S852.735 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平
2
作者
李红飞
王孝波
冯新港
靳亚平
杨健美
苑纯秀
林矫矫
机构
西北农林科技大
学
动物
医
学院
中国农业科学院
上海
兽医
研究所
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011年第2期33-41,共9页
基金
国家自然科学基金项目(30600450)
国家重点基础研究发展规划(“973”计划)项目(2007CB513108)
中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2008JB02,2010JB07)
文摘
【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实时定量PCR分析该基因mRNA在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cDNA序列为模板,构建原核pET28a-β-catenin-310重组质粒,表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,以此抗血清为一抗,通过Westernblotting分析β-catenin蛋白在不同发育阶段日本血吸虫体内表达量的变化。【结果】β-catenincDNA(GenBank登陆号GU570442)序列全长2 354 bp,含完整的开放阅读框,编码671个氨基酸。β-catenin基因mRNA表达水平在虫卵中最高,23 d雌虫次之,在13 d童虫和23 d雄虫中也较高,约是23 d雌虫的一半,在其他发育阶段mRNA的表达水平相对较低。构建的重组质粒以包涵体形式表达β-catenin重组蛋白,该蛋白有很好的免疫原性。在日本血吸虫不同发育阶段β-catenin蛋白表达量的变化趋势与β-cateninmRNA表达水平的变化基本一致。【结论】不同发育阶段日本血吸虫β-catenin基因mRNA表达水平与β-catenin蛋白表达水平变化趋势基本一致;结合日本血吸虫发育特征,推测Wnt/β-catenin信号通路可能对虫体的器官分化、虫卵的形成及卵胚发育等过程起着重要的调控作用。
关键词
日本血吸虫
Β-CATENIN基因
克隆表达
WNT信号通路
Keywords
Schistosoma japonicum
β-catenin gene
cloning and expression
Wnt signaling pathway
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
日本血吸虫钙网质蛋白活化宿主巨噬细胞的初步研究
马丽贞
李丹丹
苑纯秀
艾敏
史晓娜
塔娜
冯新港
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2016
0
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职称材料
2
日本血吸虫β-catenin基因的克隆及在不同发育阶段的表达水平
李红飞
王孝波
冯新港
靳亚平
杨健美
苑纯秀
林矫矫
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2011
0
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