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猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究
被引量：
1
1
作者
谭菲菲
张荣
+1 位作者
韦祖樟
袁世山
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期847-853,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组(Subgenomic,sg)mRNA翻译而来。但位于亚基因组前导序列中的2个AU...
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组(Subgenomic,sg)mRNA翻译而来。但位于亚基因组前导序列中的2个AUG均不能作为N蛋白翻译的起始位点,其翻译使用的是N开放阅读框(ORF)中的首个AUG,因此,本研究旨在感染性克隆的基础上研究N蛋白的翻译起始位点。作者实验室已有在ORF6和ORF7之间插入酶切位点的感染性克隆pORF673,该突变克隆中含有3个潜在的AUG,分别构建了pORF673中N蛋白的其中2个潜在的起始密码子AUG突变的全长克隆,转染Marc-145细胞。这些突变体都能够拯救出子代病毒,其中2个突变病毒的N蛋白的前11个氨基酸完全改变,这些突变病毒都能够在Marc-145细胞上稳定传代。经RT-PCR分析子代病毒的N基因序列及其亚基因组序列,结果表明N蛋白的翻译偏向于使用其ORF的第1个潜在的AUG。如果后者移码,则病毒可以自身修复,这是首次发现病毒有矫正ORF的功能。本研究为N蛋白N端插入标签作为标记疫苗以及进一步研究N蛋白结构与功能奠定了基础。
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关键词
PRRSV
反向遗传操作
核衣壳蛋白
翻译调控
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职称材料
猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
被引量：
13
2
作者
黄律
龙进学
+3 位作者
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第1期1-9,共9页
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的T...
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。
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关键词
猪细小病毒4型
TAQ
Man荧光PCR
检测
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职称材料
题名
猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究
被引量：
1
1
作者
谭菲菲
张荣
韦祖樟
袁世山
机构
中国农业科学院
上海
兽医
研究所
猪
传染病
防治
研究室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第7期847-853,共7页
基金
"十一五"支撑项目课题(2007BAD86B06-3)
文摘
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白)的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组(Subgenomic,sg)mRNA翻译而来。但位于亚基因组前导序列中的2个AUG均不能作为N蛋白翻译的起始位点,其翻译使用的是N开放阅读框(ORF)中的首个AUG,因此,本研究旨在感染性克隆的基础上研究N蛋白的翻译起始位点。作者实验室已有在ORF6和ORF7之间插入酶切位点的感染性克隆pORF673,该突变克隆中含有3个潜在的AUG,分别构建了pORF673中N蛋白的其中2个潜在的起始密码子AUG突变的全长克隆,转染Marc-145细胞。这些突变体都能够拯救出子代病毒,其中2个突变病毒的N蛋白的前11个氨基酸完全改变,这些突变病毒都能够在Marc-145细胞上稳定传代。经RT-PCR分析子代病毒的N基因序列及其亚基因组序列,结果表明N蛋白的翻译偏向于使用其ORF的第1个潜在的AUG。如果后者移码,则病毒可以自身修复,这是首次发现病毒有矫正ORF的功能。本研究为N蛋白N端插入标签作为标记疫苗以及进一步研究N蛋白结构与功能奠定了基础。
关键词
PRRSV
反向遗传操作
核衣壳蛋白
翻译调控
Keywords
porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）
reverse genetic manipulation
nucleocapsid protein
translational control
分类号
S852.659.6 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
被引量：
13
2
作者
黄律
龙进学
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
机构
中国农业科学院上海兽医研究所传染病防治研究室
新疆
农业
大学动物医
学院
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011年第1期1-9,共9页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务专项资金项目(2010-JB05)
上海市技术标准专项项目(10DZ0503600)
文摘
根据GenBank中发表的猪细小病毒4型(PPV4)全基因组序列,针对其结构蛋白VP2基因的保守序列,设计合成特异性引物及Taq Man探针,以VP2克隆质粒为标准品,通过对探针浓度、引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度以及退火温度进行调整,建立了PPV4的Taq Man荧光定量PCR。反应条件优化后,该方法在6.73×109copies/μL^6.73×101copies/μL范围内线性关系良好,相关系数为0.998;对PPV4的最低检测限为6.73×101copies/μL。特异性试验结果显示,用该方法检测其他基因型猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪圆环病毒2型等临床常见病毒,结果均为阴性。批内及批间变异系数均低于2%。用建立的荧光定量PCR方法和普通PCR方法对672份临床病料感染情况进行检测,阳性率为1.93%,而普通PCR检出率仅为1.63%。本研究首次报告在我国猪群中存在PPV4,同时建立的荧光定量方法为PPV4的检测、体外敏感细胞的筛选以及病毒器官嗜性的研究等提供了快速而敏感的分子检测技术。
关键词
猪细小病毒4型
TAQ
Man荧光PCR
检测
Keywords
Porcine parvovirus type 4
Taq Man fluorescent quantitative PCR
detection
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究
谭菲菲
张荣
韦祖樟
袁世山
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
猪细小病毒4型Taq Man荧光定量PCR方法的建立与应用
黄律
龙进学
翟少伦
刘长龙
张荣
袁世山
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2011
13
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