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北方地区牛海绵状脑病(BSE)检测工作报告
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作者 赵德明 秦秀慧 +3 位作者 李军 马李颖 赵维宁 黄伟忠 《中国动物检疫》 CAS 2003年第8期32-33,共2页
关键词 北方地区 海绵状脑病 BSE 检测工作
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奶牛朊病毒基因克隆与序列分析 被引量:12
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作者 杨建民 赵德明 +3 位作者 郝永新 李宁 于书敏 秦秀慧 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期685-688,共4页
根据已报道正常牛朊蛋白(PrPC)基因(PRNP)序列设计引物,采用PCR法扩增了6头荷斯坦奶牛的PRNP基因,将其克隆到T-Vector。序列测定及分析表明所克隆的奶牛PRNP基因片段为795bp,该基因内无内含子,包含了牛PRNP完整编码区序列,编码264个氨... 根据已报道正常牛朊蛋白(PrPC)基因(PRNP)序列设计引物,采用PCR法扩增了6头荷斯坦奶牛的PRNP基因,将其克隆到T-Vector。序列测定及分析表明所克隆的奶牛PRNP基因片段为795bp,该基因内无内含子,包含了牛PRNP完整编码区序列,编码264个氨基酸的前体蛋白,推测其分子量约34ku。其中2头共同含有未曾报道的牛PRNP多态性位点M120I,无义突变G234A,但未引起酶切位点变异,未发现插入或缺失变异;与已报道牛PRNP序列(GenBank收录号为D10613)相比,两者核苷酸序列同源性为99%,其编码的氨基酸同源性为99%。 展开更多
关键词 基因克隆 朊病毒 无义突变 正常 克隆 PCR法 前体蛋白 荷斯坦奶牛 序列分析 变异
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牛结核病诊断方法的研究进展 被引量:19
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作者 王金果 刘爱林 +5 位作者 周向梅 苑方重 尹晓敏 杨建民 杨利峰 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期194-198,共5页
牛结核病是由牛分支杆菌、结核分支杆菌、禽分支杆菌等引起的一类慢性消耗性疾病,是牛各种传染病中致死率最高的疾病之一,该病在人畜之间可以相互传染,很难根治,是影响养牛业和全人类健康的重大疾病,因此控制本病的传播和蔓延迫在眉睫... 牛结核病是由牛分支杆菌、结核分支杆菌、禽分支杆菌等引起的一类慢性消耗性疾病,是牛各种传染病中致死率最高的疾病之一,该病在人畜之间可以相互传染,很难根治,是影响养牛业和全人类健康的重大疾病,因此控制本病的传播和蔓延迫在眉睫。控制牛结核病的主要措施是及时检疫和根除病牛,定期对牛群进行检疫监控。近年来,随着生命科学的发展,进一步将传统细菌检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法3种方法相结合,特别是分子水平上科学技术的发展,使牛结核病的诊断方法逐渐得到完善,同时获得了许多牛分支杆菌的特异性抗原及其基因,对于阐明结核分支杆菌和牛分支杆菌的分子进化和遗传变异规律等方面都具有重要的流行病学意义。 展开更多
关键词 牛结核病 分支杆菌 诊断方法
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狂犬病研究进展 被引量:15
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作者 李泽盛 刘爱林 +7 位作者 谭荣荣 任伟 周向梅 尹晓敏 杨建民 杨利峰 张振山 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期189-191,共3页
狂犬病是一种急性致死性脑炎疾病。狂犬病病毒(rabies virus)是一种嗜神经性病毒,属于弹状病毒科(Rhabdovi-ridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)。多种野生动物和家畜等可以发生狂犬病病毒的自然感染与传播,并且可以通过咬伤、抓伤或密切接... 狂犬病是一种急性致死性脑炎疾病。狂犬病病毒(rabies virus)是一种嗜神经性病毒,属于弹状病毒科(Rhabdovi-ridae)狂犬病病毒属(Lyssavirus)。多种野生动物和家畜等可以发生狂犬病病毒的自然感染与传播,并且可以通过咬伤、抓伤或密切接触等形式感染人类而引起狂犬病。在全球范围内,每年约有60000人不幸死于狂犬病,而这些事件大部分发生在亚洲和非洲。狂犬病是人畜共患的自然疫原性传染病,目前尚无有效的治疗方法,一旦发病,死亡率近乎100%,预防狂犬病的发生尤其重要,狂犬病基本上是可以通过暴露后的预防进行阻止的。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 预防
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朊病毒致病机理研究进展 被引量:5
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作者 杨建民 郝永新 +1 位作者 宁章勇 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2004年第10期34-37,共4页
朊病毒病是由一种新型蛋白感染因子引起的人和动物可转移神经退化性疾病 ,又称海绵状脑病 ,最终可导致患者死亡。作者就朊病毒的致病机理 ,从朊病毒学说 ,致病性、生物学特性进行阐述 ,并从病原基因遗传结构特点 ,致病蛋白的结构特点和... 朊病毒病是由一种新型蛋白感染因子引起的人和动物可转移神经退化性疾病 ,又称海绵状脑病 ,最终可导致患者死亡。作者就朊病毒的致病机理 ,从朊病毒学说 ,致病性、生物学特性进行阐述 ,并从病原基因遗传结构特点 ,致病蛋白的结构特点和形成机制作以综述 ,为该类疾病的防治提供理论依据。 展开更多
关键词 朊病毒 致病机理 疾病特征 分子生物学
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绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA转录水平研究 被引量:1
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作者 乔俊文 苏晓鸥 +5 位作者 王伊琴 周向梅 杨建民 尹晓敏 马李颖 赵德明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1043-1047,共5页
本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系。选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA,反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水... 本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系。选用背景相似的6只内蒙绵羊,提取组织RNA,反转录RT-PCR构建cDNA模板;利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线,对组织中该受体mRNA水平进行Real-time(实时)荧光定量PCR检测。结果表明,大脑皮质中的受体表达水平最高(P<0.05),其次为心脏和脑干,中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏,表达量最低为肺脏(P<0.05)。结果提示,朊病毒受体——37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性,受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高。结果提示朊病毒入侵机体后,组织器官PrPSc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关。 展开更多
关键词 37kDa/67kDa LRP/LR REAL-TIME PCR MRNA 绵羊 PRPSC 复制
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猫基底细胞癌的组织病理学观察 被引量:3
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作者 王金秀 杨泽胜 +1 位作者 王建军 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第8期74-75,共2页
关键词 软组织 病理学观察 细胞 基底 皮肤表皮 恶性肿瘤
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大熊猫朊病毒基因克隆与序列分析 被引量:1
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作者 杨建民 赵德明 +3 位作者 李宁 宁章勇 郝永新 秦秀慧 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第3期29-32,共4页
根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物对,采用PCR方法扩增了大熊猫的朊病毒基因,将其克隆到T-Easy载体,序列测定及分析表明所克隆的大熊猫PRNP基因(GeneBank收录号为AF327449)片段为795bp,编码264个氨基酸的前体蛋白,推测... 根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物对,采用PCR方法扩增了大熊猫的朊病毒基因,将其克隆到T-Easy载体,序列测定及分析表明所克隆的大熊猫PRNP基因(GeneBank收录号为AF327449)片段为795bp,编码264个氨基酸的前体蛋白,推测其分子量约28.5ku。与已报道的牛(GeneBank收录号为AF455119)、绵羊(GeneBank收录号为AF367623)的相应序列作比较分析,核苷酸序列同源性分别为99%和83%,其编码的氨基酸同源性均为100%。在所克隆的大熊猫PRNP基因中未发现与朊病毒敏感性连锁的氨基酸多态性位点。 展开更多
关键词 大熊猫 朊病毒 基因克隆 Prion基因 序列分析
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猪瘟病毒NS3蛋白ATPase/RNA解旋酶功能区的表达与纯化 被引量:3
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作者 郑杰 宁宜宝 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期43-46,共4页
采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L I... 采用RT-PCR技术扩增出猪瘟病毒石门株和C株NS3基因的ATPase/RNA解旋酶功能区,将其克隆到表达载体pET-28a(+)中,获得重组质粒pET-NS3SM和pET-NS3C;PCR、酶切鉴定和序列分析结果表明目的基因插入位置、方向和读码框完全正确;0.8 mmol/L IPTG诱导得到分子量为54kD的目的蛋白,Western blotting结果表明,表达的目的蛋白与猪瘟高免血清没有出现肉眼可见的反应;通过ELISA试验结果表明,重组蛋白能被CSFV阳性血清识别。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 NS3基因 ATPase/RNA解旋酶 克隆 表达
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朊病毒检测方法综述 被引量:1
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作者 鲁云 李滋薇 +1 位作者 杨利峰 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第4期166-169,共4页
传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)是由朊病毒引起的人和多种哺乳动物以神经退行性变化为主要特征的一种慢性消耗性传染病,也称作朊病毒病;其是由体内正常细胞表面的PrPC转变成PrPSc蛋白所导致。但PrPS... 传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)是由朊病毒引起的人和多种哺乳动物以神经退行性变化为主要特征的一种慢性消耗性传染病,也称作朊病毒病;其是由体内正常细胞表面的PrPC转变成PrPSc蛋白所导致。但PrPSc主要在脑内表达,在其他组织表达量很低,因此快捷准确的诊断方法对于该病有重要意义。作者重点介绍以朊病毒的致病特点为依据建立的检测方法,便于对该疾病的早期诊断、预防以及食品安全检测提供帮助,保障畜牧业的有序发展以及人类的健康。 展开更多
关键词 朊病毒 检测 方法
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实时荧光定量PCR构建朊病相关蛋白p38 MAPK标准品质粒和标准曲线 被引量:1
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作者 任伟 杨利峰 赵德明 《中国兽药杂志》 2010年第10期34-36,54,共4页
为进一步揭示朊病的治病机理,根据GenBank中的小鼠p38MAPK的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从N2a细胞中扩增和克隆了该蛋白的309 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立... 为进一步揭示朊病的治病机理,根据GenBank中的小鼠p38MAPK的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从N2a细胞中扩增和克隆了该蛋白的309 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了p38MAPK标准曲线及其直线回归方程。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,说明成功构建小鼠N2a细胞p38MAPK基因的标准质粒和标准曲线,为研究朊病的发病机理奠定了分子生物学基础。 展开更多
关键词 朊病 小鼠神经瘤细胞系N2a p38有丝裂原激活的蛋白激酶
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小鼠脑14-3-3ζ蛋白的基因克隆及鉴定
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作者 王桂花 孙霞 +1 位作者 王致远 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第4期86-88,共3页
提取小鼠脑组织总RNA,采用RT-PCR法扩增14-3-3ζ蛋白的cDNA,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体上,并用双酶切法和PCR法对结果进行鉴定。结果显示,RT-PCR扩增出1条大小约为738 bp的特异性条带,双酶切法和PCR法鉴定结果表明,PCR产物已被克隆... 提取小鼠脑组织总RNA,采用RT-PCR法扩增14-3-3ζ蛋白的cDNA,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体上,并用双酶切法和PCR法对结果进行鉴定。结果显示,RT-PCR扩增出1条大小约为738 bp的特异性条带,双酶切法和PCR法鉴定结果表明,PCR产物已被克隆到pGEM-T Easy载体中。DNA测序结果表明,所克隆的DNA片段与GenBank中已收录序列一致,表明小鼠脑14-3-3ζ蛋白重组pGEM-T克隆载体构建成功。 展开更多
关键词 14-3-3ζ蛋白 基因克隆 鉴定
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奶牛临床型乳房炎病原菌的分离与鉴定 被引量:17
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作者 黄瑛 尹晓敏 +4 位作者 李丽好 赵化芬 韩利方 杨华 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第12期74-76,共3页
奶牛乳房炎是奶牛常见病和多发病之一,其病因复杂,难以防制,给奶牛饲养业带来了巨大的经济损失。作者通过对某奶牛场的奶牛临床型乳房炎病原菌进行分离、鉴定,从105份样品中共分离出76株细菌,经培养特性、染色镜检、生化鉴定等试验,鉴... 奶牛乳房炎是奶牛常见病和多发病之一,其病因复杂,难以防制,给奶牛饲养业带来了巨大的经济损失。作者通过对某奶牛场的奶牛临床型乳房炎病原菌进行分离、鉴定,从105份样品中共分离出76株细菌,经培养特性、染色镜检、生化鉴定等试验,鉴定出无乳链球菌58株,占分离菌的76.32%;大肠杆菌18株,占分离菌的23.68%。本试验结果表明,无乳链球菌是奶牛临床型乳房炎的主要病原菌,其次是大肠杆菌。这为奶牛乳房炎的防制提供了重要依据。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 无乳链球菌 大肠杆菌 分离 鉴定
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某猪群主要疫病的血清学调查 被引量:1
14
作者 李晶晶 郝俊峰 赵德明 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第12期49-51,共3页
某地区规模化猪场60~90日龄育肥猪群陆续出现腹泻、呼吸困难、耳紫、皮肤紫癜等症状,发病后用多种抗生素治疗无效,发病率为20%,病死率接近90%.为了弄清该猪场疫病的流行状况,我们对该猪场母猪群及各个年龄段的商品猪群进行了猪瘟、猪... 某地区规模化猪场60~90日龄育肥猪群陆续出现腹泻、呼吸困难、耳紫、皮肤紫癜等症状,发病后用多种抗生素治疗无效,发病率为20%,病死率接近90%.为了弄清该猪场疫病的流行状况,我们对该猪场母猪群及各个年龄段的商品猪群进行了猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖障碍与呼吸道综合征的抗体水平检测,并对部分发病猪只进行了病理学剖检和细菌学检测.结果表明,猪瘟、猪繁殖障碍与呼吸道综合征在该猪场的各个猪群中呈不同程度的广泛流行,猪伪狂犬病在该猪场的母猪群中有一定程度的流行;剖检中可见典型的猪瘟病变并存在沙门氏菌病的混合感染.对该猪群主要疫病的血清学调查结果,为该猪场疫病的防制提供了有效依据,为我国猪病的防制提供了参考. 展开更多
关键词 流行病学 血清学检测
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犬猫牙源性肿瘤的回顾性病理学分析
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作者 戴悦欣 杨利峰 +1 位作者 赵德明 周向梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4372-4378,共7页
犬猫牙源性肿瘤的发病率逐渐增加。该类肿瘤的发生与牙齿发育密切相关,诊断有一定的难度。通过回顾性病理学方法对2007—2022年收集的犬猫牙源性肿瘤的发病情况进行统计及每类常见牙源性肿瘤的病理学表现进行分析,为牙源性肿瘤的病理学... 犬猫牙源性肿瘤的发病率逐渐增加。该类肿瘤的发生与牙齿发育密切相关,诊断有一定的难度。通过回顾性病理学方法对2007—2022年收集的犬猫牙源性肿瘤的发病情况进行统计及每类常见牙源性肿瘤的病理学表现进行分析,为牙源性肿瘤的病理学诊断提供可靠依据,并对临床治疗及预后的判断提供有意义的指导。中国农业大学动物医学院国家动物海绵状脑病实验室收集来自全国多家宠物医院的犬猫口腔肿瘤组织样品或切片371例,对病例信息进行统计。对典型病例进行HE染色以观察其特征性病理学表现,辅助以CK14及vimentin免疫组织化学染色分别对牙源性上皮成分与牙源性外间质成分进行鉴别。结果显示:在371例犬猫口腔肿瘤组织样品或切片中,有117例为牙源性肿瘤,其中犬93例,猫24例。在犬中,外周牙源性纤维瘤的发病率最高,雄性发病率高于雌性,其他常见肿瘤包括犬棘细胞型成釉细胞瘤,牙龈增生,成釉细胞瘤,成釉细胞纤维瘤与纤维牙瘤以及混合型牙瘤。在猫中,牙龈增生最常见,没有性别倾向,其他常见肿瘤包括外周牙源性纤维瘤与成釉细胞瘤。牙源性肿瘤在犬猫中有较高发病率,该类肿瘤的精准诊断值得更多的关注。对牙源性肿瘤的诊断来说,确定牙源性上皮的存在至关重要,CK14可以作为牙源性上皮良好的标志物,为准确的组织病理学诊断提供辅助,并对临床治疗及预后的判断提供有意义的指导。 展开更多
关键词 牙源性肿瘤 病理学诊断
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一例猫卵巢恶性颗粒细胞瘤的病理学分析
16
作者 廖轶 李浩运 +3 位作者 宋银娟 杨利峰 赵德明 周向梅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期187-192,共6页
本文报道猫伴发腹腔种植性转移的卵巢恶性颗粒细胞瘤1例,较为罕见,国内外文献未见报道。1例15岁雌性家猫,因不食和腹围增大就诊。超声检查显示,左肾尾侧可见一大小约4.27 cm×2.63 cm的肿物。开腹探查,可见大网膜、肠壁及胃壁弥散... 本文报道猫伴发腹腔种植性转移的卵巢恶性颗粒细胞瘤1例,较为罕见,国内外文献未见报道。1例15岁雌性家猫,因不食和腹围增大就诊。超声检查显示,左肾尾侧可见一大小约4.27 cm×2.63 cm的肿物。开腹探查,可见大网膜、肠壁及胃壁弥散性分布大量大小不等的球形肿物,左侧卵巢明显增大,表面形成坚实或柔软的结节。对肿物进行组织病理学检查,诊断为卵巢恶性颗粒细胞瘤。本文提供该病例临床和组织病理学资料,并回顾相关文献资料,希望对该肿瘤的诊疗和研究提供帮助。 展开更多
关键词 卵巢 恶性颗粒细胞瘤
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关于兽医病理学在实践应用中重要性的探讨——新兽药研发与兽医病理学家的培养
17
作者 岳欣 许立华 赵德明 《中国动物保健》 2009年第1期61-62,64,共3页
随着兽医科学的发展,兽医病理学在应用范围和技术手段等方面有了长足发展。兽医病理学作为联系临床医学和实验科学的桥梁,其重要性也得到了普遍认可。本文结合兽医病理学在实际中的应用现状,从新兽药与疫苗的安全性试验和毒性试验、兽... 随着兽医科学的发展,兽医病理学在应用范围和技术手段等方面有了长足发展。兽医病理学作为联系临床医学和实验科学的桥梁,其重要性也得到了普遍认可。本文结合兽医病理学在实际中的应用现状,从新兽药与疫苗的安全性试验和毒性试验、兽医病理学专门技术及人才培训的必要性、紧迫性等方面,对兽医病理学重要性开展了深入的探讨。 展开更多
关键词 兽医病理学 应用 兽药 培养 研发 安全性试验 兽医科学 实验科学
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中药煎剂提高肉仔鸡免疫功能的研究 被引量:12
18
作者 吴长德 赵德明 +1 位作者 尹荣焕 方永辉 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第6期70-71,共2页
为了研究补益类中草药对肉仔鸡免疫功能的影响,通过检测新城疫(ND)-HI抗体滴度和外周血液T淋巴细胞百分率,从体液免疫和细胞免疫2个方面研究中草药的免疫调节功能。结果表明:肉仔鸡饲喂中药煎剂后,ND-HI抗体滴度和外周血液T淋巴细胞百... 为了研究补益类中草药对肉仔鸡免疫功能的影响,通过检测新城疫(ND)-HI抗体滴度和外周血液T淋巴细胞百分率,从体液免疫和细胞免疫2个方面研究中草药的免疫调节功能。结果表明:肉仔鸡饲喂中药煎剂后,ND-HI抗体滴度和外周血液T淋巴细胞百分率较空白对照组均有显著提高。说明中药煎剂具有提肉仔鸡体液免疫和细胞免疫的双重功能。 展开更多
关键词 肉仔鸡 中药 ND-HI抗体滴度 T淋巴细胞
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实时荧光定量PCR构建绵羊PrP基因标准品质粒和标准曲线 被引量:3
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作者 韩彩霞 赵德明 +4 位作者 吴长德 宁章勇 杨建民 刘美丽 马李颖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1363-1366,共4页
Here we report the construction of sheep PrP gene standard plasmid DNA and curve using real-time RT-PCR.Total RNA was extracted from each sample and the fragments of target gene were amplified by RT-PCR.The plasmid wa... Here we report the construction of sheep PrP gene standard plasmid DNA and curve using real-time RT-PCR.Total RNA was extracted from each sample and the fragments of target gene were amplified by RT-PCR.The plasmid was constructed for calibrating unknown samples.In this study,the constructed plasmid containing only the target gene was used to construct a calibration curve.The absolute standard curve method was shown to be of high linearity,sensitivity and reproducibility.The purpose of this study is to investigate the quantification of PrP mRNA expression for knowing the scrapie pathogenesis and providing powerful tool for further studies on prion diseases pathogenesis. 展开更多
关键词 PRP RT—PCR 实时荧光定量PCR 标准曲线 绵羊
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BAT3过表达缓解由PrP106-126毒性多肽诱导的神经元凋亡 被引量:3
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作者 宋志琦 赵文杰 +5 位作者 杨利峰 王运盛 朱婷 程广宇 周向梅 赵德明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期841-848,共8页
拟检测BAT3蛋白过表达对由PrP106-126毒性多肽引起的神经元凋亡现象的影响。首先通过免疫荧光、CCK8细胞活性检测试剂盒和免疫印迹检测带FITC标签的PrP106-126-FITC毒性多肽的生物学毒性。分别用PrP106-126-FITC和PrP106-126神经毒性多... 拟检测BAT3蛋白过表达对由PrP106-126毒性多肽引起的神经元凋亡现象的影响。首先通过免疫荧光、CCK8细胞活性检测试剂盒和免疫印迹检测带FITC标签的PrP106-126-FITC毒性多肽的生物学毒性。分别用PrP106-126-FITC和PrP106-126神经毒性多肽处理原代神经元和Neuro2a细胞,通过免疫荧光技术和免疫印迹方法分别检测受刺激后的原代神经元和Neuro2a细胞中BAT3表达的变化情况。通过脂质体转染方法将已经构建好的pcDNA-3.1-HA-BAT3质粒转染进入原代神经元,用CCK8检测细胞活性;以同样方式将质粒转染进入小鼠神经瘤细胞系Neuro2a,用TUNEL凋亡检测试剂盒分析经BAT3转染或对照组的N2a细胞的凋亡水平;Western blot检测PrP106-126神经毒性多肽处理前后,胞质内细胞色素C和Bcl-2的变化,进一步了解BAT3在神经元凋亡中发挥作用的机制。结果显示,PrP106-126-FITC和PrP106-126神经毒性多肽具有相似的神经毒性。受到多肽刺激之后,无论在原代神经元还是传代细胞系Neuro2a中,BAT3都发生核输出现象,BAT3从细胞核转移进入细胞质。BAT3的过表达使受到PrP106-126毒性多肽刺激的神经元的细胞活性有所提高,Neuro2a的细胞凋亡现象减轻,同时抑制了由PrP106-126毒性多肽引起的细胞色素C的过度释放并且维持细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2的稳定。BAT3蛋白的表达缓解PrP106-126毒性多肽对神经细胞造成的凋亡现象,为进一步阐释该蛋白质对朊病毒引起的神经元损失的治疗作用机制提供了依据。 展开更多
关键词 BAT3 PrP106-126毒性多肽 神经凋亡 传染性海绵状脑病 原代神经元
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