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猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析 被引量:3
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作者 徐璐 夏应菊 +9 位作者 张乾义 张雯雯 王震 李翠 邹兴启 朱元源 徐嫄 王兆 赵启祖 王琴 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2250-2256,共7页
猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担了国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织的A类能力验证... 猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担了国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家,初测满意率为92.23%,初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明,参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,参试单位可以及时纠正错误,进一步提升猪瘟抗体的检测能力。 展开更多
关键词 猪瘟 免疫 抗体 ELISA 能力验证
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猪瘟病毒核酸检测国家级能力验证结果分析
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作者 徐璐 张乾义 +5 位作者 夏应菊 王震 李翠 邹兴启 王琴 赵启祖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1949-1955,共7页
对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力,国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织了A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),该项目由中国... 对猪瘟病毒核酸的检测是实验室检测猪瘟感染的主要手段。为全面考察动物疫病检测机构对猪瘟病毒核酸的检测能力,国家认证认可监督管理委员会(以下简称“认监委”)组织了A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”(CNCA-19-A01),该项目由中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室(以下简称:参考实验室)承担。参考实验室负责制备了检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,不限定检测方法,参试实验室对各个盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测一次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次猪瘟病毒核酸检测的实验室共有97家,初测满意率为93.81%,初测和补测的总体满意率为98.97%。此次能力验证结果表明,我国90%以上猪瘟检测机构能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟诊断和监测的需求。对不达标机构,通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,帮助该单位及时纠正错误,进一步提升猪瘟诊断能力。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 核酸检测 能力验证
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猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的应用研究 被引量:6
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作者 徐璐 张乾义 +7 位作者 夏应菊 任雪健 李翠 邹兴启 徐嫄 王兆 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期31-33,I0006,共4页
为了验证猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用效果,对6个地区的2200份血清样本进行检测,并采用进口试剂同步检测,比较2种试剂盒的一致性;田间筛选了391份猪瘟抗体阴性和阳性血清,采用该试剂盒与荧光抗体病毒中和试验同... 为了验证猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用效果,对6个地区的2200份血清样本进行检测,并采用进口试剂同步检测,比较2种试剂盒的一致性;田间筛选了391份猪瘟抗体阴性和阳性血清,采用该试剂盒与荧光抗体病毒中和试验同时进行检测,比较试剂盒的一致性;为了进一步验证对免疫抗体的检出情况,采用本试剂盒定期对猪瘟疫苗免疫后抗体消长情况进行检测。结果显示:本试剂盒与进口试剂盒具有高度的一致性(Kappa值为0.78);与荧光抗体病毒中和试验的结果几乎完全一致(Kappa值为0.908);免疫后18 d,所有免疫猪的抗体全部转阳。 展开更多
关键词 猪瘟 化学发光免疫分析 抗体
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猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法的建立 被引量:2
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作者 徐璐 张乾义 +7 位作者 夏应菊 任雪健 李翠 邹兴启 徐嫄 王兆 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期25-30,37,共7页
为开发一种操作简便、省时省力、特异性强、敏感度高的猪瘟抗体检测方法,使其更适合于我国猪瘟防控需要,本研究采用真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白单克隆抗体作为竞争抗体,化学发光底物作为显... 为开发一种操作简便、省时省力、特异性强、敏感度高的猪瘟抗体检测方法,使其更适合于我国猪瘟防控需要,本研究采用真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白单克隆抗体作为竞争抗体,化学发光底物作为显色体系,同时将猪瘟血清国家参考品作为溯源血清,绘制标准曲线,建立了猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法。结果表明,该方法的敏感性为96.67%,特异性为96.68%;通过标准曲线的绘制,能够实现检测结果的相对定量;简化了操作步骤,检测时间大大缩短(<1 h/96样本)。猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法适合于猪瘟的田间大规模普查,能够提供更高的准确度,缩短检测时间,降低工作强度,减少人工成本,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体 化学发光免疫分析
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加强生物安全措施是养猪场防控非洲猪瘟的关键 被引量:62
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作者 王琴 赵启祖 《中国兽药杂志》 2018年第12期1-5,共5页
非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)引起的一种猪的高度接触性烈性传染病,其发病率高,死亡率可高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫... 非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)引起的一种猪的高度接触性烈性传染病,其发病率高,死亡率可高达100%。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病,我国将其列为一类动物疫病。目前尚无安全有效的商品化疫苗,防控ASF最有效的方法是实行早期确诊、扑杀和严格的封锁隔离。针对ASF疫情对我国养猪业的严重威胁,养猪场则需采取更严格的生物安全防控措施。根据非洲猪瘟的流行病学特征,简要综述了养猪场如何通过建立良好的生物安全屏障、切断可能传播途径、建立有效的清洗消毒和无害化处理措施,最终有效防控非洲猪瘟。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 预防控制 生物安全
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猪瘟病毒Erns蛋白在杆状病毒系统中的表达及纯化
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作者 牛康 徐璐 +6 位作者 张乾义 夏应菊 朱元源 邹兴启 李翠 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期31-35,38,I0004,共7页
采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数... 采用杆状病毒表达系统表达并纯化猪瘟病毒E^rns蛋白,并对其反应原性进行鉴定。将猪瘟病毒的E^rns 基因克隆至pFastbac-HT-A 载体上,构建了pFA-E^rns重组质粒;经转座、转染后构建重组杆状病毒rBac-E^rns;通过优化接毒时间和接毒量等参数,最终确定表达条件。将表达产物采用亲和层析法纯化后,采用Western Blotting 鉴定E^rns 蛋白的反应性,并采用间接ELISA 方法对其应用进行了初步探索。结果显示,获得了重组杆状病毒rBac-E^rns,经Western Blotting 和间接免疫荧光(IFA)鉴定,该重组病毒能够与猪瘟阳性血清和E^rns 单抗发生特异性反应。纯化后的E^rns 蛋白纯度较好,浓度为0. 2 mg/ mL,经Western Blotting 方法鉴定证明,纯化后的蛋白与E^rns单抗和猪瘟阳性血清能够发生特异性反应;初步建立了间接ELISA 方法检测猪瘟抗体,证明表达的蛋白可以区分猪瘟阳性血清和阴性血清。表明本研究利用杆状病毒表达系统成功表达并纯化了猪瘟病毒E^rns蛋白,纯化后的E^rns蛋白具有良好的反应性,可以作为开发鉴别诊断试剂的备选蛋白以及用于E^rns 蛋白的结构和生物学功能研究。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^rns蛋白 杆状病毒系统 间接ELISA
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CRISPR/Cas9基因编辑技术在重要猪病毒病防控中的研究与应用 被引量:5
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作者 戴学宇 张乾义 +3 位作者 徐璐 赵启祖 王琴 夏应菊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期943-951,共9页
规律成簇的间隔短回文重复序列系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)是一种广泛存在于古细菌和细菌中,由RNA介导在Cas蛋白协助下发挥作用的获得性免疫系统,目前,已发现的CRISPR系统中以CRISPR/Cas9... 规律成簇的间隔短回文重复序列系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)是一种广泛存在于古细菌和细菌中,由RNA介导在Cas蛋白协助下发挥作用的获得性免疫系统,目前,已发现的CRISPR系统中以CRISPR/Cas9应用最为广泛,本文主要对CRISPR/Cas9系统的基本原理和研究进展进行概述,着重介绍其在重要猪病毒病防控中的应用,包括改造宿主和改造病毒两方面,该技术为研究病毒致病机制、新型疫苗研发以及抗病育种研究等提供了强有力的工具,对疫病的控制有着深远的影响。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 猪病防控 新型疫苗 抗病育种
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