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致肾脏、肠道病变大肠杆菌的分离及生物特性鉴定 被引量:3
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作者 宁宜宝 宋立 +4 位作者 张广川 王琴 赵耘 沈青春 沈润爱 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期51-54,共4页
利用常规培养基从病鸡的肾脏、肠道等组织器官中分离出了二株大肠杆菌,血清型为0152-160,该菌株能引起7/10的10日龄SPF鸡胚死亡,死亡鸡胚肾、肝肿大,全身出血。用分离物1#、2#大肠杆菌感染的20日龄雏鸡67% ̄88%死亡,从试验发病死亡鸡肾... 利用常规培养基从病鸡的肾脏、肠道等组织器官中分离出了二株大肠杆菌,血清型为0152-160,该菌株能引起7/10的10日龄SPF鸡胚死亡,死亡鸡胚肾、肝肿大,全身出血。用分离物1#、2#大肠杆菌感染的20日龄雏鸡67% ̄88%死亡,从试验发病死亡鸡肾脏分离到的大肠杆菌仍能67%的感染鸡死亡。死亡鸡呈严重的肾肿大、尿酸盐沉积,肠壁出血、粘膜脱落,气囊炎和心包炎。该大肠杆菌对SPF鸡的致病死亡率低于普通健康鸡;试验证明用鸡毒支原体激发感染,可明显增强该大肠杆菌对SPF鸡的致死率和病变程度。另外试验证明此大肠杆菌对青、链霉素、庆大霉素等具有强耐药性。 展开更多
关键词 鸡大肠杆菌 分离 鉴定 致病性
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猪瘟病毒持续感染对母猪繁殖性能及仔猪猪瘟疫苗免疫效力的影响 被引量:27
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作者 宁宜宝 王琴 +5 位作者 丘惠深 张广川 宋立 赵耘 王在时 沈青春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期449-453,共5页
利用来源于同一猪场的2头猪瘟病毒(HCV)持续感染的带毒母猪及所产35头仔猪(包括13头死胎)和6头阴性对照猪,观察母猪的胎儿发育成活状况、仔猪HCV带毒率及HCV垂直传播对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)免疫效力的干扰作用,同时进行水平传播... 利用来源于同一猪场的2头猪瘟病毒(HCV)持续感染的带毒母猪及所产35头仔猪(包括13头死胎)和6头阴性对照猪,观察母猪的胎儿发育成活状况、仔猪HCV带毒率及HCV垂直传播对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)免疫效力的干扰作用,同时进行水平传播试验和观察HCV持续感染对母猪繁殖功能的影响。结果表明:HCV持续感染对其中1头母猪的胎儿发育和成活有明显影响,而对另1头母猪的胎儿发育没有明显影响;HCV持续感染母猪可经过胎盘垂直传播病毒给仔猪,传播率达45%~86%;吃初乳和接种HCLV不能阻止带毒仔猪的死亡,9头带毒仔猪在45d内死亡4头;免疫HCLV不能使带毒仔猪产生免疫保护力,5头猪在强毒攻击后死亡4头;HCV垂直传播的带毒猪可发生水平传播,并引起3/4感染猪死亡;HCV持续感染可引起母猪生殖系统病理变化,导致繁殖障碍。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 持续感染 母猪 繁殖性能 仔猪成活率 疫苗 免疫效力
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猪肺炎支原体膜蛋白P46基因在大肠杆菌中的表达 被引量:8
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作者 覃青松 宁宜宝 沈青春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期94-97,共4页
把猪肺炎支原体 (Mycoplasmahyopneumoniae) 国际标准株 2 32的P4 6基因克隆进pGEM_T_EASY载体上 ,通过PCR方法把该基因中三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG ,然后将该基因亚克隆到载体pMAL_P2X上 ,得到重组表达载体 pMAL_P2X_P4 6。用... 把猪肺炎支原体 (Mycoplasmahyopneumoniae) 国际标准株 2 32的P4 6基因克隆进pGEM_T_EASY载体上 ,通过PCR方法把该基因中三个编码Trp的密码子TGA突变为TGG ,然后将该基因亚克隆到载体pMAL_P2X上 ,得到重组表达载体 pMAL_P2X_P4 6。用该重组载体转化大肠杆菌TB1,得到表达重组菌TB1_pMAL_P2XA_P4 6 ,用终浓度为 0 3mM的IPTG在 37℃下诱导表达 ,获得可溶性表达的融合蛋白MBP_P4 6 ,在免疫印迹试验中 ,兔抗MBP高免血清和兔抗猪肺炎支原体高免血清都能与目的蛋白发生阳性反应 ,证明猪肺炎支原体P4 6基因在大肠杆菌里获得了可溶性表达。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 表面膜蛋白P46 突变 表达 免疫印迹试验
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猪肺炎支原体表面蛋白P46基因的克隆与序列比较 被引量:6
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作者 覃青松 宁宜宝 沈青春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期266-269,共4页
猪肺炎支原体 (MycoplasmaHyopneumoniae ,Mhp)兔化弱毒株R6 5 9株、济南强毒株、强毒Z株、国际标准株2 32 ,通过A2 6培养基培养 ,提取DNA ;利用PCR技术从四株猪肺炎支原体中均能扩增出目的条带。将该序列克隆到pGEM_T_Easy载体上测序... 猪肺炎支原体 (MycoplasmaHyopneumoniae ,Mhp)兔化弱毒株R6 5 9株、济南强毒株、强毒Z株、国际标准株2 32 ,通过A2 6培养基培养 ,提取DNA ;利用PCR技术从四株猪肺炎支原体中均能扩增出目的条带。将该序列克隆到pGEM_T_Easy载体上测序。结果表明 ,克隆序列全长 115 2bp ,编码 383个氨基酸和一个终止子 (TAA) ;该序列中含有 3个TGA编码Trp ,而不是终止密码子。比较兔化弱毒株与济南强毒株、国际标准株 2 32及NCBI上发布的J株的P4 6基因序列 ,发现它们的同源性分别为 98 6 %、99 2 %、99 2 % ;比较它们编码的氨基酸发现它们的同源性分别为 98 7%、99 2 %、99 2 %。结果表明猪肺炎支原体的P4 6基因在猪肺炎支原体种内是很保守的 ,因此建立以P4 6蛋白为诊断抗原的ELISA具有潜在的意义。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 P46基因 克隆 序列比较
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实时荧光PCR技术快速定量检测H5亚型禽流感病毒 被引量:4
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作者 韩剑锋 宁宜宝 +1 位作者 宋立 杨承槐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期453-458,共6页
选取H5亚型禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计出特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感病毒。使用含有选定检测序列的RNA标准品做标准曲线,结果表明该方法的... 选取H5亚型禽流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计出特异性引物和TaqMan MGB探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感病毒。使用含有选定检测序列的RNA标准品做标准曲线,结果表明该方法的灵敏度为10拷贝/反应,标准曲线的相关系数为0.998003,对H9亚型禽流感病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳。为禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 TAQMAN MGB探针 实时荧光PCR
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牛传染性胸膜肺炎研究进展 被引量:6
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作者 沈青春 韩明远 +1 位作者 王芳 宁宜宝 《中国奶牛》 2010年第8期48-51,共4页
牛传染性胸膜肺炎(CBPP)又称牛肺疫,是一种由丝状支原体丝状亚种小菌落生物型(Mycoplasma mycoides subsp.Mycoides Small-colony type,SC型)引起的牛传染病,发病率高、死亡率中度,病程为亚急性或慢性,其病理特征表现为纤维素性肺... 牛传染性胸膜肺炎(CBPP)又称牛肺疫,是一种由丝状支原体丝状亚种小菌落生物型(Mycoplasma mycoides subsp.Mycoides Small-colony type,SC型)引起的牛传染病,发病率高、死亡率中度,病程为亚急性或慢性,其病理特征表现为纤维素性肺炎和胸膜炎症状。 展开更多
关键词 牛传染性胸膜肺炎 丝状支原体 纤维素性 牛肺疫 生物型 传染病 SC型 发病率
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猪瘟病毒E0基因在CHO细胞中的表达
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作者 陈振海 范学政 +4 位作者 夏春 王琴 宋立 王在时 宁宜宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期483-485,共3页
将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,... 将EGFPE0融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0。将重组质粒转染CHO(dhfr-),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功。通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达。高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 EO蛋白 增强型水母绿色荧光蛋白 CHO细胞
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猪肺炎支原体p97 R1区基因和大肠杆菌LTB基因的重组和表达 被引量:7
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作者 卢会英 沈青春 宁宜宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期3-6,共4页
本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区... 本研究从猪肺炎支原体的主要抗原蛋白及其免疫特点出发,将猪肺炎支原体纤毛粘附决定区R1区基因和具有黏膜免疫佐剂作用的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(the B subunit of heat-labile enterotoxin LTB)基因重组表达,并且单独表达了R1区基因。将扩增的目的片段插入到表达载体pET-28a(+)中,分别构建了两个原核表达质粒pET28a(+)-rLTBR1和pET28a(+)-rR1,诱导表达了两个融合蛋白rLTBR1和rR1。对表达的目的蛋白进行了SDS-PAGE和Western blot检测,结果表明,表达的蛋白为特异的蛋白。本试验为进一步的研究rLTBR1融合蛋白在黏膜免疫方面的作用打下了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 p97蛋白 R1 LTB
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