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HCV胞膜蛋白E2基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备
1
作者
杜德伟
孙脊峰
+4 位作者
杨洁
贾战生
秦鸿雁
周永兴
韩骅
《中国全科医学》
CAS
CSCD
2005年第22期1834-1836,共3页
目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶...
目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖吸附柱纯化融合蛋白,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度>90%;用表达的E2蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测抗体效价,WesternBlot法检测抗体特异性。结果用原核诱导表达出HCV胞膜蛋白E2免疫新西兰兔后获得多克隆抗体的效价在1∶1280以上,能特异性识别E2蛋白。结论成功构建HCVE2基因的原核表达载体,利用原核表达HCV胞膜蛋白E2制备的多克隆抗体能特异性识别E2蛋白。为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础。
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关键词
肝炎病毒
胞膜蛋白
融合表达
金属螯合亲和层析
多克隆抗体
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职称材料
题名
HCV胞膜蛋白E2基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备
1
作者
杜德伟
孙脊峰
杨洁
贾战生
秦鸿雁
周永兴
韩骅
机构
中国人民解放军
第四军医大学
唐都医院
中国人民解放军第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室
出处
《中国全科医学》
CAS
CSCD
2005年第22期1834-1836,共3页
基金
国家自然科学基金(30070687)
文摘
目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖吸附柱纯化融合蛋白,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度>90%;用表达的E2蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测抗体效价,WesternBlot法检测抗体特异性。结果用原核诱导表达出HCV胞膜蛋白E2免疫新西兰兔后获得多克隆抗体的效价在1∶1280以上,能特异性识别E2蛋白。结论成功构建HCVE2基因的原核表达载体,利用原核表达HCV胞膜蛋白E2制备的多克隆抗体能特异性识别E2蛋白。为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础。
关键词
肝炎病毒
胞膜蛋白
融合表达
金属螯合亲和层析
多克隆抗体
Keywords
Hepatitis C virus
Envelop protein
Fusion expression
Metal chelate affinity chromatography
Polyclonal antibody
分类号
R512.6 [医药卫生—内科学]
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作者
出处
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被引量
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1
HCV胞膜蛋白E2基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备
杜德伟
孙脊峰
杨洁
贾战生
秦鸿雁
周永兴
韩骅
《中国全科医学》
CAS
CSCD
2005
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