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LAMP法检测儿童粪便中肠道腺病毒的建立
被引量：
2
1
作者
赵娜
刘金霞
孙殿兴
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期124-127,共4页
目的通过应用环介导等温扩增(LAMP)建立一种快速、简便的可视化检测儿童肠道腺病毒核酸的方法。方法登录GenBank网站下载腺病毒40和41基因型的六邻体序列,根据该区段的保守序列设计4条LAMP引物。将反应体系加入EP管,在恒温条件(65℃)扩...
目的通过应用环介导等温扩增(LAMP)建立一种快速、简便的可视化检测儿童肠道腺病毒核酸的方法。方法登录GenBank网站下载腺病毒40和41基因型的六邻体序列,根据该区段的保守序列设计4条LAMP引物。将反应体系加入EP管,在恒温条件(65℃)扩增60min后,再以凝胶电泳和钙黄绿素染色评价LAMP法的特异性和灵敏度,并和PCR法的结果相比较。最后,同时用LAMP和PCR法对40份可疑临床样本进行检测,应用卡方检验进行统计学分析。结果 LAMP法能准确地使腺病毒40和41型得到扩增,酶切结果也正确,显示了LAMP法较好的特异性。LAMP的灵敏度比PCR高约10倍。经过对40份临床样本的检测,LAMP与PCR均没有发生非特异扩增,LAMP法和PCR法的一致性为92.5%(P>0.05)且LAMP法没有漏检阳性样本。另外,使用钙黄绿素染色的方法更好地显示了产物检测的可视性和简便性。结论该研究初步建立了快速、简便、可视化检测肠道腺病毒的LAMP技术,在基层医疗机构有一定的实用价值。
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关键词
肠道腺病毒
环介导等温扩增(LAMP)
儿童
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职称材料
反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测
被引量：
1
2
作者
赵娜
刘金霞
孙殿兴
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期383-387,共5页
目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RTLAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根...
目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RTLAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL,2a型的检测灵敏度为104 IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RTLAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P>0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P<0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景。
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关键词
丙型肝炎病毒(HCV)
反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)
分型检测
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职称材料
题名
LAMP法检测儿童粪便中肠道腺病毒的建立
被引量：
2
1
作者
赵娜
刘金霞
孙殿兴
机构
承德医学院病原生物学实验
中心
中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期124-127,共4页
基金
全军医药卫生科研基金项目(No.CBJ14C010)资助~~
文摘
目的通过应用环介导等温扩增(LAMP)建立一种快速、简便的可视化检测儿童肠道腺病毒核酸的方法。方法登录GenBank网站下载腺病毒40和41基因型的六邻体序列,根据该区段的保守序列设计4条LAMP引物。将反应体系加入EP管,在恒温条件(65℃)扩增60min后,再以凝胶电泳和钙黄绿素染色评价LAMP法的特异性和灵敏度,并和PCR法的结果相比较。最后,同时用LAMP和PCR法对40份可疑临床样本进行检测,应用卡方检验进行统计学分析。结果 LAMP法能准确地使腺病毒40和41型得到扩增,酶切结果也正确,显示了LAMP法较好的特异性。LAMP的灵敏度比PCR高约10倍。经过对40份临床样本的检测,LAMP与PCR均没有发生非特异扩增,LAMP法和PCR法的一致性为92.5%(P>0.05)且LAMP法没有漏检阳性样本。另外,使用钙黄绿素染色的方法更好地显示了产物检测的可视性和简便性。结论该研究初步建立了快速、简便、可视化检测肠道腺病毒的LAMP技术,在基层医疗机构有一定的实用价值。
关键词
肠道腺病毒
环介导等温扩增(LAMP)
儿童
Keywords
enteric adenovirus
loop-mediated isothermal amplification（LAMP）
children
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测
被引量：
1
2
作者
赵娜
刘金霞
孙殿兴
机构
承德医学院病原生物学教研室
中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期383-387,共5页
基金
全军医药卫生科研基金项目(No.CBJ14C010)资助~~
文摘
目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RTLAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL,2a型的检测灵敏度为104 IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RTLAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P>0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P<0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景。
关键词
丙型肝炎病毒(HCV)
反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)
分型检测
Keywords
hepatitis C virus（HCV）
reverse transcription loop-mediated isothermal amplification（RT-LAMP）
genotyping detection
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
LAMP法检测儿童粪便中肠道腺病毒的建立
赵娜
刘金霞
孙殿兴
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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职称材料
2
反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测
赵娜
刘金霞
孙殿兴
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
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