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三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析 被引量:4
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作者 吕杨 陈香美 +5 位作者 尹忠 张雪光 王兆霞 冯哲 洪权 师锁柱 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期247-251,共5页
研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RN... 研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA . 展开更多
关键词 固定 石蜡切片 RNA 定量PCR
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激光微切割与定量PCR技术分析肾脏病理切片RNA 被引量:2
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作者 吕杨 尹忠 +4 位作者 王兆霞 师锁柱 洪权 张雪光 陈香美 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期695-699,共5页
采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和T... 采用激光微切割与定量PCR技术,分析使用不同提取方法从不同固定方法固定的病理切片中提取的RNA.用70%乙醇、丙酮、甲醇、4%多聚甲醛固定肾脏冰冻切片,使用激光微切割技术切取肾小球,用硫氰酸胍方法(guanidinethiocyanatemethods,GTC)和Trizol试剂方法提取RNA,使用Taqman定量PCR方法分析比较各组RNA的量;选取丙酮固定的石蜡切片,使用激光微切割技术切取肾小球,采用RNA裂解液提取RNA,使用Taqman定量PCR方法,比较石蜡切片和冰冻切片中RNA含量.结果显示:提取沉淀性固定剂如乙醇、丙酮、甲醇固定的冰冻切片的RNA时,2种提取方法和3种固定方法对RNA含量的影响都无明显差异;但在提取4%多聚甲醛固定冰冻切片时,使用Trizol提取RNA含量明显高于使用GTC方法,且其含量与沉淀性固定剂固定的切片RNA含量无明显差异.石蜡切片中经激光微切割肾小球的RNA含量与冰冻切片经激光微切割肾小球的RNA含量无明显差异.结果提示:切片的固定方法和RNA的提取方法是影响切片RNA提取量的主要原因. 展开更多
关键词 激光微切割 定量PCR RNA 冰冻切片 石蜡切片
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外源性人TIMP-1基因在转基因小鼠染色体上的整合及定位 被引量:2
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作者 朱晗玉 陈香美 +2 位作者 马润林 张冬芬 任建功 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期37-42,共6页
为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(human tissue inhibitor of metalloproteinase-1,hTIMP-1)基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位,应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数,结果表明,外... 为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(human tissue inhibitor of metalloproteinase-1,hTIMP-1)基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位,应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数,结果表明,外源基因是以单拷贝、单位点形式整合;应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测F4~F20代转基因小鼠中外源基因的整合.结果证明,该家系转基因小鼠自F4代起是纯合子,外源基因整合在17号染色体E区;反向PCR法(Inverse PCR,IPCR)克隆出约3.8kb外源基因整合位点处的侧翼序列.分析表明,外源基因整合在17号染色体E1.3区,ALK(anaplastic lymphoma kinase,ALK)基因第23个内含子区域、结果提示,获得的转基因小鼠为纯系,外源基因hTIMP-1已稳定整合在转基因小鼠染色体上,并能遗传给后代. 展开更多
关键词 转基因动物模型 基质金属蛋白酶组织抑制物-1 荧光原位杂交 反向PCR
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