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小鼠Smad4基因慢病毒表达载体构建及在293T细胞中的表达
1
作者
孙毓晗
侯昭晖
肖玉丽
《中华耳科学杂志》
CSCD
北大核心
2013年第1期112-117,共6页
目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础。方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti...
目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础。方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况。结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致。pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达。293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍。病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml。结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达。
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关键词
SMAD4
慢病毒
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题名
小鼠Smad4基因慢病毒表达载体构建及在293T细胞中的表达
1
作者
孙毓晗
侯昭晖
肖玉丽
机构
哈尔滨医科大学附属第二
医院
耳
鼻
咽喉
头颈
外科
中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军总医院耳鼻喉研究所
出处
《中华耳科学杂志》
CSCD
北大核心
2013年第1期112-117,共6页
基金
国家自然基金青年项目(81000483)
北京市科技新星项目计划(2010B083)
文摘
目的构建含有小鼠Smad4基因和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的慢病毒病毒表达载体,为今后应用该重组慢病毒介导的内耳基因导入和相关的聋病基因治疗奠定实验基础。方法利用基因重组、限制性内切酶酶切及基因测序的方法,构建并鉴定pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP真核表达质粒;利用脂质体介导转染的方法,将pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP转染导入293T细胞,荧光显微镜下观察EGFP基因表达情况,利用实时荧光PCR的方法检测小鼠Smad4基因mRNA水平的表达情况。结果经PCR鉴定和基因测序证实了小鼠Smad4基因序列与基因bank中的序列相一致。pLenti6.3-Smad4-IRES2-EGFP质粒转入293T细胞后,荧光显微镜下可见有绿色荧光蛋白表达。293T细胞经慢病毒感染后,其小鼠Smad4基因mRNA表达量增加了66427倍。病毒滴度经测定为2.5×108TU/ml。结论成功地构建了含有小鼠Smad4基因的慢病毒表达载体,并能在293T细胞中表达。
关键词
SMAD4
慢病毒
Keywords
Smad4
Lentivirus
分类号
R764.3 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠Smad4基因慢病毒表达载体构建及在293T细胞中的表达
孙毓晗
侯昭晖
肖玉丽
《中华耳科学杂志》
CSCD
北大核心
2013
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