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金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)特异性抗体的制备及其功能分析
被引量：
2
1
作者
岳岩
郑峰
+3 位作者
曹清心
王怡雯
周婷婷
王长军
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期1494-1498,共5页
目的:制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,并分析其体外功能。方法:以USA300基因组为模板,PCR扩增SraP_(L-Lectin)基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导6 h,镍柱亲和层析纯化SraP_(L-Le...
目的:制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,并分析其体外功能。方法:以USA300基因组为模板,PCR扩增SraP_(L-Lectin)基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导6 h,镍柱亲和层析纯化SraP_(L-Lectin)-His蛋白。以纯化的SraP_(L-Lectin)-His重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,间接ELISA法、West-ern blot法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。扩大培养阳性细胞株后注射小鼠腹腔,收集腹水,经Protein G柱纯化anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体。以不同终浓度的单克隆抗体预先孵育A549细胞和注射小鼠腹腔,涂板计数单克隆抗体阻断细菌黏附、侵入和感染的能力。结果:成功构建了SraP_(L-Lectin)-pET28a重组表达载体,经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白,获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,小鼠腹水经Protein G柱纯化后获得纯度高达95%以上的特异性抗体,效价1∶32万。终浓度100 ng/mL单克隆抗体预先孵育A549细胞2 h,能够显著降低金黄色葡萄球菌对A549细胞的黏附和侵入。提前1 d向小鼠腹腔注射1μg anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,能够显著降低小鼠血液中的金黄色葡萄球菌数量。结论:本研究制备的anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体能够阻断金黄色葡萄球菌对宿主细胞的黏附和侵入,为将SraP_(L-Lectin)作为防控金黄色葡萄球菌感染药物靶点的研发奠定了基础。
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关键词
金黄色葡萄球菌
富丝氨酸重复蛋白
单克隆抗体
感染
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)特异性抗体的制备及其功能分析
被引量：
2
1
作者
岳岩
郑峰
曹清心
王怡雯
周婷婷
王长军
机构
中国人民解放军总医院医务科
南京军区军事医学研究所
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第11期1494-1498,共5页
基金
全军应用基础研究项目(BWS14J046)
江苏省博士后基金(1701155C)
文摘
目的:制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,并分析其体外功能。方法:以USA300基因组为模板,PCR扩增SraP_(L-Lectin)基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25℃诱导6 h,镍柱亲和层析纯化SraP_(L-Lectin)-His蛋白。以纯化的SraP_(L-Lectin)-His重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,间接ELISA法、West-ern blot法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株。扩大培养阳性细胞株后注射小鼠腹腔,收集腹水,经Protein G柱纯化anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体。以不同终浓度的单克隆抗体预先孵育A549细胞和注射小鼠腹腔,涂板计数单克隆抗体阻断细菌黏附、侵入和感染的能力。结果:成功构建了SraP_(L-Lectin)-pET28a重组表达载体,经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白,获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,小鼠腹水经Protein G柱纯化后获得纯度高达95%以上的特异性抗体,效价1∶32万。终浓度100 ng/mL单克隆抗体预先孵育A549细胞2 h,能够显著降低金黄色葡萄球菌对A549细胞的黏附和侵入。提前1 d向小鼠腹腔注射1μg anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体,能够显著降低小鼠血液中的金黄色葡萄球菌数量。结论:本研究制备的anti-SraP_(L-Lectin)单克隆抗体能够阻断金黄色葡萄球菌对宿主细胞的黏附和侵入,为将SraP_(L-Lectin)作为防控金黄色葡萄球菌感染药物靶点的研发奠定了基础。
关键词
金黄色葡萄球菌
富丝氨酸重复蛋白
单克隆抗体
感染
Keywords
Staphylococcus aureus
serine-rich repeat protein
monoclonal antibody
infection
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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被引量
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1
金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraP_(L-Lectin)特异性抗体的制备及其功能分析
岳岩
郑峰
曹清心
王怡雯
周婷婷
王长军
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
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