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重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析
被引量：
2
1
作者
常玉梅
李文艳
+4 位作者
张永红
张建楼
温洁霞
王利月
仲飞
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期53-57,共5页
为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1AC...
为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体,然后转染人胚肾细胞HEK293T细胞使其分泌表达,用Ni-NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组LLO蛋白,通过Western-blot对其进行鉴定,并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明,扩增的LLO基因序列与GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外,并具有较强的溶血活性,这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。
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关键词
单增李斯特菌
溶血素O
真核表达
溶血活性
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职称材料
题名
重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析
被引量：
2
1
作者
常玉梅
李文艳
张永红
张建楼
温洁霞
王利月
仲飞
机构
中国人民解放军保定第
河北大学基础医学院
河北农业大学动物医学院/河北省兽用生物制品工程技术研究中心
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期53-57,共5页
基金
河北省自然科学基金(C2013204130)
河北大学医学学科专项资金建设项目(2015A2002)
文摘
为研究单增李斯特菌分泌的溶血素O(LLO)的免疫佐剂作用,需要构建其真核表达载体,使其在动物体内进行分泌表达,从而发挥其生物佐剂活性。为此,本试验通过PCR方法从LM基因组DNA中扩增了LLO基因,并将其插入到带有CD5信号肽的质粒pcDNA3.1ACD5sp的信号肽下游构建成真核表达载体,然后转染人胚肾细胞HEK293T细胞使其分泌表达,用Ni-NTA琼脂糖凝胶层析法从培养基中分离纯化重组LLO蛋白,通过Western-blot对其进行鉴定,并用溶血试验鉴定其生物活性。结果表明,扩增的LLO基因序列与GenBank中的基因序列完全一致,在HEK293T细胞中表达的重组LLO在CD5信号肽介导下能被分泌到细胞外,并具有较强的溶血活性,这为进一步研究LLO的功能提供了必要的条件。
关键词
单增李斯特菌
溶血素O
真核表达
溶血活性
Keywords
Listeria monocytogenes
listeriolysin O
eukaryotic expression
haemoletic activity
分类号
S855.1 [农业科学—临床兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
重组单增李斯特菌溶血素O在HEK293T细胞中的分泌表达及活性分析
常玉梅
李文艳
张永红
张建楼
温洁霞
王利月
仲飞
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
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