期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
1
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
靶向钠钾ATP酶α1亚单位shRNA质粒表达载体的构建与筛选
1
作者
周蔚
徐忠伟
+3 位作者
王凤梅
陈小义
呼文亮
徐瑞成
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期212-218,共7页
构建编码人钠钾ATP酶(Na+/K+-ATPase)α1mRNA的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体shRNA-ATP1A1(ATP1A11、ATP1A12和ATP1A13),并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。设计、合成靶向ATP1A1的3对DNA序列,分别插入Pgenesil-3中构建3...
构建编码人钠钾ATP酶(Na+/K+-ATPase)α1mRNA的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体shRNA-ATP1A1(ATP1A11、ATP1A12和ATP1A13),并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。设计、合成靶向ATP1A1的3对DNA序列,分别插入Pgenesil-3中构建3个shRNA表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞荧光检测Na+/K+-ATPaseα1表达变化;MTT法和流式细胞术检测沉默效果最明显的ATP1A13对HepG2增殖活性和细胞周期的影响。构建的质粒表达载体酶切鉴定均可扩增出预期条带,测序符合设计要求,构建成功。ATP1A12和ATP1A13对所转染的HepG2细胞中Na+/K+-ATPaseα1mR-NA和蛋白质表达均有抑制作用,其中ATP1A13最为明显(P<0.05)。ATP1A13可抑制HepG2细胞的增殖;转染48和60h,HepG2细胞细胞周期呈现S期阻滞;实时定量PCR检测ATP1A13敲低HepG2Na+/K+-ATPaseα1mRNA呈时间依赖性,72h后表达降低约90%。试验成功构建靶向钠钾ATP酶α1亚单位的shRNA质粒表达载体,其中shRNA-ATP1A13可显著抑制HepG2细胞增殖引起细胞周期S期阻滞。
展开更多
关键词
钠钾ATP酶
RNA干扰
HEPG2细胞
细胞周期
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
靶向钠钾ATP酶α1亚单位shRNA质粒表达载体的构建与筛选
1
作者
周蔚
徐忠伟
王凤梅
陈小义
呼文亮
徐瑞成
机构
中国人民武装警察部队医学院细胞生物学与遗传学教研室
中国人民武装警察部队
医学院
天津市职业与环境危害
生物
标志物重点实验室
天津市第三中心医院肝内科
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期212-218,共7页
基金
国家自然科学基金(0840010)
文摘
构建编码人钠钾ATP酶(Na+/K+-ATPase)α1mRNA的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体shRNA-ATP1A1(ATP1A11、ATP1A12和ATP1A13),并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。设计、合成靶向ATP1A1的3对DNA序列,分别插入Pgenesil-3中构建3个shRNA表达载体,经限制性内切酶酶切和DNA测序鉴定确认。筛选并确定最佳细胞接种量及重组质粒转染量,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞荧光检测Na+/K+-ATPaseα1表达变化;MTT法和流式细胞术检测沉默效果最明显的ATP1A13对HepG2增殖活性和细胞周期的影响。构建的质粒表达载体酶切鉴定均可扩增出预期条带,测序符合设计要求,构建成功。ATP1A12和ATP1A13对所转染的HepG2细胞中Na+/K+-ATPaseα1mR-NA和蛋白质表达均有抑制作用,其中ATP1A13最为明显(P<0.05)。ATP1A13可抑制HepG2细胞的增殖;转染48和60h,HepG2细胞细胞周期呈现S期阻滞;实时定量PCR检测ATP1A13敲低HepG2Na+/K+-ATPaseα1mRNA呈时间依赖性,72h后表达降低约90%。试验成功构建靶向钠钾ATP酶α1亚单位的shRNA质粒表达载体,其中shRNA-ATP1A13可显著抑制HepG2细胞增殖引起细胞周期S期阻滞。
关键词
钠钾ATP酶
RNA干扰
HEPG2细胞
细胞周期
Keywords
Na＋/K＋-ATPase RNA interference HepG2 cell Cell cycle
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向钠钾ATP酶α1亚单位shRNA质粒表达载体的构建与筛选
周蔚
徐忠伟
王凤梅
陈小义
呼文亮
徐瑞成
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
