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题名小鼠气管平滑肌原代细胞的分离、培养与鉴定
被引量：1
- 1
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作者
叶致豪
许文豪
刘庆华
沈金花
彭勇波
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机构
中南民族大学生命科学学院医学生物研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室
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出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期364-368,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(30900816
31371307)
湖北省自然科学基金项目(2014CFC116)
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文摘
目的建立一种可靠的通过组织块贴壁法分离培养原代小鼠气管平滑肌细胞及免疫组化鉴定的方法。方法体视显微镜下立体分离小鼠气管平滑肌组织,组织块贴壁法培养原代细胞,对分离培养细胞通过免疫组化方法进行鉴定,并用MTT法对其增殖特性进行检测。结果从BALB/c雄性小鼠分离气管平滑肌组织,剪碎为1 mm3,用含1%青-链霉素的PBS及培养液漂洗,使组织块贴于培养皿底,并加入5 m L培养液,放入37℃、5%CO2的细胞培养箱培养,3~5 d后有明显梭状细胞从组织块爬出,5~6 d后,细胞可见明显＂峰-谷＂结构。经免疫荧光鉴定,在传代、纯化后,可得纯度为99%以上的气管平滑肌细胞。用MTT法测量其生长曲线。结论本方法操作简单、经济,获得的气管平滑肌细胞具有较好增殖能力,细胞数量和纯度能够满足后续细胞生物学实验研究的需要。
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关键词
气管平滑肌细胞
原代培养
组织块贴壁法
免疫荧光
MTT法
小鼠
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Keywords
Airway smooth muscle cells
SMCs
Primary culture
Tissue section adherence
Immunofluores cence
MTT assay
Mice
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分类号
Q95-33
[生物学—动物学]
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题名异莲心碱对小鼠离体气管平滑肌的舒张作用
被引量：1
- 2
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作者
刘贝贝
陈微微
张雯婧
刘庆华
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机构
中南民族大学生命科学学院医学生物研究所&武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室
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出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期920-925,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(No.81400015
No.31571200)
+1 种基金
湖北省自然科学基金资助项目(No.2013CFB455)
2019年度中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No.CZY19017)
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文摘
目的:研究异莲心碱对高K^+预收缩小鼠离体气管平滑肌(ASM)的舒张作用及其机制。方法:利用张力换能器检测异莲心碱对高K^+诱导的ASM预收缩和Ca^(2+)内流的影响;利用膜片钳技术和钙成像系统分别检测异莲心碱对ASM细胞膜L型电压依赖性Ca^(2+)通道(LVDCC)电流以及细胞内Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i)的影响。结果:异莲心碱可显著舒张高K^+预收缩的ASM,且其舒张作用呈现浓度依赖性,当浓度为100μmol/L时最大舒张比达到(95.3±3.9)%。此外,利用膜片钳全细胞记录技术测量LVDCC电流,电流可被异莲心碱完全阻断;在高K^+诱导下气管平滑肌细胞中Fura-2的340/380 nm荧光比值稳定在0.63±0.10,而异莲心碱加入后比值显著下降至0.36±0.05(P<0.01);在[Ca^(2+)]_i峰点加入异莲心碱,340/380 nm荧光比值从0.74±0.02迅速降至0.42±0.05(P<0.01);异莲心碱抑制高K^+诱导的Ca^(2+)内流引起的ASM收缩。结论:异莲心碱可阻断小鼠离体气管平滑肌细胞LVDCC电流,LVDCC介导的Ca^(2+)内流停止,[Ca^(2+)]_i降低,导致ASM舒张,提示异莲心碱可能是潜在的气管舒张剂。
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关键词
异莲心碱
气管平滑肌
L型电压依赖性Ca^2+通道
舒张
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Keywords
Isoliensinine
Airway smooth muscle
L-type voltage-dependent Ca^2+channel
Relaxation
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分类号
R363.2
[医药卫生—病理学]
R562.25
[医药卫生—呼吸系统]
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题名敲除PLAC8蛋白对人胚肾细胞增殖的影响
- 3
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作者
秦绪慧
马立群
欧阳聪
王海霞
浦易之
薛璐
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机构
中南民族大学生命科学学院医学生物研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室
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出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第6期25-29,共5页
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基金
湖北省自然科学基金一般面上项目(No.2018CFB594)
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文摘
为了构建PLAC8蛋白敲除的人胚肾细胞株(293T)并检测其对293T细胞增殖的影响,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术及流式细胞分选术构建敲除PLAC8蛋白的293T细胞株,通过基因组测序及错配酶酶切进行编辑细胞系的筛选。用筛选得到的细胞系提取细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测编辑效率。进一步通过细胞生存实验(MTT实验)检测敲除PLAC8对293T细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测敲除PLAC8蛋白后293T细胞中增殖相关基因的表达水平变化。结果表明,成功构建了PLAC8蛋白敲除的细胞系。与野生型细胞系相比,PLAC8表达下调会抑制细胞增殖,且在这一过程中AKT、RAF-1、ERK2、C-MYC等4个与增殖相关基因的蛋白水平改变,提示PLAC8可能通过AKT及RAF-1-ERK2-C-MYC这一级联通路信号调控细胞增殖。
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关键词
CRISPR/Cas9
基因敲除
PLAC8
细胞增殖
MAPK信号通路
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Keywords
CRISPR/Cas9
knockout
PLAC8
cell proliferation
MAPK signal pathway
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分类号
Q51
[生物学—生物化学]
Q71
[生物学—分子生物学]
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