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α-淀粉酶产生菌的筛选鉴定及Ba8a蛋白的酶学特性
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作者 余振 徐玉荣 +6 位作者 吴哲宽 张静怡 张小宇 俸婷 程国军 李晓华 饶雄飞 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第4期143-149,共7页
为解决农作物秸秆降解的问题,采用选择性培养基从牛胃秸秆发酵物中筛选获得1株高产α-淀粉酶的菌株,命名为SCUEC8菌株。通过对SCUEC8菌株进行形态学观察和生理生化特性分析,根据16S rDNA序列构建系统进化树,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。以S... 为解决农作物秸秆降解的问题,采用选择性培养基从牛胃秸秆发酵物中筛选获得1株高产α-淀粉酶的菌株,命名为SCUEC8菌株。通过对SCUEC8菌株进行形态学观察和生理生化特性分析,根据16S rDNA序列构建系统进化树,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌。以SCUEC8菌株的总DNA为模板扩增α-淀粉酶基因ba8a,构建pET28a(+)-ba8a重组质粒,转化大肠杆菌BL21菌株进行异源表达,进一步研究Ba8a蛋白酶学特性。结果显示,ba8a基因大小为1434 bp,Ba8a蛋白分子质量为52.9 ku;在pH 5.0、反应温度45℃条件下,Ba8a蛋白相对酶活性较高;Mn^(2+)对Ba8a蛋白酶活性具有较高促进作用,Cu^(2+)对Ba8a蛋白酶活性具有较高抑制作用;在pH6.0、反应温度0℃条件下,Ba8a蛋白较稳定。结果表明,枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株具有α-淀粉酶活性,有助于提高农作物秸秆的降解率。 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 枯草芽孢杆菌SCUEC8菌株 ba8a基因 酶学特性
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华癸中慢生根瘤菌焦磷酸硫胺素结合蛋白基因tpp的功能研究 被引量:2
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作者 吴和涛 谢婧 +3 位作者 罗莎 何冬兰 李晓华 程国军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期77-82,共6页
在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突... 在构建M.huakuii tpp基因突变株的基础上,通过自生生长和植物盆栽试验,研究焦磷酸硫胺素结合蛋白tpp基因在根瘤菌的生长及与紫云英宿主共生固氮过程中的功能。通过同源重组获得华癸中慢生根瘤菌tpp突变菌株HKtpp,并进一步研究tpp基因突变对菌株生长及共生固氮功能的影响。结果显示:tpp基因突变会减缓菌株生长,突变菌株胞内的谷胱甘肽还原酶活性显著降低。植物盆栽试验表明,突变菌株感染紫云英宿主形成有效的红色根瘤,但是其固氮酶活降低了26.4%。结果表明:tpp基因在根瘤菌的生长和共生固氮中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 华癸中慢生根瘤菌 焦磷酸硫胺素结合蛋白 tpp基因 共生固氮
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根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解代谢中agnH基因的克隆表达与纯化 被引量:2
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作者 姚家成 夏珍珍 +6 位作者 黄粤 皮婷 梅枫 何冬兰 程国军 刘涛 李晓华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期81-87,共7页
对从湖北省襄阳市烟草种植土壤中分离筛选得到的尼古丁降解菌根癌土壤杆菌SCUEC1菌株中agnH基因进行克隆表达,并对AgnH蛋白的表达和纯化条件进行优化,为解析agnH基因的功能和揭示根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解的分子机制提供理论依... 对从湖北省襄阳市烟草种植土壤中分离筛选得到的尼古丁降解菌根癌土壤杆菌SCUEC1菌株中agnH基因进行克隆表达,并对AgnH蛋白的表达和纯化条件进行优化,为解析agnH基因的功能和揭示根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解的分子机制提供理论依据。通过PCR扩增获得agnH全长基因(585bp),构建重组质粒pET28a(+)-agnH,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行异源表达,研究不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间对重组质粒pET28a(+)-agnH诱导表达的影响,用不同浓度的咪唑洗脱液洗脱重组蛋白,采用SDS-PAGE检测重组蛋白。结果表明:在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导温度为25℃且诱导时间为25h条件下,AgnH蛋白表达量较高;在250mmol/L的咪唑洗脱液洗脱下,得到浓度较高的AgnH蛋白。 展开更多
关键词 根癌土壤杆菌SCUEC1菌株 尼古丁降解代谢 agnH基因 基因克隆 蛋白表达与纯化
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