目的:观察凝血酶(thrombin,Tm)对缺氧/复氧(H/R)状态下星形胶质细胞(astrocyte,As)功能状态的影响,并探讨其作用机制。方法:将原代培养的鼠脑皮层As分为:正常对照组、Tm对照组、H/R组、Tm+H/R组、水蛭素(HR)对照组、Tm+HR+H/R组,不同方...目的:观察凝血酶(thrombin,Tm)对缺氧/复氧(H/R)状态下星形胶质细胞(astrocyte,As)功能状态的影响,并探讨其作用机制。方法:将原代培养的鼠脑皮层As分为:正常对照组、Tm对照组、H/R组、Tm+H/R组、水蛭素(HR)对照组、Tm+HR+H/R组,不同方法处理后的As采用生化方法测定上清NO含量,MTT比色法测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测iNOS mRNA和蛋白的变化。结果:H/R损伤使As NO产量增加,细胞活性下降,凋亡率升高。10kU/L的Tm可刺激H/R状态下As产生NO增加、细胞活性下降、凋亡率升高(与H/R组相比P<0.05);预先加入等量HR可抑制Tm的作用。RT-PCR和免疫细胞化学染色显示,H/R损伤激活iNOS表达,Tm刺激使H/R As iNOS表达增加,预先加入HR可抑制Tm诱导的iNOS表达。结论:Tm通过与其受体结合,上调iNOS表达,使NO产生增多,可能是其对H/R状态下As毒性作用的机制之一。展开更多
文摘目的:观察凝血酶(thrombin,Tm)对缺氧/复氧(H/R)状态下星形胶质细胞(astrocyte,As)功能状态的影响,并探讨其作用机制。方法:将原代培养的鼠脑皮层As分为:正常对照组、Tm对照组、H/R组、Tm+H/R组、水蛭素(HR)对照组、Tm+HR+H/R组,不同方法处理后的As采用生化方法测定上清NO含量,MTT比色法测定细胞活性,流式细胞仪测定细胞凋亡率,RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测iNOS mRNA和蛋白的变化。结果:H/R损伤使As NO产量增加,细胞活性下降,凋亡率升高。10kU/L的Tm可刺激H/R状态下As产生NO增加、细胞活性下降、凋亡率升高(与H/R组相比P<0.05);预先加入等量HR可抑制Tm的作用。RT-PCR和免疫细胞化学染色显示,H/R损伤激活iNOS表达,Tm刺激使H/R As iNOS表达增加,预先加入HR可抑制Tm诱导的iNOS表达。结论:Tm通过与其受体结合,上调iNOS表达,使NO产生增多,可能是其对H/R状态下As毒性作用的机制之一。
